β-Agkistrodotoxin的聚合与异构体观察

中国江浙产短尾蝮蛇突触前神经毒素(β₁-Agkistrodotoxin,β₁-AgTx)经制备电泳被进一步纯化.经SDS-PAGE鉴定, 观察到天然β₁-AgTx以及经电泳纯化获得的碱溶β₁-AgTx-OH^-成分在电泳图谱上出现的聚合谱带, 然而这些聚合谱带的含量似乎并不随时程的延长而明显地增强.另经双向电泳分析发现, 无论是天然的β₁-AgTx或经电泳纯化获得的碱溶β₁-AgTx-OH^-成分均含有三个具有不同等电点(pI 7.0, 5.8和5.4)及不同含量比例的异构体谱带.天然β₁-AgTx中三个异构体的含量比并不随时程延长而明显改变, 碱溶β₁-AgTx-OH^-成分中的三个异构体的含量比则随着时程的延长而发生显著的变化.     

粘虫颗粒体病毒增效因子的分离纯化及其生化性质

粘虫颗粒体病毒经０．０２ｍｏｌ／ＬＮａＯＨ碱溶,先用ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－２００凝胶过滤层析柱从病毒蛋白粗提中分离增效因子,然后选用ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＣＬ－６Ｂ离子交换层析柱进一步纯化增效因子,得到少量电泳纯的增效因子蛋白样品。     

不同代龄SME-1细胞和南方鲶上皮组织同工酶的初步分析

以不同代龄的ＳＭＥ－１细胞和南方鲶为材料,用聚丙烯酰胺圆盘电泳对ＬＤＨ、ＭＤＨ、α－ＥＳＴ、β－ＥＳＴ和ＳＯＤ同工酶进行了分析。２月龄和１２月龄个体上皮组织中仅α－ＥＳＴ和ＭＤＨ有明显差异,后者酶活力较高。个体和ＳＭＥ－１细胞仅少数谱带一致,多数酶谱明显不同,ＳＭＥ－１细胞中酶谱较少。不同代龄ＳＭＥ－１细胞酶谱有差异,酶活力随着细胞代龄的增加而升高。本文为ＳＭＥ－１细胞的研究及其在细胞生物学、生物工程等方面的应用提供了生化资料。     

人血红素加氧酶同工酶的分离纯化初报

首次报道了人肝脏血红素加氧酶的同工酶的分离纯化,并初步探讨了它们的性质,采用ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｄｅｘＡ－２５和羟基磷灰石柱层析法从人肝脏分离纯化ＨＯ的同工酶,酶活性检测、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析结果显示,人肝脏微粒体含量ＨＯ的同工酶,按洗脱先后顺序分别得到分子量为３００００和３６０００的ＨＯ－１和ＨＯ－２．酶促反应中需相同辅酶参与,其中酶活性ＨＯ－１明显高于ＨＯ－２,两之比为２．４：１,从分子量和     

噬菌体ψHAU3的cos位点及其与寄主相互作用的功能位点attP和attB的…

ψＨＡＵ３是寄主范围很广的放线菌噬菌体。Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交实验表明,ψＨＡＵ３可以整合到吸水链霉菌应城变种１０－２２和变铅青链霉菌６６的突变体ＺＸ１的染色体中,形成溶原,其溶原菌自发释放ψＨＡＵ３,不受热激和紫外线照射的诱导。通过比较ψＨＡＵ３衍生噬粒ＰＩＪ８３００的ＤＮＡ酶切片段的中热前、后电泳带谱的区别,将ψＨＡＵ３的ｃｏｓ位点在ＰＩＪ８３００的图谱上得到了定位。还利用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交的     

典型涡鞭毛虫（Zooxanthella microadriatica）含有多种染色质碱…

以往的研究都表明涡鞭毛虫类不含真核细胞普遍具有的组蛋白,而仅含１－２种分子量较小、含量较低和碱性较弱的染色质碱性蛋白。但我们采用自己建立的先固定后抽提的方法从典型涡鞭毛虫Ｚｏｏｘａｎｔｈｅｌｌａ ｍｉｃｒｏａｄｒｉａｔｉｃａ获得了多种碱性蛋白成分。经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析,其中有六条带的迁称铉分别十分接近地对应着小牛胸腺的五种组蛋白（Ｈ１有两条亚带）。另外迁移率在Ｈ１与Ｈ３之间的三条互相靠近的电泳带     

IL-1β对正常和自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞iNOS基因转录调控因子的影响

用ＩＬ－１β处理体外培养的ＳＨＲ和ＷＫＹ大鼠血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）,比较两种大鼠ｉＮＯＳ基因表达活性的变化,Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ结果表明,ＶＳＭＣ受ＩＬ－１β刺激后,两种细胞的ｉＮＯＳ基因均表现出极高的转录活性,并且ＳＨＲ的ｉＮＯＳｍＲＮＡ水平高于ＷＫＹ大鼠．以大鼠ｉＮＯＳ基因转录调控区上游６００ｂｐ（－１０３７～－４３８）和下游５００ｂｐ（－４３７～４６）ＤＮＡ片段为探针,与ＶＳＭＣ核蛋白孵育后,进行凝胶电泳迁移率改变分析（ＥＭＳＡ）,结果显示,两种大鼠的ＶＳＭＣ被ＩＬ－１β处理后,其核蛋白可分别与转录调控区上游或下游序列结合形成一条电泳滞后带．但是,转录调控区上游序列和下游序列与核蛋白形成的复合物具有明显不同的电泳迁移率．与ＷＫＹ大鼠相比,ＳＨＲ的ＶＳＭＣ核蛋白与ＤＮＡ结合活性较高．提示ＳＨＲ的ＶＳＭＣｉＮＯＳ基因及其转录调控因子对ＩＬ－１β的反应与ＷＫＹ大鼠明显不同．     

^15N标记蛋白GAL4（62）的2D NMR实验

利用自编的脉冲程序,采用预饱和和自旋锁定对水峰进行双重抑制的方法,得到了＾１５Ｎ标记蛋白ＧＡＬ４（６２）的２Ｄ＾１Ｈ－＾１５ＮＨＳＱＣ、ＨＳＱＣ－ＮＯＥＳＹ、ＨＳＱＣ－ＴＯＣＳＹ谱,并对这几个谱在蛋白质＾１Ｈ谱的归属中所到的作用作了讨论。     

地衣芽孢杆菌β—甘露聚糖酶的纯化及其性质的研究

地衣芽孢杆菌１Ｂａｃｉｕｕｓ Ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）ＢＬ－３０６产生的胞外β－甘露聚糖酶经硫酸铵分级盐析,ＤＥＡＥ－纤维素柱层析。Ｓｅｐｈａｄｅｘ－Ｇ１００柱凝胶过滤和ＤＥＡＥ－纤维素柱再层析分离纯化,得到ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）均一样品。用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测得纯化后β－甘露聚糖酶分子量为２６０００道尔顿。用凝胶等电聚焦电泳（ＰＡＧＥＩＥＦ）测得等电点ＰＩ为５．０。该酶     

用pKKH质粒在大肠杆菌中表达HuIFN－β

应用ＤＮＡ重组技术,将ＨｕＩＦＮ－β基因插入到质粒ｐＫＫＨ的ｔａｃ启动子下游,转化大肠杆菌ＪＭ１０１和ＪＭ１０３,经ＩＰＴＧ诱导,表达ＨｕＩＦＮ－β,收集并裂解细菌,用Ｗｉｓｈ－ＶＳＶ系统细胞病变抑制法检测生物学活性为２．１８×１０８－８．７×１０８ＩＵ／Ｌ菌液。经初步纯化ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳可见分子量为２０ＫＤ较纯的表达带。     

重组人血清白蛋白在Pichia pastoris中的表达与纯化

为实现重组人血清白蛋白（ｒＨＳＡ）的开发,对构建的酵母工程菌Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ ＧＳ１１５／ＨＳＡ进行了表达条件的优化,摇瓶中将表达ｒＨＳＡ的量提高到１５０ｍｇ／Ｌ。经中空纤维柱浓缩、Ｐｈｅｎｙｌ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ分离和抗ＨＳＡ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ亲和层析纯化获得电泳纯的重组人血清白蛋白。     

菠菜铁型超氧化物歧化酶的纯化及性质

用聚丙烯胺梯度凝胶电泳法检测出菠菜ＳＯＤ同工酶谱带中含３条Ｆｅ－ＳＯＤ活性带,菠菜叶Ｆｅ－ＳＯＤ粗提取液经硫酸铵分部沉淀,ＤＥＡＥ－纤维素－Ａ５２和ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００柱层析,纯化出单一的Ｆｅ－ＳＯＤ活性带,纯化酶的分子量为４２．６ｋＤ,亚基分子量为２１ｋＤ。对金属元素的分析表明,该酶每分子含２．６个Ｆｅ原子,该酶紫外区最大吸收峰为２７８ｎｍ,等电点为４．６,氨基酸组成和其它来源的Ｆｅ－ＳＯ     

大熊猫乳酸脱氢酶同工酶H4的分离纯化和某些性质的研究

采用８－（６－氨己基）－氨基－５－ＡＭＰＳｅｐｈａｒｏｓｅ亲和层分析法和ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ离子交换层析法从大熊猫心肌中分离纯化出乳酸脱氢酶同工酶Ｈ４,纯化的大熊猫ＬＤＨ－Ｈ４,比活为４４５Ｕ／ｍｇ蛋白,经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ,ＡＰＧＥ,等电聚焦电泳鉴定均为一条带,其亚基分了量为３６０００,等电点为５．４５。经测定大熊猫ＬＤＨ－Ｈ亚基Ｎ端被封闭,Ｃ端氨基酸残基经测定为Ｌｅｕ。氨基酸组成分析表明     

地衣芽孢杆菌β—甘露聚糖酶的纯化及酶学性质

地衣芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ）ＮＫ－２７菌株发酵产生的β－甘露聚糖酶（β－ｍａｎｎａｎａｓｅ）经硫酸铵盐析沉淀,两次ＤＥＡＥ纤维素和Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－１００离子交换柱层析以及制备ＰＡＧＥ等步骤,获得了凝胶电泳均一的样品。用ＳＤＳ－凝胶电泳测得纯化后的β－甘露聚糖酶分子量为２６ｋＤ,用凝胶聚焦电泳测得等电点Ｐ１为５．０。酶反应的最适ｐＨ为９．０,最适温度为６０℃,稳     

不同代龄SME—1细胞和南方鲶上皮组织同工酶的初步分析

以不同代龄的ＳＭＥ－１细胞和南方鲶为材料,用聚丙酰胺圆盘电泳对ＬＤＨ、ＭＤＨ 、α－ＥＳＴ、β－ＥＳＴ和ＳＯＤ同工酶进行了分析,２月龄和１２月龄个体上皮细胞中仅α－ＥＳＴ和ＭＤＨ有明显差异,后者酶活力较高。     

甲基单胞菌Methylomonas sp.GYJ3中甲烷单加氧酶还原酶组分的纯化和性质

Ｍｅｔｙｌｏｍｏｎａｓｓｐ．ＧＹＪ３菌的甲烷单加氧酶（ＭＭＯ）粗酶提取液经ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＣＬ－６Ｂ阴离子交换层析、ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００凝胶过滤层析和ＤＥＡＥ－ＴＳＫｇｅｌＨＰＬＣ分离纯化出ＭＭＯ还原酶组分．经ＨＰＬＣ分析,纯度大于９５％,纯化倍数为４．４,加入至ＭＭＯ羟基化酶和调节蛋白Ｂ的体系中表现比活为２２８ｎｍｏｌ环氧丙烷每分钟毫克蛋白．ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳表明还原酶由一种亚基组成,分子量４２ｋＤ．ＩＣＰ－ＡＥＳ测定还原酶的Ｆｅ含量为１．８３ｍｏｌＦｅ每ｍｏｌ蛋白．ＵＶ－Ｖｉｓ光谱表明还原酶除２８０ｎｍ蛋白质特征峰外在４６０ｎｍ有最大吸收峰,且Ａ２８０ｎｍ／Ａ４６０ｎｍ为２．５０,与其它黄素一铁硫蛋白相似,推测还原酶可能含一个ＦＡＤ辅基和Ｆｅ２Ｓ２中心．在厌氧条件下,还原酶能够和ＮＡＤＨ作用,ＵＶ－Ｖｉｓ光谱分析表明还原酶４６０ｎｍ处特征吸收峰消失,说明在ＭＭＯ催化过程中还原酶接受ＮＡＤＨ的电子．ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＣＬ－６Ｂ阴离子交换层析分离出调节蛋白Ｂ,部分纯化的调节蛋白Ｂ的分子量大约在２０ｋＤ,它能够提高ＭＭＯ比活性４０倍,ＭＭＯ还原酶和调节蛋白Ｂ单独存在时不具有ＭＭＯ     

人绒毛膜促性腺激素β－亚基在中国仓鼠卵巢细胞中的表达

本文以哺乳动物细胞表达载体ｐＳＶ２－ｄｈｆｒ为运载体，构建了受控于ＳＶ４０早期启动子β－ｈＣＧ基因的表达载体，转染ＣＨＯ－ｄｈｆｒ－细胞后，挑选ＣＨＯ（ｄｈｆｒ－）细胞，结果表明β－ｈＣＧ不仅在细胞中表达，还分泌到培养液中。通过氨甲喋呤（ＭＴＸ）加压后，表达量逐渐提高，０．１μｍｏｌ／ＬＭＴＸ条件下培养液中β－ｈＣＧ最高表达量可达到１．５μｇ／１０６细胞·２４小时。经亲和层析获得纯的重组β－ｈＣＧ，其分子量与天然制品一致，放射免疫测定的免疫原性为天然制品的８４．９％。     

噬菌体φHAU3的cos位点及其与寄主相互作用的功能位点attP和attB的定位

ＨＡＵ３是寄主范围很广的放线菌噬菌体。Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交实验表明,ＨＡＵ３可以整合到吸水链霉菌应城变种１０－２２和变铅青链霉菌６６的突变体ＺＸ１的染色体中,形成溶原,其溶原菌自发释放ＨＡＵ３,不受热激和紫外线照射的诱导。通过比较ＨＡＵ３衍生噬粒ｐＩＪ８３００的ＤＮＡ酶切片段在加热前、后电泳带谱的区别,将ＨＡＵ３的ｃｏｓ位点在ｐＩＪ８３００的图谱上得到了定位。还利用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交的方法定位了ＨＡＵ３与宿主形成溶原时附着位点（ａｔｔＰ）,并利用脉冲电泳技术定位了在变铅青链霉菌ＺＸ７和吸水链霉菌应城变种１０－２２中形成溶原的附着位点（ａｔｔＢ）。这些信息均有利于以ＨＡＵ３为基础的载体的发展和优化。     

短距乌头根的两个新二萜生物碱

从短距乌头（Ａｃｏｎｉｔｕｍ ｂｒｅｖｉｃａｌｃａｒａｔｕｍ Ｄｉｅｌｓ）的根分离到两个新的二萜生物碱：短距乌碱丁（ａｃｏｂｒｅｔｉｎｅ Ｄ, Ⅰ）和短距乌碱戊（ａｃｏｂｒｅｔｉｎｅ Ｅ, Ⅱ）,通过光谱技术（ＩＲ, ＭＳ, １Ｈ 和１３Ｃ－ＮＭＲ）和化学方法确定了它们的结构。短距乌碱丁最初以盐酸盐的形式分得,利用１Ｈ－１ＨＣＯＳＹ 和１３Ｃ－１Ｈ ＣＯＳＹ 归属了其盐的各碳和氢的化学位移值     

马尾松毛虫核型多角体病毒包涵体的表面增强拉曼光谱研究

获得了马尾松毛虫核型多角体病毒（ＤｐＮＰＶ）包涵体在Ａｇ胶中的ＳＥＲＳ谱。包涵体是通过膜蛋白的ＣＯＯ－和ＮＨ２基团吸附在Ａｇ表面上,Ｔｒｐ和Ｐｈｅ残基侧链接近Ａｇ表面,Ｔｙｒ残基侧链远离Ａｇ表面,ＳＥＲＳ谱中没出现ＡｍｉｄｅⅠ和ＡｍｉｄｅⅢ带。强的低波数谱带（２３８ｃｍ－１）的出现表明包涵体与Ａｇ表面发生了明显的化学吸附。