交变脉冲电场凝胶电泳分离染色体DNA分子

交变脉冲电场凝胶电泳是一种可用来分离染色体大分子DNA的新的凝胶电泳方法。通过交替采用两个不同方向的不均匀电场,使DNA分子在挤过凝胶筛孔时不断改变方向,从而获得大分子DNA的高分辨率电泳。本文报道用自行设计的交变电场电泳仪进行脉冲电场凝胶电泳分离酵母染色体DNA,可分成11个条带。用自身连接的lDNA作为分子量标准物,可分出14个条带。     

用脉冲电场凝胶电泳分析棉病囊霉及其突变体的染色体DNA

采用交变脉冲电场凝胶电泳和碱变性交变脉冲电场凝胶电泳方法,分析了棉病囊霉酵母菌及其2个不同的突变菌株的核型,得知此菌株含有5条染色体 DNA,而2株突变体的染色体 DNA 都没有大片段的缺失或双链断裂,但其稳定性不如野生型菌株的 DNA,而且存在单链断裂等碱不稳定性位点.     

酵母(Sacchar omyces cerevisiae)的PFG电泳核型比较分析

我们用脉冲式梯度电场凝胶电泳技术,对一些啤酒酵母菌进行了电泳核型分析,比较了不同菌的染色体DNA电泳核型的异同。通过用染色体专一探针做Southern杂交,找出第Ⅰ—ⅩⅥ染色体DNA在PFG电泳图谱中的分布规律,并对一些特殊的电泳和分子杂交现象进行了讨论。     

研究核酸-蛋白质系统的-种凝胶电泳方法

核酸蛋白质相互作用是生命科学研究的中心课题之一,凝胶电泳是研究核酸和蛋白质的常用技术。本文试图介绍一种研究核酸-蛋白质系统的凝胶电泳方法,以及该法在研究基因表达、调控和鉴定、分离DNA结合蛋白中的应用。     

植物染色体原位杂交技术及其在稻属研究中的应用

本文介绍了植物染色体原位杂交技术,以及该技术在稻属特定DNA序列定位、基因组间关系、外源染色体鉴定等研究中的应用.     

交变脉冲电场凝胶电泳与植物大分子DNA的制备

介绍了交变脉冲电场凝胶电泳的原理、方法及其在植物大分子DNA制备方面的应用。     

Red重组技术研究进展

主要从Red系统组成元件、作用机理、重组策略以及先进性和发展前景四个方面综述了利用Red 重组系统敲除或替换细菌染色体目的基因的方法。首先简要介绍了传统的细菌染色体重组技术,指出了其中的缺陷。然后提出了Red重组技术的定义：利用噬菌体Red系统介导来实现外源线性DNA片断与细菌染色体的靶基因进行同源重组的方法,外源线性DNA通常是PCR产物、寡核苷酸片断等,在它们的两翼各含有与染色体靶基因两翼同源的序列40~60bp。这种Red重组技术省去了体外DNA酶切和连接等步骤,使细菌染色体靶基因的敲除与替换操作相对简单,逐渐成为基因功能探索以及新菌株构建的有力手段。     

电泳技术新进展

1985年9月10日至20日美国哥伦比亚大学人类遗传学和发育学系主任Charles R.Cantor教授及夫人应我所邀请在上海进行了访问讲学。在此期间共举行了五次讲座,并在脉冲梯度电场(Pulse Field Gradient即PEG)凝胶电泳训练班上示范了实验操作。讲座的主要内容为脉冲梯度电场凝胶电泳。这个方法是由Schwartz和Cantor设计发明的,能够分离染色体DNA大分子。到目前为止,已经分离了酵母     

脉冲电泳用于确定念珠菌染色体数目和大小的研究

念珠菌(Candida),特别是白念珠菌是临床上最常见的机会致病真菌。欲了解它们的生物学本质及致病的分子机制,首先应清楚其基因组的基本结构。用脉冲场凝胶电泳(pulsed field gel electrophoresis,PFGE)技术分离了8种念珠菌共187株的染色体DNA,获得各种菌染色体数目和大小的数据。这些数据为深入研究致病酵母的分子生物学特征打下基础,同时也可作为种间基因型分类的可靠依据。     

基因工程

960001 用次级脉冲场凝胶电泳分离大分子DNA[英]/Lai,E.…∥Anal. Biochem. -1995,224(1).-68～74[译自DBA,1995,14(7),95-03698] 报道了用次级脉冲场凝胶(SPFG)电泳在不降低分辨率的情况下提高大分子DNA的分离速度。然而,重复SPFG条件的试验却没有成功。于是人们试图精确限定次级脉冲对分离大分子DNA的作用,以确定该技术用于分离分子量最大为1100kb     

用垂直凝胶脉冲电泳分离染色体DNA

脉冲电场凝胶电泳(PFGE)是近几年发展起来的一种分离高分子DNA片段(50—10000kb)的有效方法。包括正交场,六边形场,反向场和垂直胶脉冲电泳。本文改进了垂直胶脉冲电场(TAFE)的条件,使酵母DCo4染色体电泳核型从11条带提高到14条。利用TAFE鉴定了蛋白酶消化法和TLS法制备的人基因A,其分子长度主要分布在200—450kb。     

中美有机磷杀虫药剂抗性库蚊复合种群酯酶基因扩增的研究(英文)

用脉冲电场凝胶电泳技术,从北京和美国加州的有机磷杀虫药剂抗性库蚊复合品系中分离出一条49kb的酯酶基因扩增片段。该片段可能是一个完整的扩增单元,也是迄今分离出的最大的一条昆虫酯酶基因扩增片段,扩增基因结构的研究正在进行之中。本文还重点讨论了DNA大片段的制备方法和脉冲电场电泳分离技术。     

乳链球菌Z270乳糖－蛋白酶质粒pUCL22的消除及其整合

用简单的温和法消除乳链球菌Lactococcus lactis sub sp．Lactis Z270的乳糖-蛋白酶质粒pUCL22(54kb)。DNA普通琼脂糖凝胶电泳图和生化检验证明,变异菌株D16和D17的质粒pUCL22被消除了。脉冲电泳图表明,D16的染色体限制酶图谱与野生菌Z270的相似,但D17的染色体被质粒的蛋白酶基因多位点整合,从而改变了其染色体限制酶的酶切图。     

染色体分选技术在植物学研究中的应用

介绍了染色体分选技术的基本原理和样品处理的基本流程,对根尖分生区采用同步化处理,制备染色体悬浮液,最后通过流式细胞仪的分析与收集获得纯度高、数量多的目标染色体。综述了染色体分选技术在植物学研究中的主要应用,包括物理图谱的构建、DNA分子标记的开发、以及复杂多倍体植物的基因组测序等。通过染色体分选技术的不断完善与发展,应用于染色体分选的探针标记不断开发,以及分选后的染色体DNA纯化和扩增技术的优化,将为多倍体植物如甘蔗等基因组学研究提供更有效的帮助。     

小麦蓝矮植原体染色体DNA的分离

[目的]分离小麦蓝矮(WBD)植原体染色体DNA,并建立WBD植原体染色体分离纯化体系.[方法]采用差速离心和脉冲电泳(PFGE)方法富集纯化WBD植原体染色体DNA,并通过PCR和Southern blot进行检测验证,实时荧光定量PCR方法对分离纯化效果进行定量检测.[结果]脉冲电泳凝胶中出现一条大小约为650 kb的条带,经PCR检测和Southern blot分析表明该条带为WBD植原体的染色体DNA.实时荧光定量PCR检测结果表明采用差速离心与脉冲电泳结合的方法可以将WBD植原体基因组的相对拷贝数提高436.5倍.[结论]采用差速离心与脉冲电泳法结合可以有效地从感染WBD长春花中分离到纯的WBD植原体染色体DNA,WBD植原体染色体DNA大小约为650 kb.     

红色红曲菌M7核型分析与桔霉素、色素基因簇的染色体定位

以红色红曲菌Monascus ruber M7菌株为研究对象,对其核型进行分析,并将桔霉素与色素合成基因簇定位于染色体。通过原生质体制备,以脉冲场凝胶电泳进行核型分析。在此基础上,通过Southern杂交将桔霉素与色素合成基因簇定位于染色体。脉冲场凝胶电泳结果显示,红色红曲菌M7包含大小依次为4.9,4.3,3.7,3.4,3.0,2.3,2.1Mb的7条(I-VII)染色体,基因组大小约为23.7Mb。Southern杂交结果表明,桔霉素合成基因簇位于第IV条染色体上,色素合成基因簇位于第V条染色体上。     

采用基因组测序技术进行胚胎种植前遗传学筛查的方法学研究及应用

目的采用第三代测序技术(NGS),对辅助生殖种植前的胚胎进行染色体非整倍性筛查,以提高移植胚胎的质量和试管婴儿的成功率。方法首先采用接受试管婴儿技术治疗不孕症的夫妇多余的正常囊胚进行方法学研究。采用多重置换扩增法扩增细胞基因组DNA。在此基础上对一对不孕症夫妇的囊胚进行检测,并指导囊胚选择。结果正常囊胚DNA抽提后,琼脂糖凝胶电泳显示扩增的DNA产物质量符合要求。文库构建后进行测序,数据结果显示为正常样本。在成功建立方法的基础上,选择的囊胚发育良好,成功孕育健康胎儿并导致健康婴儿出生。结论 NGS是一个可靠的胚胎染色体非整倍性筛查技术。该方法具有通量高、可自动化等优点,可以提高异常染色体的诊断水平。     

质粒pBR322在recA基因缺陷的大肠杆菌细胞内的遗传重组

使用琼脂糖凝胶电泳、DNA限制性内切酶水解以及电子显微镜等分析手段,证明在两株recA~-的大肠杆菌质粒pBR322转化子中,pBR 322 DNA的多倍周长环形寡聚物被大量合成。这个事实说明质粒pBR322 DNA在大肠杆菌细胞中的遗传重组似有独立于rec A基因的途径。本文介绍一个改进的大肠杆菌“清亮裂解液”制备法。按照这个方法制备的细菌清亮裂解液可排除染色体DNA的污染。     

ERIC-PCR及其指纹图谱技术的研究

肠杆菌基因间重复共有序列（Enterobacterial repetitive intergenic consensus,ERIC）是主要存在于肠道细菌中的一类基因间重复序列,长度为127 bp,该序列在肠道细菌染色体上的分布和拷贝数有种间的特异性。根据ERIC序列建立的ERIC-PCR实际上是一种半随机性质的PCR,广泛应用于细菌分型、流行病学调查和分子微生态学研究。本文简介了ERIC-PCR反应的特点及其应用的原理,详细阐述目前广泛应用的ERIC-PCR琼脂糖凝胶电泳（PCR-PCR-AGE）技术的不足,指出该方法所获电泳图谱中相同位置的DNA条带可能包括不同的DNA序列,指纹图谱分析时可能夸大模板DNA的相似性。强调ERIC-PCR变性梯度凝胶电泳（PCR-PCR-DGGE）技术是其应用的一个新方向,所得的指纹图谱能够更加敏感、准确、有效地展示底物序列的差异,其中的DNA条带不需测序就可直接用于科研和生产实践中。     

粟酒裂殖酵母染色体DNA的脉冲电泳分析

采用等高锁状均质电场（CHEF）凝胶电泳技术,对来自中国微生物菌种保藏委员会普通微生物中心的粟酒裂殖酵母（Schizosaccharomycespombe）菌株AS2.214进行染色体DNA分析。CHEF电泳结果显示菌株AS2.214的4条染色体DNA的分子大小分别约为5900kb、3200kb、2500kb和550kb,基因组大小约为12000kb。供试菌株AS2.214第Ⅰ条染色体DNA为5900kb与已研究报道的菌株972h和HM248（5700kb）的基本一致,第Ⅱ条染色体DNA（3200kb）和第皿条染色体DNA（2500kb）,分别较上述2个菌株约小1400kb和1000kb,第Ⅳ条染色体DNA的分子大小与部分非整倍体菌株HM248的极微染色体Ch16DNA相近（500kb）。研究结果表明粟酒裂殖酵母菌株间染色体DNA长度存在显著差异,菌株AS2.214可能是三倍体减数分裂所产生的稳定的部分非整倍体。