多通道流动电泳技术及其在蛋白质、酶和抗体纯化中的应用研究

提出一种新型制备电泳方法即多通道流动电动电泳技术,建立了微机控制的电泳设备,考查了操作条件对设备分离效率的影响。应用该技术进行牛血清清蛋白(BSA)-牛血红蛋白(HBB)混合物的连续分离,每小时从含BSA、HBB备37．Omg的蛋白质混合物中分离出13．6mg的BSA和20．Omg的HBB。应用该技术进行尿激酶粗品的纯化,可将其比活力由4 000IU／mg提高到4×10⁴IU／mg以上．产量在10×10⁴IU／h以上。将该技术与(NH₄)SO- 沉淀方法结合,从15ml免疫鼠血清中分离出12．5mg高纯度尿激酶抗体IgG,产量为2．1mg／h。上述结果证明多通道流动电泳技术其有分离速度快、精度高和可操作性好等优点,在生物产品分离领域中具有广阔的应用前景。     

再生丝素固定的酶标免疫传感器的研究

所研究的酶标免疫传感器是采用再生丝素将待测抗原 (兔IgG)固定在石墨电极表面 ,选用抗体 (山羊抗兔IgG HRP)与其识别结合。利用H₂O₂ 将抗原抗体结合的电位响应信号放大采用直接电位法检测IgG的浓度。该传感器测定IgG的最低浓度可达 1.2×10^-10 mol/L ,标准曲线的线形范围在4.1×10^-7～1.2×10^-10 mol/L ,回归方程为: E=-1049+721g[IgG],响应时间为 15s。通过电泳的方法加速抗原抗体的识别结合 ,反应时间由原来的 90min缩短到 3 0min。这种以固定化抗原结合酶标抗体量的多少作为检测抗原标准的新型酶标免疫传感器 ,在临床检测、环境监测、HLA个人身份鉴定等领域都有着广阔的应用前景。     

广州地区育龄人群地中海贫血基因分型及筛查漏检误诊的原因分析

摘要 目的：了解广州地区育龄人群的地中海贫血（简称：地贫）基因携带率及基因型分布特征,分析地贫筛查的漏检和误诊原因,为育龄地贫基因携带者进行人工辅助受孕提供依据。方法：收集2019年1月到2021年12月在我院生殖医学科就诊并同时进行地贫筛查及地贫基因检测的育龄患者31455例,分析其地贫相关实验室检查结果,包括红细胞参数、红细胞渗透脆性、血红蛋白电泳及地贫基因检测,计算地贫基因携带率,并通过比较筛查和基因检测结果找出漏筛和误诊病例。结果：共检出育龄地贫基因携带者4455例,地贫基因携带率为14.16 %。其中,α-地中海贫血3365例,常见的基因型有-- ^SEA /αα、-α^3.7/αα和 -α^4.2/αα;β-地中海贫血914例,常见的基因型有β^{CD41-42(-TCCT)} /β ^N 、β^{IVS-2-654(C→T)} /β ^N 和β^-28(A→G) /β ^N ;α-合并β-地中海贫血176例,最常见的基因型是β^{CD41-42(-TCCT)} /β ^N /-- ^SEA /αα。漏筛病例有731例,多为静止型α-地贫。误诊病例有4784例,其中有2701例误诊病例其红细胞渗透脆性和红细胞参数均正常,仅因HbA2<2.5 %且HbA>97.5 %被误诊为携带地贫基因。结论：广州地区的育龄人群具有较高的地贫基因携带率,静止型α-地贫容易在筛查中被漏检。     

非连续聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定HbE及HbA2

应用非连续聚丙烯酰胺凝胶电泳成功地分离了HbE变异链(β^E)与α链、δ与 ^Gγ链,测定了20例正常人溶血液δ链的含量(1.12±0.44％)。并对1例HbE/β⁰-地贫家系4位成员的HbE和HbA₂含量进行了同时分别测定,其结果表明该方法稳定、可靠、易行。     

关于吖啶橙测定溶酶体H＋－ATPase转运H＋的研究

揭示了吖啶橙的吸收光谱和荧光光谱对其浓度依赖性上的区域性特征,分析了测定溶酶体H^＋转运时合理选用吖啶橙浓度及溶酶体用量的重要性、机理和原则,探讨了其与溶酶体的温育时间和K^＋／H^＋交换对测定H^＋转运的明显影响.     

一种测定SOD活力的新方法——碱性二甲基亚砜-鲁米诺化学发光法

本文介绍一种测定SOD(超氧化物歧化酶)活力的新的碱性二甲基亚砜——鲁米诺化学发光法。用碱性二甲基亚砜作为产生O₂^-_·体系,用鲁米诺作为指示O₂^-_·的化学发光剂,观察了不同浓度的NaOH、鲁米诺、pH、碱性二甲基亚砜加入量、测定时间及心绿染料对此法的影响。测定了山羊烟雾吸入伤后SOD活力和肺淋巴SOD清除量的变化。结果证明,本法灵敏度高、特异性强、操作简便、方法稳定,可快速、重复测定粗提取生物样品的SOD活力。     

邻苯三酚-碳酸盐缓冲液化学发光体系的研究

用化学发光法研究了邻苯三酚碱性自氧化产生O₂^-_·的发光行为.通过对测定条件的研究, 得出最佳测定方案.改进后的方法不需使用发光剂Luminol, 所用试剂价廉易得, 且方法稳定, 重现性好.此法灵敏度远高于邻苯三酚自氧化的其他文献报道法.     

鼠脑微透析液痕量氨基酸的激光诱导荧光检测

使用自制微透析探针和活动体位生化取样装置以及自行组装的毛细管电泳-增强型电荷耦合器件-激光诱导荧光系统,对鼠脑透析液中的痕量氨基酸以异硫氢酸荧光黄(FITC)进行柱前衍生后进行了分离和检测. 鼠脑海马CA₃区微透析液中游离氨基酸的浓度为10^-8～10^-6 mol/L, 并将其用于学习与记忆的研究, 为无损伤研究活体脑内神经递质和其他痕量生化物质的动态变化提供了一种新方法.     

蛋白质溶液NMR结构测定的一些新进展

新的标记技术的进展和采用稀释的液晶作为溶剂以提供额外的结构信息,提高了核磁共振技术测定蛋白质溶液三维结构的精度,扩大了分子质量测定范围.目前已经利用多维 ¹⁵N,¹³C,²H标记NMR测定了许多分子质量为30 ku左右的蛋白质溶液结构,这一上限可能还会被进一步提高.     

微生物电极快速测定微生物浓度的研究

利用前文所描述的微生物电极,测定了酵母菌、大肠杆菌和枯草杆菌三种微生物的标准曲线。其基本原理是：微生物在厌氧条件下将硫茧还原,还原态硫堇在阳极上氧化,而电流的最大上升速率与微生物的浓度成线性关系。对酵母菌、大肠杆菌和枯草杆菌的检测低限分别为5×10⁵、2×10⁶和1×10⁵ cells／ml。检测时间一般少于20min,重现性误差小于5％．本文还讨论了温度、染料浓度和磁搅拌转速等因素对微生物浓度测定的影响。     

测定OH·产生与清除的化学发光体系

一种产生和检测OH^·的化学发光体系;用抗坏血酸-Cu²⁺-H₂O₂产生OH^·,加酵母扩增化学发光,并通过对测定条件的研究,得到测定的最佳方案。所做结果证明,其体系灵敏度高、稳定性好、特异性强、操作简便、测量快速,值得推广。     

Cd2+结合肽的筛选及与重金属离子的亲和作用*

利用噬菌体随机十二肽库和亲和层析技术对重金属Cd进行亲和筛选,共获得两条Cd结合肽序列。将展示有Cd²⁺结合肽的噬菌体单克隆扩增物对不同重金属离子(Cd²⁺、Cr²⁺、Cu²⁺、Co²⁺、Zn²⁺、Ni²⁺)螯合的树脂进行亲和测定,结果表明Cu²⁺、Co²⁺、Zn²⁺、Ni^2+<     

荧光方法直接测定一氧化氮

根据2,3-二氨基萘(2,3-diaminonaphthalene,DAN)可与一氧化氮( ^·NO)反应生成荧光性2,3-萘酚三唑(2,3-naphthotriazole,NAT)和 ^·NO的气体特性,设计了一个流动气体和荧光方法相结合的 ^·NO直接测定方法.此法以惰性气体氮气为流动气体使样品中的待测 ^·NO随流动气体进入测定溶液,溶液中的DAN捕集流动气体中的 ^·NO生成荧光性NAT.实验结果表明测定溶液的荧光强度与 ^·NO浓度呈正比,与酸化亚硝酸盐溶液的浓度亦呈良好线性关系.用此方法测得五份酸化正常人血浆的 ^·NO浓度为(31.04±4.70) nmol/L,并可用于连续观察 ^·NO从亚硝基硫醇的自发释放.     

鸟氨酸脱羧酶活性微量测定法

本文采用一种简单,微量反应系统,根据 ¹⁴C-鸟氨酸释放的 ¹⁴CO₂量测定鸟氨酸脱羧酶(ODC)的活性,酶反应在置于液闪计数瓶内的玻璃小管中进行,释放的 ¹⁴CO₂被瓶内滤纸片上的海胺吸收。实验结果表明,加酸释放 ¹⁴CO₂后30分钟 ¹⁴CO₂吸收已达最大值,且吸收量与释放量成正比,酶反应测定证明 ¹⁴CO₂释放速度在40分钟内保持恒定。ODC活性与酶浓度呈线性关系,此方法不仅用于ODC活性测定,而且亦可用于其他脱羧酶活性的测定。     

用复合孔雀绿分析无机磷的改良方法

在研究酸度、钼酸钠浓度及孔雀绿浓度对显色影响的基础上,用复合孔雀绿试剂分析无机磷,该方法平行程度很好．测定10个标准管光吸收的标准差=0.0065,变异系数=1.26%,可以用于测定Na⁺,K⁺-ATP酶活力等．     

脉冲电场引起的红血球内钠离子浓度变化的研究

利用位移试剂和²³Na-NMR的方法研究脉冲电场对正常人红血球内Na⁺浓度的影响,实验结果给出在高强度电场作用下,细胞内Na⁺浓度增加,并且随脉冲强度的增加而增加,比指数关系还快.在低强度电场作用下,细胞内Na⁺浓度减少.乌苯苷能抑制细胞内Na⁺浓度的减少,抑制程度随乌苯苷浓度的增加而增强,从而证实了低强度的脉冲电场对Na⁺,K⁺-ATPase的激活作用,直接测定脉冲电场对红血球血影膜的Na⁺,K⁺-ATPase活性的影响,进一步证实了这一结果.并对在电场作用下细胞膜的通透性和电场对酶的激活作用及电场等外界物理信号是否能跨过细胞膜等进行了讨论.     

活化海绵镉微型柱层析法测定血清中一氧化氮

采用铜离子活化海绵镉微型柱层析法将血清中的硝酸盐(NO^-₃)还原为亚硝酸盐(NO^-₂),再通过Griess反应测定NO^-₃/NO^-₂总量以反应体内一氧化氮（NO）水平,从而建立血清NO间接测定新方法. 结果表明,在pH 9.7 时,活化海绵镉还原NO^-₃能力强、速度快、抗干扰性好,还原率为96.4%～100.0%,检测范围为0～400 μmol·L^-1,检测限为1.85 μmol·L^-1,相对标准偏差为2.56%～3.46%,对NO^-₃的回收率为96.4%～102.2%,对NO^-₂的回收率为95.2%～101.3%,对混合标准液的回收率为98.7%～104.4%.该方法具有简便快速、灵敏准确、样品和试剂用量小等优点,可在临床推广应用.     

有关杯碟法测定壮观霉素灵敏度的影响因素

通过对菌种、培养基种类及pH、缓冲液种类及pH培养温度、添加葡萄糖和吐温等因素的研究,确定了壮观霉素测定条件,使其测定灵敏度达0．4X10^-6。     

一种中间代谢途径代谢通量的定量分析方法

以¹³C标记的碳源,用二维核磁共振技术(¹H-¹³C,HMQC)测定代谢中产生的氨基酸标记模式,研究对中间代谢途径胞内代谢通量进行定量分析的方法.通过开发软件包,改进同位素分布的数学模型,提出了反应映射矩阵(RMM)等概念.由简化算法,提高程序的执行效率,建立了定量分析胞内代谢通量的平台.代谢模型涉及了糖酵解途径、磷酸戊糖途径、三羧酸循环、几种回补反应、发酵途径和氨基酸合成途径.     

HPLC-CAD法测定两性霉素B脂质体中HSPC、DSPG含量分析

摘要 目的：建立高效液相色谱（HPLC）-电喷雾检测器（CAD）法测定两性霉素B脂质体（L-AMB）中氢化大豆磷脂酰胆碱（HSPC）和磷脂二硬酯酰磷脂酰甘油（DSPG）含量的方法。方法：采用Venusil XBP C 8（4.6 mm×250 mm，5 μm）色谱柱，柱温：30℃；以甲醇-水作为流动相；喷雾压力：56.4 psi，喷雾温度：55℃；梯度洗脱，流速1.0 mL?min^-1。结果：L-AMB各磷脂在 5~60 mg?mL^-1内与峰面积呈良好的线性关系。HSPC平均回收率为100.06%，平均RSD为0.42；DSPG平均回收率100.03%，平均RSD为0.55。按HPLC-CAD 色谱条件测定L-AMB中HSPC、 DSPG含量分别为1497.66 mg?L^-1、4710.93 mg?L^-1，且无溶血磷脂检出。采用HPLC-ELSD 法验证，HSPC、 DSPG含量分别为1495.28 mg?L^-1、4712.71 mg?L^-1， 两种方法测定HSPC、 DSPG含量基本一致。结论：HPLC-CAD 测定L-AMB中HSPC、DSPG含量操作简单、准确，可准确测定L-AMB 中脂质体的质量。