竹红菌乙素对人红细胞Na~+-K~+ATPase和钠通透性光敏损伤的研究

本文用NMR和生化方法研究了竹红菌乙素对人红细胞膜Na~+-K~+ATPase和钠通透性的光敏损伤。结果表明:在通常情况下,可同时观察到乙素对Na~+-K~+ATPase和钠通透性的光敏损伤。比较乙素、甲素、原卟啉和胆红素对上述两项指标的光敏能力,发现乙素对Na~+-K~+ATPase损伤能力与甲素和原卟啉相当,比胆红素大,对钠通透性的损伤大于其它几种敏化剂。实验指出,Na~+-K~+ATPase活力下降比钠通透性增加敏感。在乙素光敏作用时,加入Vit E可基术上保持胞内钠离子浓度不变,但无法使Na~+-K~+ATPase活力不损伤,这表明膜磷脂的结构完整对保持胞内钠浓度比较重要。对照试验指出乙素可使Na~+-K~+ATPase暗失活,这可能是经乙素介导的,由膜还原物质向氧的电子传递生成活性氧自由基攻击靶分子所致。     

用稳态荧光探针研究竹红菌乙素光敏损伤对人红细胞膜流动性的影响

本文以红细胞膜为材料,用了三种稳态荧光探针研究了HB光敏作用引起人红细胞膜流动性的改变.实验结果表明在HB光敏作用下,膜的旋转扩散速度和侧向扩散速度均发生明显变化,ANS和DPH探针测得HB引起膜流动性降低,也就是膜粘度增加,用芘探针结果则表明膜的侧向扩散变慢.本文还对HB光敏作用的机理进行了探讨,我们观察了数种单重态氧猝灭剂,羟自山基猝灭剂和抗氧化剂对于光敏作用的影响,分别测定了膜流动性和膜的内源荧光的变化,发现在HB光敏作用中,除了~1O_2的作用之外,还存在其它自由基的作用.在HB与HA光敏能力的比较中发现,在比较高一些浓度条件下,存在着HB大于HA的趋向.     

用荧光漂白恢复技术研究竹红菌乙素在小鼠肝癌细胞内的扩散过程

利用竹红菌乙素自身的荧光特征,在ＦＰＲ装置上直接测定了乙素在ＡＨ细胞内的侧向扩散系数和荧光漂白的恢复率。实验结果表明乙素在ＡＨ细胞内的扩散系数Ｄ＝３．２×１０＾－９ｃｍ＾２／ｓ＾－１荧光漂白恢复比率Ｒ＝９７．８％,上述实验说明乙素在细胞膜内与生物大分子之间没有形成共价键形式的结合状态。     

竹红菌乙素修饰物（－乙醇胺）对于腹水肝癌细胞光敏损伤的研究

通过分红菌乙素修饰物（－乙醇胺,简称ＨＢ－Ｅ）对小鼠腹水肝癌细胞（ＡＨ）光敏损伤以及ＨＢ－Ｅ被ＡＨ细胞摄取过程的研究。结果表明,ＨＢ－Ｅ在６４０ｎｍ光照的条件下对ＡＨ细胞产生很强的光动力作用;细胞对ＨＢ－Ｅ的摄取速度快（室温下２ｍｉｎ,达到平衡）,在饱和时每个细胞可摄取ＨＢ－Ｅ分子５×１０９个;经多种竹红菌素修饰物光敏能力的比较中ＨＢ－Ｅ光敏作用明显要大于其它的光敏剂;光敏机理的研究中确定了活性氧的作用是存在的。     

类卟啉稀土配合物对于小鼠腹水肝癌细胞光敏损伤的研究

研究了类卟啉稀土配合物（以下简称ＰＬＭ—Ｇｄ—Ａ）对小鼠腹水肝癌细胞（ＡＨ）的光敏作用及ＡＨ细胞对ＰＬＭ一Ｇｄ—Ａ的摄取表明：ＰＬＭ－Ｇｄ－Ａ被ＡＨ细胞摄取的速度快（大约１０ｍｉｎ可达到平衡）,用ＭＴＴ方法测定了细胞光敏存活曲线,杀伤细胞的能力与光照时间和光照强度以及ＰＬＭ—Ｇｄ的浓度密切相关,用ＦＡＤＵ方法和电镜观察结果证明：该光敏损伤细胞的靶主要是在细胞核;对于不同稀土离子配合物光敏能力比较表明：Ｇｄ＞Ｅｕ＞Ｓｍ;造成细胞死亡的原因包括１Ｏ２、在内的活性氧。     

竹红菌乙素溴化物对HeLa细胞形态结构的光敏损伤

以离体培养的ＨｅＬａ细胞为材料,用激光共聚焦显微镜,多动能图像分析仪,扫描电镜,透射电镜,荧光分光光度计等研究了一种新型的竹红菌乙素修饰物（５—Ｂｒ—ＨＢ）被ＨｅＬａ细胞摄取的时间进程、药物在细胞内的显微定位以及对细胞形态结构的光动力损伤。结果表明：ＨｅＬａ细胞对５—Ｂｒ—ＨＢ摄取在１小时之内细胞内药物浓度随着药液培养时间的增加呈线性增长,３小时后摄取基本达到饱和。ＨｅＬａ细胞在含１０μｍｏｌ／Ｌ５—Ｂｒ一ＨＢ培养基中３７℃温育半小时后,敏化剂主要分布在细胞膜和胞浆中。受光动力损伤的细胞膜丧失连续结构,绒毛丧失,细胞表面出现异形突起。加药并光照５分钟组细胞浆内产生大量空泡,线粒体、内质网等细胞器丧失结构完整性,在较高浓度下甚至出现明显的细胞膜破裂和核膜损伤。光动力敏化对核形态产生明显的损伤作用,表现为Ｎ／Ｃ和ＮＡ减小,ＮＦＦ增大。     

星形神经胶质细胞摄取谷氨酸与环境因子和离子运输的关系

本文以星形神经胶质细胞为对象,用同位素示踪技术较详细地研究了介质中Na、、K~+和CL~-、不同浓度的卡因酸以及几种抑制剂对L-谷氨酸摄取的影响;并观察了L-谷氨酸对星形神经胶质细胞膜运输Na~+、K~+、Cl~-和Ca~(2+)等的作用.结果表明:L-谷氨酸的摄取依赖于介质中是否存在Na~+ ,在缺Na~+介质中对Cl~-的依赖性也较明显,但在正常Na~+浓度下,含Cl~_和缺Cl~_没有明显差别.当增加介质中K~+浓度引起膜的去极化时,则能降低L~_谷氨酸的摄取.反过来,L-谷氨酸的摄取也对Na~+、K~+、Cl~-等的运输起刺激作用.此外,卡因酸及所用的几种抑制剂对谷氨酸的摄取办有明显抑制作用.     

Changes of intracellular Na~ concentration in erythrocytes caused by pulsed electrical field

Changes of sodium ionic concentration of human erythrocytes applied to pulsed electrical field (PEF) were studied by using shift reagent and NMR spectroscopy. The results show that the concentration of intracellular Na increases with the increasing intensity of PEF when the erythrocytes are applied to PEF with higher intensities. The relationship between intracellular Na concentrations and the intensities of PEF does not follow linear or exponen-tial behavior. As the intensities increase, the intracellular Na concentrations increase even faster by an exponential curve. However under effects of PEF at lower intensities, intracellular Na concentration decreases. Ouabain can in-hibit the decrease of intracellular Na concentration, and the inhibition increases with the increasing concentration of ouabain, suggesting that Na , K -ATPase on cell membrane can be activated by PEF at lower intensities. Direct measurement of activities of the enzyme by using Malachite green method has confirmed this observatio     

酪氨酸水溶液的闪光光解

酪氨酸和其他两种芳香族氨基酸——色氨酸和苯丙氨酸构成了各种蛋白质的生色团,它们是蛋白质吸收光能的主要部位,从这个意义上讲,生色团氨基酸的光解反应是了解蛋白质光化学的基础。虽然对酪氨酸水溶液的早期闪光光解研究就已表明光电离是主要的原初过程,但是直到近年来的激光光解研究才使我们对光电离的机制有了一些了解。酪氨酸的光解可以用下面的反应式表示:在碱性条件下(pH>9),酪氨酸酚基上的OH基解离,形成负离子,其光电离由反应式(2)表示:光解反应的原初产物对位α-氨基丙酸苯氧自由基缩写为(?)yr)的产生是经过单光子过程还是双光子过程?很多作者研究了这个问题,目前仍然存在一些分歧。所谓单光子过程,是指分子吸收一个高能光子后直接电离,或者形成的激发态迅速分解。而在双光子过程中,光解产物的形成经过两个步骤:吸收第一个光子后分子跃迁到一个中间态,然后中间态分子再吸收第二个光子而电离。本工作用闪光光解方法直接观察了原初光解产物(?)yr的产额与闪光绝对强度(即每次闪光射入样品池的光子数)的依赖关系,并结合理论分析,说明酪氨酸在碱性水溶液中的光电离是单光子过程,而在中性或弱酸性水溶液中是双光子过程。本工作还证实在碱性水溶液中酪氨酸原初光解产物(?)yr的产额与水合电子的产额相等,从而说明在碱性条件下光电离是产生(?)yr的几乎唯一的途径。除此之外,我们还对光解产生(?)yr的量子产额,这个瞬态产物的摩尔消光系数及其衰变的速率常数进行了测定。