改进的Bielschowsky氏法对神经末梢的显示

在研究神经组织的形态方面 ,尤其是显示各种神经末梢则以 Gross- Schultze氏改良 Bielschowsky氏法较为理想 ,最大特点是在镜下可控制其反应程度或效果。神经组织的浸染 ,最细的末梢也能清晰显示出 ,而结缔组织着色很淡。本方法经多年实验、探讨并在原法基础上 ,根据药品及现有条件进行部分改进 ,效果较好。制作方法 :1 .组织固定于 1 2 %福尔马林溶液 ,1 0天以上。2 .取出已固定好的组织块经流水冲洗 1小时 ,蒸馏水浸洗 2～ 4小时。3.冰冻切片 (2 0～ 2 5μ)进入蒸馏水。4.入 2 0 %硝酸银水溶液浸染 1小时 (温度2 5℃ )。5.入 5%福尔马林…     

丽春红2R—亮绿染色法在显示神经髓鞘中的应用

任何因素所致的神经损伤 ,均可导致髓鞘的变性、髓鞘的脱失程度。常规髓鞘染色多采用传统的苏木素及锇酸染色法。苏木素法染色时间过长 (约 2 4h) ,染色步骤复杂 ,温度需控制在 5 0～ 5 5℃ ,分化时由于分化液作用速度较快 ,不便于掌握 ,易造成染色失败 ;而锇酸价格昂贵 ,浸透性差。这样将使神经组织的病理诊断及研究受到很大影响。为此 ,我们根据神经髓鞘的组织结构特点及染色原理 ,采用丽春红 2 R-亮绿组织化学染色方法 ,收到了满意的效果。材料和方法1.标本来源 :活检、尸检及动物正常或病变的脑组织、脊髓和周围神经组织 ,均经福尔马林…     

火焰兰杂交种的胚培养和离体快繁

1植物名称火焰兰杂交种(Renanthera CoCCinea×R.imschootiana). 2材料类别种子. 3培养条件种子萌发培养基:(1)VW;(2)VW 椰子乳100mL·L-1;(3)KC;(4)KC 椰子乳100mL·L-1;(5)VW 椰子乳100mL·L-1 活性炭2 g·L-1(6)1/2MS 椰子乳100 mL·L-1.叶片离体培养基:(7)VW 2,4-D 1.0 mg·L-1(单位下同) 6-BA 2.5 NAA0.2;(8)VW 2,4-D 2.0 6-BA 5.0 NAA 0.5.原球茎继代增殖:(9)花宝1号1.5 g·L-1 花宝2号1.5g·L-1 椰子乳100 mL·L1 6-BA 1.0 NAA 1.0;(10)VW 椰子乳100mL·L-1 6-BA 1.0 NAA 1.0.生根壮苗培养基:(11)花宝1号3 g·L-1 蛋白胨2 g·L-1 活性炭2 g·L-1 NAA 0.5 6-BA 0.2;(12)花宝1号1 g·L-1 花宝2号1 g·L-1 蛋白胨2 g·L-1 活性炭2g·L-1 NAA 0.5 6-BA 0.2.以上培养基均加1.5%蔗糖、0.6%琼脂,pH 5.2～5.4,培养温度(25±2)℃,光照度1 500～2000 lx,光照时间12 h·d-1.     

白花独蒜兰的组织培养和快速繁殖

1植物名称白花独蒜兰(Pleione allbiflora). 2材料类别种子、原球茎. 3培养条件种子播种培养基:(1)KC[1] CM 100mg·L-1(单位下同) AC 2 g.L-1.拟原球茎诱导培养基:(2)MS NAA 1.0;(3)MS 6-BA 1.0;(4)MS NAA 1.0 6-BA 0.2;(5)MS NAA 0.2 6-BA 1.0.生根壮苗培养基:(6)Hypenox2号(N:P:K=20:20:20,美国Hyponex化学公司产品)2 g.L-1 NAA0.5 香蕉匀浆100 ml.L-1 AC 2 g.L-1.以上培养基分别附加1.5%蔗糖、0.8%琼脂,pH5.4.培养温度(25±1)℃,光照度1 000～1 500lx,光照时间14 h·d-1;种子播种后暗培养2周,再转入光下培养.     

一种简易革兰氏染色法

我们用简易G染色法,对细菌进行染色,实践证明该方法稳定性好。简单快速,特介绍如下:一、试剂:(一)甲液:结晶紫0.25g,蒸留水加至100ml(二)乙液:碱性品红0.3g,碘化钾0.5g,碘0.2g,用95％酒精加至100ml溶解(可以水浴溶解)。二、方法:     

常用凝胶电泳缓冲液配制

(一) Tris-醋酸(TAE) 0.04M Tris-醋酸, 0.002M EDTA 配制五十倍贮存液1升 Tris碱 242g 冰醋酸 57.1ml 0.5M EDTA(pH8.0) 100ml Tris-磷酸(TPE) 0.08M Tris-磷酸, 0.008M EDTA 配制十倍贮存液1升 Tris碱 10 108g 85%磷酸(比重1.679mg/ml) 15.1ml     

β-ME和BHA体外诱导人胎肝CD34+细胞向神经组织细胞分化研究

目的:建立巯基乙醇(β-mercaptoethanol,β-ME)和丁羟回醚(butylated hydroxyanisole,BHA)体外诱导人胎肝(fetal liver,FL)干细胞向神经细胞分化模型.方法:采用MACS试剂盒分离人胚胎肝CD34 细胞,以DMEM 10%胎牛血清培养液培养;第五代细胞待细胞融合达80%后,用DMEM 10%胎牛血清 1mmol/L β-ME 0.2 mmol/L BHA诱导24 h,PBS洗涤.然后在无血清培养基中培养5 h～5 d.用免疫细胞化学方法分析诱导前后的细胞表型特点.结果:经β-ME BHA诱导处理后,细胞表现神经元样细胞形态,表达神经组织细胞特异蛋白,如neustin、NeuN、NF-M、TuJ-1和NSE.统计显示81%细胞NeuN染色阳性,75%细胞TuJ-1染色阳性,47%染色NF-M阳性,90%染色NSE阳性.结论:β-ME和BHA能够诱导体外培养的人FL CD34 细胞分化为具有神经细胞特异性抗原和成分的神经样细胞;胚胎肝细胞具有向神经组织分化的潜能.     

微波辐射取代氧化剂配制苏木素法

传统配制苏木素染液均以火加热,用有剧毒的氧化汞作为氧化剂。常常使液体外溢,氧化程度难以控制,有效使用时间缩短。我们经过多次实验,采用微波辐射代替氧化汞促进氧化苏木素取得了满意的结果,现介绍如下: 染液的配制:甲液:苏木素0.5g,无水酒精5ml;乙液:铵明矾10g,蒸馏水100ml。取乙液经医用微波仪(浙江临安电子器材产品,TWY781型)2档辐射2min,甲液微波5档辐射2min,然后将甲液、乙液混合,4档辐射10～15min,迅速放入冷水中冷却,最后加入2％冰醋酸即可使用。     

分离和鉴别脑膜炎球菌的培养基

一般认为脑膜炎球菌必须在含有天然动物蛋白(血液、血清、腹水及鸡蛋)的培养基上才能生长。而我们用黄豆代替动物蛋白用于脑膜炎球菌培养和鉴别,结果满意。培养基制备方法分离用培养基(黄豆—玉米淀粉抗菌素培养基):(1)基础培养基(g):胰胨6、胨6、牛肉膏3、氯化钠3、葡萄糖1、琼脂25、蒸馏水800ml,加热溶化。(2)玉米淀粉液:玉米淀粉3g(或玉米粉5g),用10ml蒸馏水拌成糊状,再用90ml煮沸的蒸馏水边倒边搅拌,微     

龙胆紫希夫氏液显示DNA染色新方法

应用龙胆紫配制成Schiff(希夫氏)试剂,在微波辐射下进行Feulgen染色,结果使正常及良、恶性肿瘤组织细胞核内DNA着紫红色,并能应用真彩色图像仪进行DNA的定量分析.其方法操作简便,便于临床病理诊断应用.现介绍如下.标本的采集:活检手术切取的肿瘤组织100余例,经甲醛固定,石蜡包埋.切片,厚5μm.染液的配制:①8.3%盐酸水溶液(HCl8.3ml、蒸馏水 91.7ml);②龙胆紫(上海试剂站)希夫氏试剂的配制同PAS方法,以龙胆紫代替碱性品红;③亚硫酸氢盐溶液(10%偏重亚硫酸钠溶液5ml、1mol/L-HCl5ml、蒸馏水90ml).染色步骤;①切片脱蜡至水—蒸馏水;②8.3%盐酸水溶液水解切片1min(微波仪5档),蒸馏水洗;③     

妇科腹腔镜手术中不同血浆靶浓度瑞芬太尼对异氟醚MACBAR的影响

目的观察妇科腹腔镜CO2气腹快速充气阶段不同血浆靶浓度瑞芬太尼对异氟醚MACBAR的影响。方法将120例全麻下行妇科腹腔镜手术患者按瑞芬太尼血浆靶浓度随机分为4组:R0组(0ng/ml)、R1组(1ng/ml)、R2组(2ng/ml)和R3组(3ng/ml)。4组麻醉诱导药物:依托咪酯0.3mg/kg、顺阿曲库铵0.2mg/kg及血浆靶控瑞芬太尼(3ng/ml)。患者气管插管后吸入异氟醚,R0组停用瑞芬太尼,R1、R2、R3组以瑞芬太尼1ng/ml、2ng/ml、3ng/ml的血浆靶浓度靶控输注。根据每组患者CO2气腹快速充气阶段HR或MAP的变化采用序贯法对异氟醚MACBAR进行测定,同时观察气腹前后BIS值与血流动力学改变的关系。结果各组异氟醚MACBAR分别为:R0组(1.63±0.05)%,R1组(1.03±0.06)%,R2组(0.71±0.07)%,R3组为(0.58±0.06)%。结论异氟醚MACBAR随着瑞芬太尼血浆靶浓度的增加逐渐降低,有出现封顶效应的趋势。     

DNA重组技术(Ⅰ) 小量快速提取质粒DNA方法

质粒DNA的提取是最基础的DNA重组技术。国内外已经发展了许多方法用于批量提取质粒DNA。这些方法都可以获得满意的效果。这里介绍两种小量快速提取质粒DNA的方法,可用于重组子筛选及酶切分析。 (一)碱裂解法 1.将过夜培养的菌液1.5ml转移到小离心管内,15.000r/min离心30sec,弃去上清,将离心管倒置尽量除去培养液。 2.将沉淀的菌体再悬于100ml冰冷的溶液A中(50mM葡萄糖,25mM Tris pH8.0,10mM EDTA),不必要加入溶菌酶。 3.向A液中加入新配制的溶液B200μl(0.2N NaOH,1％SDS),迅速倒置几次,混合两溶液,放在冰浴上3—5分钟。 4.再加入150μl溶液C(5M醋酸钠60ml,冰醋酸11.5ml,蒸馏水28.5ml)混均后冰浴3～5分钟。     

Olig2在cuprizone介导的脱髓鞘动物模型中的表达变化

目的探讨Olig2在cuprizone诱导的急性脱髓鞘动物模型中的表达变化规律。方法应用含0.2%cuprizone饲料饲育小鼠,通过调控饲育时间,造成神经脱髓鞘及髓鞘再生,使用免疫荧光染色和实时定量PCR(qRT-PCR)的方法,观察模型髓鞘脱失后及髓鞘再生2周后Olig2、少突胶质细胞碱性髓鞘蛋白(MBP)及星形胶质细胞神经胶质酸性蛋白(GFAP)的表达变化。结果 Cuprizone饲育6周后,动物胼胝体白质内髓鞘脱失严重,在恢复正常饲料后,髓鞘逐渐恢复正常结构。正常小鼠大脑Olig2低水平表达。髓鞘脱失后Olig2、GFAP表达增高,并可见Olig2+/GFAP+细胞,MBP表达明显降低。髓鞘再生2周后Olig2表达降低,MBP、GFAP表达增高。结论 Olig2基因在cuprizone诱导的脱髓鞘模型中的表达变化,提示Olig2可能参与祖细胞向有活性的星形胶质细胞的分化过程,并与胶质瘢痕的形成有关。     

白藜芦醇对人胶质瘤细胞迁移能力的影响

目的:探讨白藜芦醇对人胶质瘤U251细胞迁移能力的影响。方法:常规培养人胶质瘤U251细胞,取对数生长期细胞进行实验。采用细胞划痕实验检测经终浓度为50和100μg/ml的白藜芦醇刺激后的人胶质瘤U251细胞的迁移距离。结果:细胞划痕实验结果显示,对照组、50μg/ml白藜芦醇组和100μg/ml白藜芦醇组刺激的U251细胞迁移率分别为(25.7±2)%、(19.8±7)%和(8.3±2)%,均有显著性差异(p0.05)。结论:白藜芦醇具有抑制人胶质瘤U251细胞迁移的作用。     

火焰兰的种子培养和试管育苗

1植物名称火焰兰(Renanthera CoCCinea). 2材料类别种子. 3培养条件种子萌发培养基:(1)VW;(2)VW 100 mL·L-1椰子乳;(3)KC;(4)KC 100 mL·L-1椰子乳(5)1/2MS;(6)MS.生根育苗培养基:(7)3 g·L-1花宝1号(美国Haponex公司产品,N:P:K=7:6:19) 2 g·L-1蛋白胨 2 g·L-1活性炭 0.5 mg·L-1NAA 0.2 mg·L-16-BA;(8)1 g·L-1花宝1号 1 g·L-1花宝2号(N:P:K=20:20:20) 2 g·L-1蛋白胨 2 g·L-1活性炭 0.5 mg·L-1NAA 0.2 mg·L-16-BA.以上培养基均附加1.5%蔗糖、0.6%琼脂,pH 5.2～5.4.培养温度为(25±2)℃,光照度1 500～2000lx,光照时间12 h·d-1.     

日本药局方(第11改正)收载的药用氨基酸质量标准和检测方法

<正> 1.异亮氨酸L—ィンロィシンL—Isoleucine H H H_5C_2—C—C—COOH CH_3NH_2 C_6H_(13)NO_2:131.17 本品干燥后测定含量,含L-异亮氨酸(C_6H_(13)NO_2)98.5%以上。性状本品为白色结晶或结晶性粉末,无臭,味微苦。本品稍难溶于水,难溶于冰醋酸,几乎不溶于乙醇或乙醚。本品水溶液(1→100)的pH约为6。鉴别(1)本品0.3g,加水10ml,加     

不同方法测定聚乙二醇化重组人干扰素α-2b注射液的纯度

目的:建立聚乙二醇化重组人干扰素α-2b(PEG.rhIFNα-2b)注射液纯度测定方法.方法:采用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法(SDS-PAGE),对凝胶银染并扫描;采用体积排阻高效液相色谱法(SEC-HPLC),使用TSK G3000SW(7.8mm× 300mm)凝胶柱,流动相:0.2 mol·L-1PB-0.2 mol·L-1NaCl-异丙醇(48.5/48.5/3,v/v);流速:0.6 ml·min-1;检测波长:280 nm;采用反相高效液相色谱法(RP-HPLC),使用C8(4.6mm×250mm)色谱柱,流动相:A液:0.1%三氟乙酸溶液;B液:95%乙腈的A液,梯度:0%～100%B(30min);流速:1mL·min-1;检测波长:214nm.结果:三种方法测得PEG-rhIFNα-2b的纯度分别为100%、100%、98.90%.结论:三种方法均适用于PEG.rhIFNα-2b注射液纯度测定,检测结果符合生物制品质量控制规定.     

HPLC法测定大鼠血浆中EGCG的血药浓度

目的:建立快速、高效、灵敏的HPLC法测定大鼠血浆中的EGCG血药浓度。方法:以睾丸酮为内标物,血浆经盐酸和乙酸乙酯等去除蛋白。采用Agilent 20RBAX SB-C18色谱柱,乙腈-0.3%乙酸为流动相,流速1.0ml/min,检测波长为280nm,柱温40℃。结果:EGCG和内标的出峰时间分别为12.21min和15.4min。EGCG在0.05μg/ml-100μg/ml范围内线性关系良好(R2=0.9920),高、中、低3种浓度下的日内、日间精密度RSD均低于15%,相对回收率与绝对回收率均在100±15(%)范围内,稳定性好。结论:本方法灵敏、准确、高效,适用于大鼠血浆中EGCG的血药浓度检测。     

食品上的应用

951 479亮氯酸对水溶性红曲色素生产的干扰[英]/Lin,T.F.…矿Arch.,Microbi01.一1994,162(1～2).一114～119[译自DBA,1994,13(20),94一11743] 研究了氨基酸对红曲菌形成色素的酶的含量、作用及稳定性的影响。将10%体积的红曲埘Dnas—c"s sp.TTWM]36093种菌接种到发酵培养基上(每1蒸馏水含:50g麦芽糖、12.6g谷氨酸一钠、2.4gK 2HPO.、2.4 g KH 2 P0.、1g MgSC).·7H20、O.5g KCl、 .10rag ZnSO‘·7H20、10rag FeS()‘·7H 20和3mg 。MnS0‘·H 20、pH5.5)。培养36小时后过滤发酵液,培养剩余细胞.后期测定色素生产量。亮氨酸…     

最后区微量注射辣椒素对大鼠血压、心率和肾交感神经放电的影响

在36只麻醉Sprague-Dawley大鼠, 观察了最后区内微量注射辣椒素(10 μmol/L, 50 nl)对平均动脉压(MAP)、心率(HR)和肾交感神经放电(RSNA)的影响.实验结果如下:(1)最后区内注射辣椒素可引起 MAP、HR 和RSNA明显增加, 分别由12.34±0.53 kPa、 328.52±7.54 bpm 和100±0% 增至15.17±0.25 kPa (P<0.001)、 354.81±8.54 bpm (P<0.001) 和156.95±7.57% (P<0.001);(2) 静脉注射辣椒素受体阻断剂钌红(100 mmol/L, 0.2 ml) 后, 辣椒素的上述效应可被明显抑制;(3) 预先应用NMDA 受体阻断剂MK-801 (500 μg/kg, 0.2 ml, iv)也明显抑制辣椒素的兴奋效应.以上结果提示, 最后区微量注射辣椒素对血压、心率和肾交感神经放电有兴奋作用, 而此作用由辣椒素受体介导并有谷氨酸参与.