鸡贫血病毒衣壳蛋白基因克隆、测序和比较

VP1 gene of chicken anemia virus in liver of infected chicken from Harbin was amplified by polymerase chain reaction and cloned into pUC18The recombinant vector was identified by restriction digestionThree clones were sequenced with sequencing kit ABI PRISM by TaKaRa CoLtdThe open reading frame of the VP1 gene is made up of 1,350bpIt encodes 449 amino acid residuesIt was found that there is an abundant Arg region from position 3 to 46Its isoelectric point is up to 107 because of its abundant basic amino acidsComparing this Harbin isolate with 26p4,Cux-1,82-2,Del-rose,A2,Connb,L-028,TR20,CIA-1,CAV15,2A9 showed there were 168 nucleoside differences which lead to 26 amino acid changes of the VP1The amino acid changes may influence the antigenic character of different VP1sIt was also found that there is a hyper-mutation region from amino acids position 139-157,its mutation frequency is up to 42% among these CAV's VP1s.It is necessary to research the function of this region     

转录因子Foxo3a高表达对小鼠T淋巴瘤EL-4细胞周期和凋亡的影响

为了研究转录因子Foxo3a高表达对小鼠T淋巴瘤EL-4细胞周期和凋亡的影响,采用电穿孔法将真核表达载体pEGFP-N1/Foxo3a转染小鼠T淋巴瘤细胞系EL-4细胞,并通过聚合酶链式反应和免疫印迹法分别检测Foxo3a mRNA及蛋白表达。转录因子Foxo3a高表达后,采用细胞计数法绘制其细胞生长曲线;采用荧光显微镜法及流式细胞仪定性和定量观察典型EL-4细胞凋亡形态特征、细胞凋亡百分率及细胞周期变化情况。结果表明,转录因子Foxo3a真核表达质粒pEGFP-N1/Foxo3a经酶切鉴定及测序检测序列正确。转染pEGFP-N1/Foxo3a的小鼠EL-4细胞表达Foxo3a mRNA和蛋白水平显著升高。Foxo3a高表达明显抑制EL-4细胞的增殖能力,并使EL-4细胞发生明显G2期阻滞(P<0.001)。Foxo3a基因高表达后,荧光显微镜可以观察到典型凋亡的细胞形态。同时,EL-4细胞凋亡百分率显著升高(P<0.01)。结果提示,Foxo3a高表达可以有效抑制小鼠T淋巴瘤细胞体外细胞增殖,使细胞周期G2时相阻滞,并具有诱导细胞凋亡的作用。     

黑曲霉pepB基因缺失菌株的构建及其功能分析

以黑曲霉(Aspergillus niger)GICC2773基因组DNA为模板,用PCR方法分别扩增pepB基因中的上游约1．4kb和下游约1．3kb两段DNA序列,将此两段序列按同一方向分别插入质粒pMW1中潮霉素抗性基因(hph)表达单元的5′和3′端,构建成重组质粒pMW1-pepB,用于通过同源重组靶向破坏基因组中的pepB基因。同源重组则采用原生质体-PEG方法,将酶切pMW1-pepB得到的线性片段转化A．niger GICC2773菌株,通过潮霉素选择平板得到62个Hgy抗性转化子,然后采用PCR方法从这些抗性转化子中筛选到1个由于同源重组产生的pepB基因缺失突变菌株pepB29。功能分析显示该突变株的酸性蛋白酶活性有明显下降,外源蛋白漆酶的分泌表达有所提高。     

哺乳动物DNA甲基化的功能与作用

甲基化修饰是哺乳动物DNA最常见的复制后调节方式之一,它通过调控基因的表达,在哺乳动物的生长发育过程中发挥重要作用,甲基化异常可导致生长发育异常或肿瘤。     

Aurora-A激酶对急性胰腺炎大鼠肺脏损伤的修复作用研究

摘要 目的：探讨与研究Aurora-A激酶对急性胰腺炎大鼠肺脏损伤的修复作用。方法：36只雄性SD大鼠均分为三组：对照组、模型组与Aurora-A组。对照组进行假手术操作,模型组建立急性胰腺炎模型后给予注射等量生理盐水治疗,Aurora-A组建立急性胰腺炎模型后给予阴茎背静脉注射鼠Aurora-A类因子-MLN8054 10 mg/kg治疗,记录大鼠肺脏损伤的修复情况。结果：造模过程中无大鼠死亡情况发生,模型组与Aurora-A组造模后2 w与4 w的肺组织病理评分、血清中性粒细胞弹性蛋白酶(neutrophil elastase,NE)与髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)含量、肺组织W/D、肺组织蛋白激酶B(AKT)、细胞外信号调节激酶1(ERK1)蛋白相对表达水平都高于对照组(P<0.05),Aurora-A组少于模型组(P<0.05)。结论：Aurora-A激酶在急性胰腺炎大鼠的应用能抑制Akt/ERK信号通路激活,减少血清NE与MPO的表达,从而促进肺脏损伤修复。     

荷斯坦奶牛红毛性状的基因检测及红毛形成机制的探讨

荷斯坦奶牛黑素皮质素受体1(MC1R)基因310G缺失突变产生e等位基因,导致红白花毛色。实验利用PCR-RFLP和DNA测序技术建立了荷斯坦奶牛红毛性状的基因检测方法,并在4个荷斯坦奶牛全同胞家系中得到了证实,可见其可用于鉴定携带e等位基因的种公牛,以指导奶牛育种。通过分析黑素皮质素(MC)受体蛋白家族序列,找到了MC1R蛋白结构与功能的区域(TM3、TM6、TM7和EL3)。利用VHMPT软件预测MC1R突变蛋白的结构,结果显示其丢失了TM3、TM6、TM7和EL3区,也失去了与α-促黑素(α-MSH)结合的区域,最终导致红毛的产生。     

电脉冲法生产转基因鱼

本文以鲤鱼受精卵为实验材料,通过电脉冲方法将全鱼基因（pcMTsGH)导入鱼胚。在处理的1873粒受精卵中（650V/cm,50μs,4次）,孵出鱼苗540尾,孵化率为28．8％;经斑点杂交和Southern印迹杂交,外源基因的整合率为9．1％。因此该方法可以作为转基因鱼研究和生产的方法。     

衰变加速因子结构基因及调控

衰变加速因子ＤＡＦ是补体激活调节剂（ＲＣＡ）家族中重要成员之一,在体内的存在形式有３种,分泌型ＤＡＦ,跨膜型ＤＡＦ和ＧＰＩ锚链型ＤＡＦ,ＤＡＦ的分子结构,基因结构,合成及基因表达调控等方面的进展近颇为迅速,ＤＡＦ分子的研究,使人们了解在细胞表面控制补全活性的分子基础,ＤＡＦ基因克隆表达及转基因动物研制成功,为ＤＡＦ的研究和应用开辟了广阔的前景。     

猪小肠移植术供肠的灌洗和保存

目的探讨围手术期移植小肠灌注和保存的方法。方法切取猪供肠后,采用100 cm左右高度、略加压法,经移植肠血管以15 mL/min左右灌洗速度持续灌注4℃ 3%羟乙基淀粉注射液、4℃生理盐水保存移植肠。移植前对保存的移植小肠进行组织学检查。结果供肠总灌注时间为50.5±10.6 min;冷缺血时间为80.24±24.62min。组织学检查显示移植肠组织学没有明显改变。移植肠存活良好。结论采取上述方法在短时间内可以提供质量良好的供肠。     

马传染性贫血病毒基因非编码区LTR嵌合克隆的构建

在已有全长感染性克隆pLGFD3-8和pD70344的基础上,根据马传贫弱毒疫苗致弱过程中不同代次毒株LTR序列的分析,在LTR U3区选取特定的酶切位点对EIAV非编码区LTR基因进行了部分替换.将替换的全基因克隆转染驴胎皮肤细胞(FDD)并以驴白细胞(DL)传代,用逆转录酶活性检测、RT-PCR方法及Real-time RT-PCR验证其感染性.结果发现,其衍生病毒感染上述两种细胞均出现明显的细胞病变;细胞培养上清可检测到RT酶活性和RT-PCR阳性.电镜下可见大量典型的EIAV颗粒.pLGFD9-12嵌合克隆衍生病毒与其父本克隆衍生病毒pLGFD3-8具有相似的复制水平,pLGFD9-12嵌合克隆衍生病毒在DL细胞上复制水平略高于FDD细胞.此结果为进一步深入研究LTR对马传染性贫血病毒复制水平和毒力的影响奠定了基础.