噬菌体定量检测青枯段单胞杆菌(Pseudomonas solanacearum)方法的研究 Ⅰ、噬菌体zp—2对寄主细菌定量测定的研究

本文报道利用噬菌体zp-2对青枯假单胞杆菌姜瘟菌株定量检测方法的研究。通过对纯菌的测定,结果表明在每毫升10~3菌落形成单位(CFU)的浓度下,纯菌回收率达81％,检测的敏感性较高,在每毫升10~2(CFU)的条件下也能测到活菌。     

口服乳酸杆菌对大鼠粪便正常菌群的影响

本文报告Wistar大鼠在口服嗜酸性乳酸杆菌和嗜热性链球菌前,服后1,2,3,4周及停服1周后的粪菌群俭查结果按每克粪便的菌落形成单位(CFU/g)计算。结果表明:大鼠粪便中排出的乳酸杆菌数量在厌氧培养和需氧培养中不同。在厌氧培养中,口服前为19~(9.41),口服后和停服后为10~(8.99～9.42)CFU/g;在需氧培养中,口服前为     

中国消化道微生态调节剂临床应用共识(2016版)

正人体肠道内栖息着约1 000种以上的细菌,其总数接近于10~(13)~10~(14)个。肠道内的大部分细菌定植于人体结肠内,其中每克肠内容物细菌含量高达10~(12) CFU。肠道的微生态系统是机体最庞大和最重要的微生态系统,其对宿主的健康与营养起着重要作用,是激活和维持肠道生理功能的关键因素[1]。正常情况下,人体选择性地让某些微生物定植于肠     

内生Bacillus svelezensis HBB5菌株发酵盾叶薯蓣产薯蓣皂苷元的研究

目的探讨内生Bacillus svelezensis HBB5菌株发酵宿主植物盾叶薯蓣产薯蓣皂苷元的能力。方法接种内生B.svelezensis HBB5及B.subtilis ATCC 6633菌株(0.35×10~8 CFU/mL)至含盾叶薯蓣地下茎组织的液体培养基,32℃、165~185 r/min连续发酵108 h,检测发酵液细菌、pH、淀粉、麦芽糖、葡萄糖、淀粉酶(α-amylase)及薯蓣皂苷元溶出率等指标。结果内生B.svelezensis HBB5菌株有较强的酸、碱耐受力[pH(4.8±0.2)~(8.4±0.2)],相比B.subtilis ATCC 6633[pH(5.2±0.2)~(8.7±0.2)]差异不明显;前者达峰值生长量(60×10~(8±2) CFU/mL)明显高于后者(32×10~(8±2) CFU/mL)。发酵36~60 h时,B.svelezensis HBB5、B.subtilis ATCC 6633菌株发酵液的淀粉、麦芽糖、葡萄糖浓度达峰值,分别为(37.41±3.12)、(27.83±2.14)ng/mL,(21.06±1.25)、(16.54±1.08)ng/mL,(54.33±3.12)、(36.65±2.10)ng/mL,前者均高于后者。同时,B.svelezensis HBB5菌株维持高的α-amylase酶活性及薯蓣皂苷元溶出率。结论内生B.svelezensis HBB5菌株拥有较强的耐酸碱、降解淀粉、提高薯蓣皂苷元溶出的能力,为工业生产薯蓣皂苷元提供了一个新的方法。     

乳腺炎小鼠肠道菌群改变 及与炎性因子的相关性分析

目的采用高通量测序技术分析乳腺炎小鼠肠道菌群的丰度特征与组织炎性因子的关系。方法选用24只泌乳10 d的昆明雌鼠,随机分成4组(每组6只):健康对照组、低剂量攻菌组(含金黄色葡萄球菌10~3 CFU/25μL)、中剂量攻菌组(含金黄色葡萄球菌10~4 CFU/25μL)和高剂量攻菌组(含金黄色葡萄球菌10~5 CFU/25μL)。用非损伤方法经乳头管分别注入不同浓度的金黄色葡萄球菌悬浊液于小鼠的第4对(腹部)乳腺内。观察小鼠、组织病理学变化以及乳腺组织中TNF-α和Cav-1含量变化;收集小鼠粪便,采用高通量测序技术对小鼠粪便菌群进行分析。结果 (1)与健康对照组小鼠相比,高剂量攻菌组乳腺组织呈明显的炎性病理变化,TNF-α表达明显升高(P0.05),Cav-1表达明显降低(P0.05);(2)不同组小鼠肠道菌群物种丰度不同,对照组肠道菌群以拟杆菌门和厚壁菌门为主;与对照组相比,高剂量攻菌组乳腺炎模型小鼠厚壁菌门丰度增高,拟杆菌门、疣微菌门丰度降低,变形菌门无显著差异;进一步比较后发现,从属以上水平看,后者拟杆菌属、另枝菌属、普雷沃菌属丰度相对较低。结论提示乳腺炎发生和进展与肠道菌群的平衡有密切的关系,结果为研究乳腺炎的免疫学、病理学提供实验依据。     

帕罗西汀联合微生态制剂 治疗伴有功能性消化不良症状的焦虑障碍患者疗效

目的观察帕罗西汀联合微生态制剂对伴有功能性消化不良症状的焦虑障碍患者临床疗效。方法选取伴有功能性消化不良症状的焦虑障碍患者128例,随机分成两组,每组64例:单用组给予帕罗西汀治疗;联用组除帕罗西汀治疗外,加用微生态制剂(双歧杆菌三联活菌肠溶胶囊)早晚各210mg(本品为复方制剂,每克含长型双歧杆菌≥1.0×106 CFU、嗜酸乳杆菌≥1.0×106 CFU、粪肠球菌≥1.0×106 CFU),最多早晚各840mg,共10周。治疗前后应用HAMA量表和水负荷试验进行疗效评定,应用需处理的不良反应症状的量表(treatment emergent symptoms scale,TESS)进行安全性评定。结果在10周末,两组患者治疗后HAMA评分均低于治疗前,联用组的显效率高于单用组(P0.05);水负荷试验水负荷量高于治疗前,联用组水负荷量高于单用组。在治疗后第10周末单用组常见胃肠道不良反应有便秘、恶心等,联用组不良反应少,联用组TESS评分显著降低(P0.05)。结论联合微生态制剂对伴有功能性消化不良的焦虑症患者有显著疗效,胃肠道不良反应小。     

具有临床代表性的艰难梭菌感染小鼠稳定模型的构建

目的构建临床代表性好、稳定性佳的艰难梭菌感染小鼠模型,为艰难梭菌感染相关疾病提供研究工具。方法选择C57BL/6、BALB/c、昆明小鼠,经抗生素诱导后,分别予以不同浓度(108 CFU/mL~10~(10) CFU/mL)的临床分离菌株混悬液灌胃,观察不同品系小鼠不同时间点腹泻、全身情况及结肠组织病理学变化。结果灌菌后,BALB/c小鼠10~(10) CFU/mL浓度组全部出现腹泻,死亡率为16.7%;其他实验组小鼠腹泻程度差异较大或仅部分出现轻度腹泻。腹泻小鼠表现为稀烂便甚至水样便和湿尾现象,体重减轻,肠道病理显示结肠黏膜充血水肿伴炎性细胞浸润。结论经5种抗生素灌胃9d+克林霉素腹腔注射诱导,10~(10) CFU/mL艰难梭菌活菌混悬液灌胃后构建的BALB/c小鼠艰难梭菌感染模型最稳定。     

停乳链球菌对日本沼虾总超氧化物歧化酶活性的影响

对健康的日本沼虾(1.40±0.12)g分别肌肉注射0.6×10~6、2×10~6、4×10~6、6×10~6 CFU/mL的停乳链球菌茵液10μL、注射后3 h、6 h、9 h、12h、24h、5d、10d分别采集肝胰腺、肌肉和鳃组织,测定其中的总超氧化物歧化酶(T-SOD)活性,研究停乳链球菌时日本沼虾T-SOD活性的影响,研究结果显示,肝胰腺中T-SOD活性于注射5d后达到最大值(P0.05),10d后0.6×10~6、2×10~6和4×10~6 CFU/mL,组T-SOD活性下降并接近对照组水平,而最高浓度组(6×10~6 CFU/mL)T-SOD酶活性仅有对照组的46%。肌肉和鳃中T-SOD活性均在注射6 h后达到最大值,注射10 d后,4×10~6和6×10~6 CFU/mL组的肌肉和6×10~6 CFU/mL组的鳃组织中T-SOD活性均仅有对照组的50%左右。另外,肌肉组织中T-SOD的峰值远高于鳃和肝胰腺组织中的峰值。上述结果表明,停乳链球菌不仅影响日本沼虾机体T-SOD酶的活性。而且肌肉、鳃和肝胰腺组织中酶的活性应答时间不同,且组织内酶活性的应答与菌的感染方式有关,另外,注射高浓度停乳链球菌长时间后会降低其组织中T-SOD酶活性。     

实验9 λ噬菌体DNA的提取

一、平板扩增抽提法 1.LB培养基上划线接种宿主菌,37℃培养过夜。 2.挑取单菌落接种在LB培养液中,培养液含0.2％麦芽糖。37℃振荡培养过夜。 3.0.5毫升菌液;0.1毫升 Mg~++Ca~++溶液(10mM MgCl_2/10mM CaCl_2);噬菌体[10~5pfu(噬斑生成单位)],混和,37℃水浴中保温15分钟。 4.加入4毫升42—45℃含0.7％琼脂粉的LB培养液,迅速混匀,铺在直径为8.5厘米的含1.5％琼脂粉的LB培养基上。37℃培养过夜。铺有上层培养基的一面朝上培养。     

铜绿假单胞菌重组Bb-OprI疫苗免疫及PA01株感染后小鼠脾细胞因子IL-17和Treg的变化

目的:研究铜绿假单胞菌重组Bb-OprI疫苗免疫及PA01株攻击后小鼠产生的保护力,及脾细胞因子IL-17和Treg的变化。方法:将5×10~9CFU的Bb-Opr I疫苗灌胃接种BALB/c鼠,每周3次,连续3周;于初次接种后4周,将5×10~6CFU的PA01株滴鼻攻击小鼠,攻击后2周处死小鼠,分离肺组织和脾脏,培养肺组织的细菌并进行菌落计数,以铜绿假单胞菌抗原(PaAg)诱导培养脾细胞,PCR扩增IL-17和Foxp3基因。结果:Bb-Opr I疫苗组小鼠的肺组织细菌计数(0.46±0.09)×10~8CFU明显低于空载体对照组(5.42±0.79)×10~8CFU和Bb对照组(6.20±0.95)×10~8CFU(P0.01),从疫苗组小鼠的脾细胞DNA可扩增出380 bp的IL-17和250 bp的Foxp3基因。结论:重组Bb-OprI疫苗可诱导小鼠产生Th17和Treg免疫应答,从而抵抗PA01株感染并维持免疫稳态。     

果酒酵母菌混合培养的生长规律及对山乌桕蜂蜜酒发酵风味分析

利用前期筛选得到的优良果酒发酵菌种酿酒酵母菌(Saccharomyces cerevisiae,Sc)和东方伊萨酵母菌(Issatchenkia orientalis,Io),通过混合培养研究其生长规律;以山乌桕蜂蜜为主要发酵基质,通过感官评定和电子鼻比较了混合接种发酵和加曲发酵两种蜂蜜酒产品的感官特性和香气特征。结果表明,在有氧条件纯培养时,Sc和Io在30 h达到最大生长量都为2.2×10~8 CFU/mL;而厌氧条件纯培养时,Sc在30 h达到最大生长量为3.5×10~7 CFU/mL,Io在45 h达到最大生长量为0.5×10~7CFU/mL。在有氧混合培养45 h后,Sc和Io的最大生长量分别为10.2×10~7 CFU/mL和37.9×10~7 CFU/mL,Sc/Io比率呈下降趋势;在厌氧混合培养条件下,在同一发酵周期内,Sc和Io最大生长量分别为21×10~6 CFU/mL和1.4×10~6 CFU/mL,Sc/Io比率先(30 h)上升后下降;有氧培养条件下最大生长量明显高于厌氧培养。感官评定结果,加曲发酵法得分为66.4分,混合发酵法得分为78.2分,混合发酵酿制的蜂蜜酒口感较好,并保留了蜂蜜特有的蜜香。通过电子鼻系统对山乌桕蜂蜜汁和两种不同发酵方法生产的蜂蜜酒进行LDA(线性判别)分析、PCA(主成分)分析,其中LDA分析第一、第二主成分总的贡献率达100%,PCA主成分分析总贡献率为99.94%,表明发酵过程中山乌桕蜂蜜汁的风味发生了变化,且不同发酵方式的山乌桕蜂蜜酒香气具有差异。研究结果为开发利用天然植物资源的发酵精深加工与提高产品质量提供参考依据。     

32例消化道癌症患者的粪便菌群检查

本文报告10例食管癌、12例胃癌贲门癌、10例大肠癌患者和12例正常人的粪菌群检查结果。这些粪菌群包括厌氧菌中的双歧杆菌属、拟杆菌属和梭菌属、兼性厌氧菌中的乳酸杆菌属,需氧菌中的大肠杆菌属和肠球菌。用每克粪便中菌落形成单位(CFU/克粪)的对数值来表示细菌的数量。结果发现:癌症患者粪便菌群中,双歧杆菌的数量在食     

氮沉降对温带森林土壤甲烷氧化菌的影响

大量研究显示氮沉降影响森林甲烷吸收量,但其中的微生物驱动机制仍缺乏研究。基于长白山典型温带森林长期氮沉降模拟实验平台样地,采用定量PCR和克隆测序技术,研究了长期施加不同形态氮((NH_4)_2SO_4、NH_4Cl和KNO_3)处理下森林土壤甲烷氧化菌的数量和群落组成随季节变化的特征。结果表明,夏季,森林土壤甲烷氧化菌pmo A基因丰度在不同施氮处理之间无显著性差异(每克干土1.54×10~6-3.20×10~6拷贝数);秋季,pmo A基因丰度在施加NH_4Cl和(NH_4)_2SO_4处理小区(每克干土1.93×10~5-7.6×10~5拷贝数)与对照(每克干土(4.03×10~6±1.2×10~6)拷贝数)相比有所降低,尤其在(NH_4)_2SO_4处理小区(每克干土(4.61×10~5±2.61×10~5)拷贝数)显著降低;无论夏季还是秋季,施加不同形态氮处理土壤甲烷氧化菌均以Type I型为主(相对丰度在70.6%-85.4%之间),并以Methylobacter-group(Type I)为优势类群,占Type I型的55.1%-91.7%;Methylobacter-group(Type I)的相对丰度在夏季不同形态氮处理土壤样品中无显著差异,但秋季样品中在施加(NH_4)_2SO_4(52.7%±6.5%)和NH_4Cl(56.1%±8.9%)的处理显著低于对照土壤(77.0%±2.9%),Methylococcus-group(Type I)的相对丰度则在(NH_4)_2SO_4和NH_4Cl处理土壤呈增加的趋势。这些结果表明铵态氮肥添加对温带森林土壤甲烷氧化菌的生长具有抑制作用并导致其群落结构发生改变,受夏季温度和水分的影响,这种抑制作用在秋季表现更明显,而NO_3~--N添加对土壤甲烷氧化菌的群落组成和丰度无显著影响。这些结果解释了以往观测到的施铵态氮肥显著降低秋季温带林地土壤甲烷净吸收量,而在夏季无显著影响的观测结果,解释了长期氮沉降影响森林土壤甲烷吸收的微生物机制。     

悉生小鼠体内大肠杆菌和青春型双歧杆菌对艰难梭菌的拮抗作用

本文应用悉生小鼠做模型,研究了大肠杆菌(E.coli)和青春型双歧杆菌(Bifidobacterium adolescentis)对艰难梭菌(Clostridium diffi-cile)的拮抗作用。E.coli和B.adolescentis预先接种无菌SSB小鼠,再用C.difficile攻击。结果表明,E.coli和E.coli B.adolescentis对小鼠均有保护作用,保护平分别为87.5%(7/8)和100%(8/8)。B.adolescentis定值后数量达10~(10.28)CFU/g,且对E.coli数量和小鼠本身无影响。E.coli和B.adolescentis联合比E.coli单独抑制C.difficile在肠道中繁殖的作用更强(0.02>P>0.01),但对其毒素产生和粘附力的作用无明显差异。C.difficile攻击后的1～14天,小鼠粪便中C.difficile菌数在10~4至10~8CFU/g内变化,细胞毒素为10~3CFU/g,A毒素滴度为10~2/g,B.adolescentis也一度下降10~2CFU/g。接种C.difficile后,小鼠虽无明显的腹泻症状,但组织学仍可观察到肠粘膜有充血和分泌增加等轻度损害。扫描电镜和普通光镜均发现E.coli单独或与B.adolescentis共同吸附在肠粘膜微绒毛表面,未见有C.difficile吸附。     

降雨对秦皇岛西浴场细菌总数和可培养菌群组成的影响

【目的】研究降雨条件对浴场细菌总数和优势菌群组成的影响。【方法】2014年8月强降雨前后采集秦皇岛西浴场3个站位的海水样品,采用荧光显微镜计数法和平板计数法分别对细菌总数和可培养细菌总数进行计数;对群落结构组成进行分析,并对可培养细菌进行鉴定。【结果】雨前3个站位细菌总数和可培养细菌总数平均值分别为5.6×10~9 CFU/L和8.3×10~7 CFU/L,雨后分别为9.2×109 CFU/L和2.1×10~8 CFU/L。在可培养菌群中,变形菌门(Proteobacteria,雨前占80%,雨后占73%)是主要的微生物类群,其次为拟杆菌门(Bacteroides,雨前占12%,雨后占13%)、厚壁菌门(Firmicutes,雨前占7%,雨后占11%)等;肠杆菌属(Enterobacter spp.,21株)、海杆菌属(Marinobacter spp.,13株)、弓形菌属(Arcobacter spp.,13株)、假单胞菌属(Pseudomonas spp.,10株)、芽孢杆菌属(Bacillus spp.,10株)和弧菌属(Vibrio spp.,6株)为雨前可培养细菌优势属,而雨后可培养细菌优势属为肠杆菌属(22株)、海杆菌属(21株)、芽孢杆菌属(14株)、不动杆菌属(Acinetobacter spp.,11株)、假单胞菌属(9株)和弓形菌属(5株)等。【结论】降雨对细菌总数有显著的影响,同时降雨后浴场微生物群落结构发生了改变。     

乳源性复合益生菌对2型糖尿病大鼠GLP 1的影响及调控机制

目的观察乳源性复合益生菌对2型糖尿病大鼠胰高血糖素样肽-1(glucagon like peptide-1,GLP-1)的影响,并探讨其调控机制。方法采用高脂高糖饲养合并腹腔注射链脲佐菌素(Streptozotocin,STZ, 35 mg/kg)建立糖尿病大鼠模型(T2DM)。造模成功大鼠随机分为二甲双胍组(200 mg/kg)、低剂量复合益生菌组(1×10~8 CFU/d乳酸菌+1×10~6 CFU/d酵母菌)和高剂量复合益生菌组(1×10~(10) CFU/d乳酸菌+1×10~8 CFU/d酵母菌),以同周龄正常大鼠为正常对照组,灌胃4周。尾静脉采血测定空腹血糖、口服葡萄糖耐量;酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清GLP-1和肽YY(PYY)水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测结肠组织GLP-1蛋白表达;荧光定量PCR检测肠道菌群、G蛋白偶联受体(GPR43、GPR41)水平;气相色谱(GC)检测肠道短链脂肪酸(short chain fatty acids,SCFAs)含量。结果与模型组相比,高剂量复合益生菌能降低大鼠空腹血糖和口服糖耐量,增加肠道乳杆菌、双歧杆菌含量,提高肠道SCFAs含量,上调GPR43和GPR41 mRNA表达,促进胃肠激素GLP-1、PYY分泌,差异有统计学意义(均P0.05)。结论乳源性复合益生菌可显著促进T2D大鼠GLP-1的分泌,调节糖代谢,推测与调节肠道菌群-SCFAs-G蛋白偶联受体信号通路有关。     

海口地区集贸市场淡水鱼华枝睾吸虫囊蚴感染调查

用直接压片法和人工消化法检查了海口集贸市场上5种淡水色(鲫色、罗非鱼、鲤鱼、土鲮色、白鲳)感染华枝睾吸虫囊蚴情况。结果表明：5种淡水色的总感染率为53．66％。其中,鲤鱼、土鲮色、鲫鱼、罗非鱼、白鲳的感染率分别为68．75％、58．82％、58．06％、48．57％和36．67％;平均每克鱼肉含囊蚴数最高的是鲫鱼(9．47个／g),平均每尾阳性鱼含囊蚴数最高的是土鲮鱼(43个／尾)。     

枯草芽孢杆菌对几种灰霉病菌的抑制效果研究

分别研究了枯草芽孢杆菌(BacillussubtilisCohn)培养液、过滤液和灭活液对葡萄灰霉病菌(GB)、草莓灰霉病菌(SB)、辣椒灰霉病菌(PB)和番茄灰霉病菌(TB)菌丝生长的抑制作用。结果表明:枯草芽孢杆菌培养液对GB、SB、PB和TB都有很好的抑制作用。在菌液浓度达到10 5CFU/mL时,对4种灰霉病菌的抑制率均达到了10 0 % ;当浓度降低为10 4CFU/mL时,抑制率明显降抵。而菌液浓度为10 8CFU/mL时的过滤液,对GB、PB和TB的抑制率也均在5 0 %以上。灭活液对灰霉菌的抑制作用明显减弱,菌液浓度为10 8CFU/mL时,对PB、GB、TB和SB的抑制率分别为73.6 %、39.5 %、5 0 %和2 5 %。     

植物原生质体的纯化

本文叙述了用改良离心管漂洗纯化原生质体中的细胞和亚细胞碎片的方法。在这方法中使用了一个通底的带有小细管的改良离心管。经过这种纯化,原生质体的产量是较高的。玉米(Zea mays L.)茎每克鲜重平均收获6.2×10~5个原生质体,矮牵牛(Petunia hybrida Vilm.)叶每克鲜重平均收获2.7×10~6个原生质体。纯化后植物原生质体的活力是较高的,当培养时,观察到玉米茎原生质体的细胞分裂;矮牵牛叶片原生质体进行了细胞分裂,并发育成愈伤组织,愈伤组织转移到分化培养基上长出了根。     

体外建成带有λ噬菌体DNA片段的重组质粒

将大肠杆菌抗四环素及抗氨苄青霉素的质粒pBR322的DNA、大肠杆菌λ噬菌体DNA在体外经限制性核酸内切酶Hind Ⅲ切割,并用T4DNA连接酶连接后,以大肠杆菌K12HB101(recA~-r(?)m(?))为受体进行转化,采用插入钝化(insertional inactivation)方法选择重组质粒。利用环丝氨酸浓缩Ap~rTc~3转化体。在648株Ap~r转化体中选出120株无性繁殖系为Ap~rTc~s。随机挑出3株含有重组质粒的无性繁殖系进行大肠杆菌素El(colicin El)免疫特性测定及显微镜观察,证明为大肠杆菌素El敏感,并为典型的大肠杆菌形态。随机挑出一株含有重组质粒pAG-5的无性繁殖系,采用Zasloff等酸酚法进行重组质粒DNA提取,用Hind Ⅲ消化重组质粒DNA后进行琼脂糖凝胶电泳分析,观察到重组质粒pAG-5除pBR322质粒DNA带外含有λ-Hind Ⅲ的第5 DNA带。用重组质粒DNA再次对HB101(recA~-r(?)m(?))及K12 802(Su_(11)~+m_K~+)受体进行转化,转化体在含氨苄青霉素培养基平皿上生长,但在含四环素培养基平皿上不生长,再次证明为Ap~rTc~5.每微克重组质粒DNA Ap~r转化体为4.0—4.6×10~3。