鸡传染性法氏囊炎病毒分子生物学进展

鸡传染性法氏囊炎病毒分子生物学进展赵轶暹,黄海波,郑明（中国兽药监察所,北京１０００８１）１简介鸡传染性法氏囊炎病毒ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓＢｕｒｓａｌＤｉｓｅａｓｅＶｉｒｕｓ（ＩＢＤＶ）可引起鸡的急性传染病,感染雏鸡法氏囊组织,杀伤Ｂ淋巴细胞,其它淋巴...     

Apoptin的分子生物学基础及作用特点

Ａｐｏｐｔｉｎ是由鸡贫血病毒编码的一种小分子蛋白,它以非Ｐ５３依赖性途径诱导不同类型人肿瘤细胞的凋亡,采用Ｂｃｌ－２的抑制作用,令人感兴趣的是Ａｐｏｐｔｉｎ不诱导人类正常细胞的凋亡,但当正常细胞被病毒转化后则易受Ａｐｏｐｔｉｎ诱导的凋亡,这些特性使得Ａｐｏｐｔｉｎ很可能成为一种极具潜力的抗肿瘤生物制剂。     

从鸡IBDV中分离和提纯dsRNA

上海交通大学农学院生物技术研究所孙建和等 4人在实践和研究中发现鸡传染性法氏囊病病毒 (IB DV)不纯。它的基因组由含A、B两个节段的双链RNA组成 ,属于双RNA病毒科 ,研究发现病毒基因组被 1个 1.4 85× 10 - 2 0 g的蛋白环绕 ,它通过磷酸二酯键与基因片段的 5′端共价。此蛋白对病毒RNA分离有很大影响。鉴于此 ,研究者和作者们应用蛋白酶K消化法和Trizo1(异硫氰酸胍 酚 氯仿法 )处理从感染IBDV鸡法氏囊中分离出的IBDVdsRNA ,并比较了 2种纯化方法获得的dsRNA的质量和产量。同时 ,对所获得的dsRNA用ET PCR扩增IBDV基因…     

一种可诱导细胞凋亡的鸡贫血病毒蛋白

鸡贫血病毒（ＣＡＶ）是一种全球性的禽传染病的病原。为环状单链ＤＮＡ,大小为２．３ｋｂ,是圆环病毒科的成员。ＣＡＶ基因组包含了３个部分或完全重叠的基因。ＣＡＶ可通过细胞凋亡使胸腺细胞及人工培养的转化型单核细胞产生致命的细胞病变（ＣＰＥ）。在转化的（鸡）细胞中,ＶＰ３基因的编码产物凋亡素可以造成凋亡,而这种效应不依赖于ｐ５３,且不受凋亡抑制蛋白Ｂｃｌ－２及ＣｒｍＡ的抑制。令人注目的是,凋亡素能使人肿瘤     

国外鸡传染性支气管炎病毒分子生物学研究进展

国外鸡传染性支气管炎病毒分子生物学研究进展江国托,卢景良,康丽娟（中国农业科学院哈尔滨兽医研究所,哈尔滨）鸡传染性支气管炎（ＡｖｉａｎＩｎｆｅｃｔｉｏｕｓｓｒｏｎｃｈｉｔｉｓ,ＩＢ）是由鸡传染性支气管炎病毒（ＡｖｌａｎＩｎｆｅｃｔｉｏｕｓＢｒｏｎｃｈ...     

A putative NES mediates cytoplasmic localization of Apoptin in normal cells

Chicken anemia virus (CAV) is a small non-envelopedvirus containing a single-stranded circular DNA genome.The virus causes a disease in the newborn chickens, whichis characterized by generalized lymphoid atrophy, increasedmortality and severe anemia. CAV …     

鸡贫血病毒哈尔滨分离株全基因克隆和序列分析

通过PCR方法克隆了从哈尔滨分离的一株鸡贫血病毒(CAV)的全基因,并对其进行了测序,该病毒基因组为环状,全长2298bp,含有三个互相重叠的开放读码框和一个调控区。将克隆的基因与GenBank收录的CAV基因比较,同源性至少为97%,未发现与本次克隆的CAV基因完全一致的分离株。与德国分离株Cuxla、26p4和马来西亚分离株分别有42、42和72个核苷酸不同,同源性分别为98.2%、98.2%和96.9%。与德国分离株Cux1b相比,除在调控区内少一个类似增强子的重复序列外,尚有39处核苷酸不同。它与分离于欧洲的几株CAV的亲源性要比来自亚洲的马来西亚株近。对CAV哈尔滨分离株、26p4、Cux1b、Cux1a和马来西亚株的VP1、VP2和VP3蛋白比较,VP2的保守性最高。     

鸡传染性法氏囊病病毒超强毒株GX8/99株的致病性

鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)超强毒株GX8/99,系1999年从广西一自然发病鸡群采集到.用原始病鸡法氏囊悬液连续3次人工感染SPF鸡后,再取其法氏囊制备悬液,分装,在-70℃保存.以此悬液经卵黄囊接种10日龄SPF鸡胚,测定鸡胚的半数致死量(ELD50).随着鸡的日龄和接种剂量的不同,其致死率有很大差异.对28～30日龄SPF鸡,病毒接种量为200个ELD50时,感染后7日内死亡率最高可达73%～90.5%(11/15和19/21);感染量为20个ELD50时,死亡率亦可达53%～92%(8/15和23/25).以500个ELD50感染28～104日龄的SPF鸡,死亡率均在55.1%～67.2%;甚至113～120日龄的SPF鸡,感染后仍有10%～15%致死率.但128日龄的SPF鸡感染后既不引起死亡也不表现任何症状,但抗体全部转阳.人工接种发病死亡的鸡,其法氏囊的出血程度也随感染量和年龄而异.50日龄鸡接种2000个ELD50后,死亡的鸡100%(12/12)法氏囊严重出血;而40日龄鸡感染200个ELD50后,死亡鸡中仅17%(3/18)发生出血.在2、3、4周龄带有母源抗体的商品代蛋鸡,以2000个ELD50病毒接种后,只引起10%(2/20)、35%(7/20)和35%(7/20)的死亡率.但在5周龄商品代蛋鸡,仅接触感染的致死率可达61.3%(98/160).另一批商品代蛋鸡,在4周龄和5周龄人工接种200个ELD50病毒后,死亡率分别是81.6%～94.3%(62/76～33/35)和93.9%～94%(31/33～47/50).通过总共1200多羽鸡的试验表明,GX-8/99株是一个超强毒IBDV毒株,表现为高死亡率(最高可达94%),易感年龄延长至4月龄,中枢性免疫器官法氏囊出血严重和胸腺明显萎缩.     

实时荧光定量PCR技术在SPF鸡四种垂直传播疾病监测中的应用

目的探讨荧光定量PCR检测技术对SPF鸡四种垂直传播病毒的检测应用。方法采集60份SPF鸡及70份普通鸡群蛋清、泄殖腔试子样品,提取样品核酸,分别进行ARV、REV、CAV、ALV四种病毒实时荧光定量PCR检测,根据标准曲线及溶解曲线分析判读样品病毒拷贝数。结果 SPF鸡ALV 2份阳性,检出率3.3%,其余病毒检测均为阴性;普通鸡样品REV检测2份阳性,检出率2.9%,ALV 10份阳性,检出率14.3%。结论荧光定量PCR检测方法最低可检测到100个拷贝核酸,检测灵敏度较高,有望应用于SPF鸡临床样品的病原检测。     

Synthesis of reassortant infectious bursal disease virus in chickens injected directly with infectious clones from different virus strains

The infectious bursal disease virus (IBDV), a member of the Birnaviridae family, containing a bisegmented double-stranded RNA genome, encodes four structural viral proteins, VP1, VP2, VP3, and VP4, as well as a non-structural protein, VP5. In the present paper, the segment A from two IBDV strains,field isolate ZJ2000 and attenuated strain HZ2, were inserted into one NaeⅠ site by site-directed silent mutagenesis and subcloned into the eukaryotic expression plasmid pCI under the control of the human cytomegalovirus (hCMV) immediate early enhancer and promoter to construct the recombinant plasmids pCI-AKZJ2000 and pCI-AKHZ2, respectively. Each of the two recombinants was combined with another recombinant pCI plasmid containing the marked segment B of strain HZ2 (pCI-mB), and injected intramuscularly into nonimmunized chickens. Two chimeric IBDV strains were recovered from the chickens. Two out of eight chickens in each of two groups showed the bursal histopathological change. The reassortant virus derived from pCI-AKZJ2000/pCI-mB can infect chicken embryos and shows relatively low virulence. We have developed a novel virus reverse genetic approach for the study of IBDV. The results also form the basis for investigating the role of VP1 in viral replication and pathogenecity.     

主要禽源病毒相关microRNA的研究进展

近年来,禽类病毒性疾病已经成为研究病毒感染和致病机制的重要模型之一,而且病毒与micro RNA的调控关系和机制研究也成为人们关注的焦点。本文简要总结禽源疱疹病毒编码micro RNA的概况,以及禽源疱疹病毒的致瘤性与micro RNA的表达调控关系,同时探讨了利用micro RNA靶向调控机制在病毒疾病(如传染性法氏囊病毒、禽白血病病毒、禽流感病毒等)防治中的可能应用。     

新城疫病毒F48E8株融合蛋白基因序列分析

本研究报道了新城疫病毒（ＮＤＶ）中国标准强毒株Ｆ４８Ｅ８融合蛋白（Ｆ）基因的序列。该基因核苷酸序列长度为１７００ｂｐ,编码由５５３个氨基酸组成的Ｆ０多肽。Ｆ０酶切激活部位序列为ＲＲＱＲＲ↓Ｆ,具有ＮＤＶ强毒的特征。Ｆ０中有３个主要由疏水性氨基酸组成的区域和６个可糖基化位点。经比较,ＮＤＶＦ４８Ｅ８株和Ｍｉｙａｄｅｒａ株、ＴｅｘａｓＧＢ株的氨基酸同源性分别为９３．６４％和９２．４１％。     

鸡贫血病毒衣壳蛋白基因克隆、测序和比较

VP1 gene of chicken anemia virus in liver of infected chicken from Harbin was amplified by polymerase chain reaction and cloned into pUC18The recombinant vector was identified by restriction digestionThree clones were sequenced with sequencing kit ABI PRISM by TaKaRa CoLtdThe open reading frame of the VP1 gene is made up of 1,350bpIt encodes 449 amino acid residuesIt was found that there is an abundant Arg region from position 3 to 46Its isoelectric point is up to 107 because of its abundant basic amino acidsComparing this Harbin isolate with 26p4,Cux-1,82-2,Del-rose,A2,Connb,L-028,TR20,CIA-1,CAV15,2A9 showed there were 168 nucleoside differences which lead to 26 amino acid changes of the VP1The amino acid changes may influence the antigenic character of different VP1sIt was also found that there is a hyper-mutation region from amino acids position 139-157,its mutation frequency is up to 42% among these CAV's VP1s.It is necessary to research the function of this region     

调亡蛋白：特异性触发肿瘤细胞死亡的蛋白质

凋亡蛋白 (ａｐｏｐｔｉｎ)是近年来发现由鸡贫血病毒 (ＣＡＶ)ｖｐ3基因产生的蛋白质 ,主要引起鸡淋巴细胞凋亡[1、2 ] 。进一步研究发现 ,凋亡蛋白具有一种抗肿瘤细胞特异性 ,即仅仅诱导肿瘤细胞或转化细胞凋亡 ,而对正常细胞或二倍体细胞不起作用。更让人感兴趣的是 ,凋亡蛋白诱导的凋亡不依赖功能性Ｐ5 3的生成 ,也不被ＢＡＧ 1、Ｂｃｒ ａｂｌ的生成所抑制 ,甚至不受凋亡抑制因子Ｂｃｌ 2过分产生的影响[3、4] 。这些特性预示 ,凋亡蛋白可被用作一种治疗因子 ,只要它在体内能被大量传递给肿瘤细胞 ,就可选择性地将它们根除。这一诱人的…     

鸡传染性支气管炎病毒纤突蛋白的目的基因点突变对其免疫原性的影响

反转录聚合酶链反应扩增鸡传染性支气管炎病毒中国流行株的主要免疫原纤突蛋白Ｓ１基因,将其插入载体ｐＵＣ１８的ＢａｍＨⅠ／ＨｉｎｄⅢ位点,在大肠杆菌中实现目的的基因的分子克隆。经克隆化Ｓ１基因的限制性酶切片多段多态性分析和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交之后,双脱氧链终止法测定其５‘端高变区核苷酸序列,并以此与ＧｅｎｅＢａｎｋ中的参考毒株Ｍａｓｓａｃｈｕｓｓｅｔｔｓ４１相应序列作比较,分析其同源性。