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两种非放射性标记方法在染色体原位杂交中敏感性的比较 总被引:1,自引:0,他引:1
通过原位杂交比较了地高辛配基和生物素标记探针,检测染色体单拷贝基因的敏感性。结果表明:在打点检测条上地高辛配基可检出30fg低限探针DNA,生物素为1pg。经原位杂交地高辛配基可检测出单拷贝基因,生物素未成功。 相似文献
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热启动PCR快速制备地高辛标记探针 总被引:7,自引:0,他引:7
介绍了一种在热启动PCR中,以Dig-11-dUTP部分代替dTTP,从少量基因组DNA中快速制备大量的地高辛标记的探针的方法,此探针灵敏度达0.03pg,并只和相关的DNA特异杂交. 相似文献
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《微生物学免疫学进展》2016,(2)
目的对地高辛标记DNA探针杂交法检测人用狂犬病疫苗(Vero细胞)DNA残留量进行适用性验证及应用。方法对地高辛标记DNA探针杂交法检测人用狂犬病疫苗(Vero细胞)DNA残留量进行特异性、灵敏度及稳定性验证,并应用该方法检测3批人用狂犬病疫苗(Vero细胞)的DNA残留量。结果地高辛标记探针的标记效率为0.1 pg。验证结果显示探针与非同源DNA无杂交;最低检测限度为1 pg;探针在-20℃放置7个月后,检测灵敏度仍可达到1 pg;3批人用狂犬病疫苗(Vero细胞)中残留DNA含量均符合《中国药典》规定质量控制标准。结论地高辛标记DNA探针杂交法特异性、灵敏度好,结果稳定,适用于人用狂犬病疫苗(Vero细胞)中Vero细胞DNA残留量的检测及疫苗生产过程和其成品的质量控制,对其他以Vero细胞为基质的病毒性疫苗质量控制具有借鉴意义。 相似文献
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用地高辛标记探针在人染色体上进行了基因定位。使用了酶显色和荧光显色,两者得到了相同的定位结果,特异区阳性率分别为11.6%和19.8%’荧光显色特异性较高,说明基因定位效果受显示系统效率的影响,地高辛标记探针用于基因定位有比放射性探针、生物素探针更多的优越性。又讨论了几个影响效果的因素,提出以SDC代替甲酰胺洗涤;紫外照射于杂交前R显带方法能取得较好的基因定位效果。 相似文献
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将生物素标记的DNA探针用于菌落原位杂交,结合链霉菌抗生物素蛋白和生物素碱性磷酸酶系统检测显示信号。结果证明该法快速方便,杂交信号清晰,高度特异,完全可以取代同位素用于细菌分析和克隆筛选。 相似文献
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地高辛标记探针原位杂交检测细胞IL-6受体mRNA表达 总被引:1,自引:0,他引:1
地高辛标记探针原位杂交检测细胞IL-6受体mRNA表达张贺秋,郭宁,任蕴芳,毛宁(北京军事医学科学院基础医学研究所100850)地高辛标记核酸探针技术是80年代末才发展起来的一种新型的非同位素标记技术,具有灵敏度高、特异性强的优点。我们将地高辛配基标... 相似文献
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磁珠法分离特异 mRNA 总被引:2,自引:0,他引:2
以生物素标记的单链 DNA 为探针和 mRNA 液相杂交,再由带抗生物素蛋白的磁珠捕获已杂交的 mRNA,建立了快速、简便捕获特异 mRNA 的方法.磁珠的捕获率为 70.4%,洗脱率为 78.6%,mRNA 的总回收率为 55.2%. 相似文献
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荧光原位杂交技术在染色体结构研究中的应用 总被引:3,自引:0,他引:3
1969年 Gall和 Pardue首先用同位素标记的 RNA探针定位特定的靶 DNA序列 ,开创了原位杂交技术 ,但同位素探针的高背景限制了它对靶序列的精确定位 ,随后发展了一系列非同位素方法 ,最初有生物素探针 ,用荧光素标记亲合素 ,酶联反应或胶体金检测 ,其他包括乙酰氨基荧光素 ( AAF) ,汞 ,地高辛 ( DIG)和 2 -三硝基酚等。荧光原位杂交 ( fluorescence in situ hybridiza-tion FISH)技术就是指将 DNA探针用特殊修饰的核苷酸分子标记 ,通过原位杂交与靶染色体或 DNA上特定的序列结合的方法学 ,靶染色体通常固定在载玻片上 ,杂交结果用荧… 相似文献
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地高辛配基标记核酸技术及其应用 总被引:11,自引:0,他引:11
刘妙良 《生物化学与生物物理进展》1992,19(1):34-36
核酸探针通过地高辛配基(异羟基洋地黄毒苷配基)标记的脱氧尿嘧啶核苷三磷酸(Dig-dUTP)随机引物插入结合而被标记,然后辅以免疫酶化学检测等新技术。和放射性同位素标记探针一样,它已广泛用于核酸等物的各种探测及分析,具有灵敏、安全、简便、经济及实用等优点。 相似文献
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通过生物素与亲和素-酶复合物系统或地高辛与抗地高辛-酶复合物系统可把酶间接标记到探针上.Renz等通过不同的化学方法直接把酶标记到探针上[1~3].耐热性碱性磷酸酯酶FD-TAP(thermostablealkalinephosphatase)具有耐... 相似文献
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本研究用克隆的HCMV AD169株DNA片段,制备了生物素标记的DNA探针,建立了检测临床脐带血、尿标本中HCMV DNA的核酸探针杂交方法。该探针可测出100pg同源DNA,不与人胚肺细胞、Hep-2细胞DNA以及其他疱疹病毒的DNA发生反应。用核酸杂交方法检测了30份脐带血标本,有11例阳性,阳性率为33%。10例孕妇尿标本中,3例阳性,阳性率为30%。检测结果表明:我们建立的生物素标记的HCMV DNA探针的点杂交法,具有高度的特异性、敏感性,比分离病毒法更迅速,可用于HCMV感染的临床标本的病毒核酸检测。 相似文献
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建立PCR-微孔板杂交-ELISA法检测人血清标本中巨细胞病毒DNA。将5’端标记生物素的PCR扩增产物与5’端标记地高辛的探针呈液相混合,90℃ 2min,55℃,1min杂交。杂交后产物被链霉亲和素酶标板固定,经酶标记抗地高辛标记抗体结合显色。本试剂检测灵敏度为2.5×104 copies/mL,比传统PCR和ELISA敏度性高,特异性强,与单纯疱疹病毒Ⅰ型和Ⅱ型,风疹病毒、EB病毒、腺病毒核酸无交叉反应,批内CV为8.9%,批间CV为10.5%。该法可用于定性和定量检测HCMV DNA。 相似文献
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PCR-微孔板杂交-ELISA法检测巨细胞病毒感染 总被引:3,自引:0,他引:3
建立PCR-微孔板杂交-ELISA法检测人血清标本中巨细胞病毒DNA.将5'端标记生物素的PCR扩增产物与5'端标记地高辛的探针呈液相混合,90℃ 2min,55℃,1min杂交.杂交后产物被链霉亲和素酶标板固定,经酶标记抗地高辛标记抗体结合显色.本试剂检测灵敏度为2.5×104 copies/mL,比传统PCR和ELISA敏度性高,特异性强,与单纯疱疹病毒Ⅰ型和Ⅱ型,风疹病毒、EB病毒、腺病毒核酸无交叉反应,批内CV为8.9%,批间CV为10.5%.该法可用于定性和定量检测HCMV DNA. 相似文献
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应用荧光原位杂交技术中的染色体涂染法,以生物素标记的除Y染色体外的人全部整务染色DNA特异性探针与黑叶猴的中期分裂相杂交,建立了人与黑叶猴之间的染色体同源性。除人的1,2,6,16和19号染色体特异探针分别与黑叶猴的2条非同源的染色体杂交外,其余人染色体特异探针与黑叶猴的1条染色体杂交,其中有两对人染色体特异探针分别杂交同一条黑叶猴染色体。 相似文献
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目的:体外转录合成银松素合酶(PS)基因地高辛标记反义RNA探针。方法:通过双酶切把PScDNA全长序列接到pBlueskriptⅡKS( )的多克隆位点上;同时,经由NCBI比对确定PScDNA的特异序列,设计含有SalⅠ和XbaⅠ这2个酶切位点的上、下游引物,用PCR法扩增含有该位点的目的片段,并连接到pBlueskriptⅡKS( )的多克隆位点上;最后利用pBlueskriptⅡKS( )上的启动子T7,用T7RNA聚合酶在体外转录合成地高辛标记PS全长及特异序列的反义RNA探针。结果:通过对构建探针的单、双酶切,PCR及电泳鉴定,表明成功合成了PS基因地高辛标记的全长及特异序列的反义RNA探针。结论:RNA探针的合成为后续马尾松PS基因表达的RNA原位杂交研究打下了基础。 相似文献
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应用荧光原位杂交技术中的染色体涂染法(Chromosomepainting),以生物素标记的除Y染色体外的人全部整条染色体DNA特异性探针与黑叶猴的中期分裂相杂交,建立了人与黑叶猴之间的染色体同源性。除人的1、2、6、16和19号染色体特异探针分别与黑叶猴的2条非同源的染色体杂交外,其余人染色体特异探针均与黑叶猴的1条染色体杂交,其中有两对人染色体特异探针(14和15,21和22)分别杂交同一条黑叶猴染色体。在雌性黑叶猴的单倍染色体中,共检测到30个与人染色体具同源性的染色体和染色体片段。结果表明:黑叶猴的多数染色体与人染色体有高度同源性,仅有少数染色体发生了重排。将研究的结果与已报道的人染色体特异探针与其他灵长类的中期染色体杂交的结果进行比较,可以看出亚洲叶猴之间的相互关系较与非洲叶猴的更为密切。 相似文献
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用~(32)P和生物素标记的克隆化的人巨细胞病毒(HCMV)AD169株DNA片段作探针,采用DNA-DNA斑点杂交法,对照检测了27例婴儿肝炎综合症患者(血清学检测为非甲非乙型肝炎者)临床血、尿标本的HCMV-DNA。其中16份血标本呈阳性,占59%;9份尿标本呈阳性,占33%。初步结果表明,血标本中HCMV DNA检出率比尿标本检出率高26%。标记的~(32)P探针可检测10pg同源DNA,生物素探针可检测50Pg同源DNA,均不与其它疱疹病毒及未感染的人胚肺细胞DNA杂交。将其中26份血标本的HCMV DNA杂交结果与抗HCMV IgM ELISA检测结果相比较,符合率为65%。 相似文献