发现新的“快速激肽”

自从七十年代确定P物质(SP)结构以来,对它的生理功能进行了大量研究,认为它很可能是一种中枢神经介质。但近年来发现,SP的前体除生成SP以外,还可生成K物质(SK)和neuromedin K(NK),它们的化学结构相似,都属于“快速激肽”,所作用的受体也大同小异。因此,从前被认为是SP的功能,实际上可能是SK或NK的作用。Ivesen等曾提出激肽受体不止一种,至少有P和E两种,SP和physalaemin以及eledoisin和kassinin分别作为二者的配基。新肽SK和NK可与E型受体结合,而且其激动作用似乎较SP更强。最近,在外周组织中又发现了另一种激肽受体——K受体,SK可能是其最适配基。激肽受体的多样性及内源性激肽的陆     

生长抑素基因有结构变异

生长抑素(SS)是具有广泛生理活性的14肽(S14),已在人及鼠、鱼等的几种组织内确认了其前体分子、并发现了SS的另一活性形式S28。通过cDNA核苷酸序列分析,在anglerfish及鲐鱼胰内分泌组织均发现有两种SS mRNA,分别对应121肽及125肽的SS前体分子;但在人和鼠的内分泌瘤组织仅发现有一种cDNA,编码116肽的前生长抑素原。美国德州大学CJ Su等新近又从牛胰提取出前生长抑素原的cDNA,据此编码出的116肽SS前体分子的一级结构与其它哺孔类SS前体极其近似,但有少数氨基酸差异。通过Nothern印渍法分子杂交,在胎     

心房肽基因

<正> 心房利钠因子(ANF)发现以后,许多实验室陆续分离出了具有ANF活性的多肽,并测定了其氨基酸序列。ANF有大分子和小分子形式。大分子肽代表ANF前体(或称原),其一级结构已确定,如图1所示。人ANE前体包含151个氨基酸残基,大鼠ANF前体多一个氨基酸,分子量为16556道尔顿。这个肽链有至今报告的所     

大熊猫生长激素受体(GHR) cDNA 的克隆与序列分析

根据已报道的若干物种GHR 基因cDNA 序列设计引物, 利用RT- PCR 技术首次从大熊猫肝脏组织总RNA中扩增出GHR 基因编码区全长cDNA 序列, 克隆于pGEM®-T 载体后进行测序和序列分析。结果表明,大熊猫GHR 的ORF为1 917 bp , 编码638 个氨基酸的前体蛋白, 由18 个氨基酸的信号肽和620 个氨基酸的成熟肽组成,与人、狗、猪GHR 结构相似, 大熊猫GHR 成熟肽由246 个氨基酸的胞外区、24 个氨基酸的跨膜区和350 个氨基酸的胞内区组成, 并具GHR 的特征性结构。序列相似性比较显示, 大熊猫GHR 与哺乳类GHR 具有69 %～93 %的高序列相似性, 与爬行类和鸟类的序列相似性也达到60 % , 而与鱼类的序列相似性较低, 仅为30 %左右。与其它哺乳动物GHR 相比, 大熊猫GHR 在氨基酸序列上也存在明显的特异性。     

嗜铬蛋白可能是一种激素原

Tatemoto 等报道了一种胰源肽的氨基酸顺序及其生物学活性,该肽具有抑制葡萄糖诱导胰腺分泌胰岛素的作用,被称为胰腺抑制素(pancreastatin)。他们认为这种肽可能属于一种至今尚未被阐明的肽类族。不久以后,Huttner 等又发现该肽与嗜铬蛋白的氨基酸顺序有相似处。牛嗜铬蛋白 A 第251～294残基之间,     

发现胰多肽家族一个新成员:酪甘肽

神经肽Y(NPY)与酪酪肽(PYY)是近年来分别从猪的大脑和小肠分离和提纯出来的两种新的肽类激素,尽管它们与胰多肽(PP)产生并分布在体内不同的组织,但由于结构和生理功能与胰多肽相似,被认为是来源于同一原始基因的胰多肽家族的成员。最近,美国Purdue 大学生化系P.C.Andrews 等报道,从一种华脐鱼的胰腺内分泌组织中提取和分离出一种新的肽类物质,分子量为4221.3,含有37个氨基酸残基,并已确定其氨基酸顺序。由于此物质氨     

两种新的候补激素——组异肽和酪酪肽

肽类激素的发现过程,大多是先观察到粗的组织提取物中具有生物学活性,其次,进一步用生物学方法分离提纯粗制品,得到纯品激素,再后,确定激素分子结构。晚近,瑞典生化学家 Mutt 与 Tatemoto 等根据许多肽类激素都含有 C-端酰胺结构这一特性,独具匠心,设计出一种寻找肽类激素的化学新方法。即在组织提取物中先找寻含有 C-端酰胺结构的肽节段,然后用酶学方法测出 C-端及 N-端的氨基酸残基序列,最后,确定激素的分子结构。这种创造性工作,为探寻新的肽类激素开辟了广阔的道路。他们用这种方法,已经在猪的上段小肠中发现了几种以前不为人所知的肽类新激素。其中有两个,即组异肽和酪酪肽,皆是在提纯胰泌素时获得的副产品中找寻到的。组异肽(The peptide with N-terminal histidine and C-terminal isoleucine,简称 PHI),含有27个氨基酸残基。其 C-端序列为亮-异亮-NH_2,N-端序列为组-丙-门冬-甘-缬-苯丙-苏-,与胰泌素、血管活性肠肽(VIP)、胰高血糖素、肠抑胃肽(GIP)相似,属于胰泌素-胰高血糖素家族。初步观察到,它     

北极狐GHR基因cDNA的克隆及序列分析

本文根据狗(AF133835)的GHR基因cDNA编码全序列设计了三对引物,利用RT-PCR方法克隆出北极狐GHR基因编码区全长cDNA序列(GenBank accession No.EU304325)。结果表明,北极狐GHR的ORF为1917bp,编码638个氨基酸的前体蛋白,由18个氨基酸的信号肽和620个氨基酸的成熟肽组成。通过同源性比较发现北极狐与狗的同源性最高,达到98%。另外,利用邻接法(NJ法)构建的分子系统进化树聚类结果表明,北极狐与狗先聚为一类,该聚类结果与传统的物种进化关系基本一致。另外,通过氨基酸对位序列比较发现,北极狐GHR在氨基酸序列上存在明显的特异性,如45和451位分别为A和E,而其它物种均分别为T(大鼠为K)和A(牛羊为V,鼠为T)。     

棉铃虫单核衣壳核多角体病毒组织蛋白酶基因的序列分析和进化研究

对棉铃虫单核衣壳核多角体病毒(HaSNPV)的组织蛋白酶(ν-cath)基因进行了序列分析,此基因编码区长1098bp,预计编码一个366个氨基酸的蛋白产物.序列分析表明,HaSNPV的V-CATH蛋白与其它杆状病毒的同源蛋白具有相似的保守结构并保留有相同的酶活性位点,根据已知的杆状病毒组织蛋白酶序列构建了ν-cath基因的进化树,发现HaSNPV的ν-cath位于NPV组中一个单独的分枝,结合ν-cath基因在棉铃虫病毒基因组中的位置与其它NPV有较大不同,推测HaSNPV的ν-cath基因可能拥有特殊的进化历程.     

内含肽介导的生物学效应及其应用

蛋白质翻译产物在成熟过程中剪切释放出来的一段氨基酸序列称为“intein”---即内含肽。它与前体蛋白以框内融合的形式共同翻译,并内嵌于前体蛋白序列中。内含肽的解离以及内含肽两侧氨基酸序列的连接是在内含肽自身催化作用下完成的。本文将从内含肽的发现、结构特征和作用机理等方面对这种具有特殊意义的蛋白质成熟机制进行较为全面的论述,同时介绍了近年来发展起来的以内含肽介导的蛋白质剪接为基础的蛋白质纯化和改造技术。     

花鳗鲡脑cDNA文库的构建及GnRh日基因克隆与表达分析

以花鳗鲡脑组织为材料,提取总RNA,应用CloneminerTM文库构建试剂盒构建cDNA文库.经检测,文库的滴度为4.3×106 cfu/mL,总容量为5.16×107cfu/mL,阳性克隆率为99.6%,插入片段0.43-3.2kb之间,平均插入片段大小为1532bp.以文库为模板,克隆获得花鳗鲡两种类型的促性腺激素释放激素(mGnRH和cGnRH-Ⅱ)cDNA序列.序列分析表明,花鳗鲡mGnRH cDNA开放阅读框(ORF)包含276个碱基,编码91个氨基酸,其中包括22个氨基酸的蛋白质前体信号肽(1-22位氨基酸)、mGnRH十肽(23-32位氨基酸)、一个三肽裂解位点(33-35位氨基酸)和56个氨基酸的GnRH相关肽(36-91位氨基酸);花鳗鲡cGnRH-Ⅱ cDNA开放阅读框包含264个碱基,编码87个氨基酸,其中包括24个氨基酸的蛋白质前体信号肽(1-24位氨基酸)、cGnRH-Ⅱ十肽(25-34位氨基酸)、一个三肽裂解位点(34-36位氨基酸)和50个氨基酸的GnRH相关肽(37-87位氨基酸).序列同源性分析表明,花鳗鲡mGnRH、cGnRH-Ⅱ cDNA与日本鳗鲡之间的相似性率高达98%;与鲑形目、鲈形目、鲽形目鱼类的相似率为73%-78%;而与鲤形目鱼类的相似性相对较低(63%-67%).采用RT-PCR方法分析了两种GnRH基因在花鳗鲡雌雄个体中的表达,结果表明两基因在雌雄个体的组织表达模式无明显差异;但mGnRH基因在雌雄个体内表达部位多于cGnRH-Ⅱ的.     

蛋白质的自剪接

1990年,Ｈｉｒａｔａ等在酵母液泡膜Ｈ -ＡＴＰａｓｅ的α亚基(ＶＭＡ1)中首次发现了蛋白质自剪接(ｐｒｏｔｅｉｎｓｅｌｆｓｐｌｉｃｉｎｇ)现象。此后,蛋白质剪接现象陆续在古细菌、真细菌及真核细胞中被发现。1994年Ｐｅｌｅｒ等对蛋白质自剪接进行了规范化定义和命名:(1)将按正确阅读框架插入到前体蛋白氨基酸序列中,但在蛋白剪接成熟过程中被切除的序列称为蛋白内含肽(ｉｎｔｅｉｎ)。处于ｉｎｔｅｉｎ两侧,相互首尾相连以产生成熟蛋白产物的蛋白序列称为蛋白外显肽(ｅｘｔｅｉｎ)。(2)蛋白质剪接是在蛋白质水平上,而不是在ＲＮＡ水平…     

聚肽在骨组织工程领域的研究进展

聚肽是20种α-氨基酸中的一种或者几种氨基酸通过酰胺键(肽键)联成的长链分子,此外还包含有其它非肽链结构的组成成分,具有和蛋白质类似的二级结构.由于其独特的结构和性能,近年来在组织工程领域聚肽被广泛地研究和应用,主要被用作生长因子、支架材料表面改性物以及支架材料.从以上3个方面介绍了近年来聚肽在骨组织工程领域的研究和应用情况,并对聚肽在骨组织工程研究领域的应用前景进行了展望.     

真菌细胞色素P450在大肠杆菌中的表达

【背景】真菌细胞色素P450蛋白在大肠杆菌中表达水平低甚至不表达,近期研究发现通过对该类蛋白氨基端(N端)氨基酸序列的修饰可优化其表达水平。【目的】在大肠杆菌系统中表达预测功能为P450酶的焦曲霉094102菌株的Au8002蛋白,为真菌P450蛋白在大肠杆菌表达系统中的N端氨基酸序列修饰策略提供有效依据。【方法】对野生型P450蛋白Au8002的氨基酸序列进行分析,对其N端序列进行了3种序列修饰,并在诱导蛋白表达时添加P450生物合成前体5-氨基乙酰丙酸(5-ALA),研究N端氨基酸序列修饰策略及前体添加对真菌P450在大肠杆菌中蛋白表达的影响。【结果】SDS-PAGE和Westernblot检测结果显示,对目的蛋白进行的3种氨基酸序列修饰均使Au8002蛋白获得了表达,前体5-ALA的添加提高了目的蛋白表达量。其中对目的蛋白进行N端全长截短时可部分增加其可溶性,同时也验证了其特征性的CO结合能力。【结论】对预测为P450酶的菌株094102蛋白Au8002氨基端(N端)氨基酸序列的修饰有效解决了其在大肠杆菌内不表达的难题,实现了其可溶性表达;另一方面P450生物合成前体5-ALA的添加也能有效提高该类蛋白的表达水平,上述策略对改善其它该类蛋白在大肠杆菌内的表达水平具有借鉴意义。     

前体蛋白转化酶家族的重要成员之一：弗林蛋白酶

弗林蛋白酶(Furin)是前体蛋白转化酶家族的重要成员之一,广泛存在于各种组织和细胞系中。Furin经过两次自剪切去掉前肽后具有生理活性,能够识别特定的氨基酸序列并在TGN中对多种前体蛋白进行加工。Furin的作用底物不仅包括神经肽和肽类激素,还包括许多生长因子、受体、血浆蛋白酶、基质金属蛋白酶及细菌外毒素等,具有重要的生物学功能。     

三角帆蚌组织蛋白酶L基因的克隆和序列特征与进化分析

组织蛋白酶L在多种生理过程中具有重要作用.根据本实验室构建的三角帆蚌(Hyriopsis cumingii)cDNA文库中已标注的EST序列,利用RACE方法克隆了三角帆蚌组织蛋白酶L基因的cDNA全序列(GenBank登录号为HQ610996).结果表明,该序列全长为1 105 bp,包括24 bp的5'-末端非转录区,1 002 bp的开放阅读框和79 bp的3'-末端非转录区,共编码333个氨基酸,包含1个由20个氨基酸组成的信号肽.推测的三角帆蚌组织蛋白酶L前体肽具有组织蛋白酶前体抑制因子功能结构域,具有组织蛋白酶L家族高度保守结构基序ERFNIN[E-X3-R-X2-(I/V)-F-X3-N-X3-I-X3-N]、GNFD和GCXGG;该蛋白的半胱氨酸类蛋白酶半胱氨酸、组氨酸和天冬氨酸活性位点均高度保守.同源性分析表明,推测的三角帆蚌组织蛋白酶L氨基酸序列与其他贝类高度保守,同源性在60%-74%之间.进化分析显示,三角帆蚌组织蛋白酶L与其他贝类组织蛋白酶L聚为一支,在该支中,三角帆蚌与软体动物淡水螺(R.peregra)的亲缘关系最近.本研究结果为进一步研究三角帆蚌组织蛋白酶L的生理功能提供基础资料.     

发现能及时修复创伤的神经传递物质

P 物质(也称神经激肽A 或神经调节素L),是50年以前就已从哺乳动物脑和肠中提纯的一种多肽,属速激肽类物质。1971年以前尚未确定其结构,以后才知道P 物质广泛分布于中枢神经和周围神经系统,包括初级感觉神经,在脊髓感觉神经元向其他神经元传递皮肤感觉中起作用。瑞典卡洛林卡研究所的埃尔松博士等发现,P 物质和同其结构非常相似的K 物质能从受到痛觉刺激的     

泥鳅角蛋白18(K18)基因的克隆与表达分析

角蛋白18(K18)是角蛋白的一种,为中间纤维蛋白,是细胞骨架的组成部分。为了解泥鳅(Misgurnus anguillicaudatus)K18序列特征及其在不同组织中的表达,研究采用3'-和5'-RACE法克隆K18基因c DNA全长序列,并运用实时荧光定量PCR技术探讨其在不同组织中的表达。结果表明,泥鳅K18基因c DNA全长序列1 694 bp,其中包含开放阅读框1 299bp,编码432个氨基酸,其序列具有Ⅰ型角蛋白序列DGKVVS,以及非常相似序列DNA(R/K)LAADDF。相似度分析显示,泥鳅K18与大鳞副泥鳅(Paramisgurnus dabryanus)的相似度最高为98%,与其它物种K18也存在不同程度的相似度。系统进化分析表明,泥鳅与其他物种的K18系统发育同源,且同陆生脊椎动物和硬骨鱼类同源,并与大鳞副泥鳅的关系最为密切。通过定量分析,K18基因在泥鳅肠、肌肉、心脏、胃、肝脏、精巢、卵巢、脾脏等8种组织都有表达,其中,肠表达最高,心脏最低。统计学分析表明,K18基因的表达在不同组织间存在显著性差异。     

一个新的东亚钳蝎毒素(BmKT_1)全长cDNA的克隆和分析

首先构建了东亚钳蝎毒腺组织 c DNA文库 ;根据已知的东亚钳蝎哺乳动物毒素氨基酸序列保守区设计引物 ,并用 PCR从 c DNA文库中扩增出一个 c DNA片段作为筛选 c DNA文库的探针 ;从 c DNA文库中筛选到二个编码同一个新的蝎毒素多肽的 c DNA,它们除 3′- UTR外 ,其余序列完全一致 .它们均含有 2 55bp长的开放阅读框 ,编码 85肽的前体毒素 ,包括 1 9个氨基酸残基的信号肽 ,66个残基的成熟毒素 (命名为 Bm KT1) ;Bm KT1氨基酸序列与已知的蝎毒素具有较大的同源性 ,与 Bm KM1,Lqq ,Lqhα IT和 Bm K M10 的同源性分别为 77%、67%、67%和 65% .Bm KT1的 C端不存在末端修饰步骤且具有一个与这些毒素不相同的特征结构 ,即在末端延伸了两个氨基酸残基 - P- S,推测 Bm KT1具有新的活性功能特征 .     

黄鳝cGnRH-Ⅱ的cDNA克隆与序列分析

促性腺激素释放激素（Conadotropin-releasing hormone,GnRH）是一个保守的十肽神经家族激素,在脊椎动物的性腺发育和繁殖功能的维持方面起着重要的调控作用。本文通过运用RACE和RT-PCR方法,从黄鳝脑组织中克隆得到cGnRH-ⅡcDNA全序列,其核苷酸序列长度为617bp。该cDNA编码的cGnRH-Ⅱ的前体氨基酸序列结构组成与其他物种的cGnRH-Ⅱ前体结构一致,其推导的蛋白前体长度为83个氨基酸,包括一个信号肽、cGnRH-Ⅱ十肽和一个由蛋白水解位点（Gly—Lys—Arg）连接的GnRH联接肽,其中信号肽和联接肽的长度分别为21和49个氨基酸。cGnRH-Ⅱ的氨基酸序列和其他相关物种cGnRH-Ⅱ氨基酸序列比较结果显示,cGnRH-Ⅱ cDNA的蛋白编码区高度保守,而非编码区的保守性程度很低。