黄花菜球状体经秋水仙素处理后再生苗加倍效果及快速增殖的研究

黄花菜(Hemirocallis citrina)是我国特产蔬菜,湖南省是主产区,目前种植的优良品种花蕾达不到部颁重量标准,我们试图用细胞工程技术诱发黄花菜多倍体,提高花蕾重量,改良品质。用秋水仙素处理黄花菜球状体,再生苗获得了较好的加倍效果。有芽状突起的球状体经0.05%的秋水仙素溶液处理,加倍效果在50%以上;没有芽状突起的球状体加倍效果仅为14.2%左右,而且球状体在培养中愈伤组织化。     

黄花菜花梗培养的再生植株形态及染色体变异的观察

我们以黄花菜(Hemerocallis citrina)为材料进行植物细胞工程的基础研究,获得了一定进展,并在黄花菜优良品种试管苗工厂化生产的研究方面摸索出一定的经验。在以叶片、花茎、花梗为外植体时,发现了来自花梗建立起来的圆球茎再生苗有部分形态不正常。特此观察了花梗培养的再生植株形态及染色体变异,并研究了一些相关的问题。1.愈伤组织的诱导及圆球茎的建立 取不同花期、不同大小花蕾的花梗接种在 MS     

生长素极性运输抑制剂(TIBA)对烟草离体花柄花芽分化的影响

在只含6-BA(2mg/L)的MS培养基上,烟草花柄外植体形态学基端膨大,上着生再生花芽,而花柄中部大多都形成愈伤组织。添加IAA(2,10,20 mg/L)后,花柄基端膨大的现象依然存在,但再生花芽的分布并不限于基端,在花柄中部、顶端都可见再生花芽。花柄外植体中部愈伤组织的形成也随添加的IAA和IAA浓度升高而受到抑制。在上述培养基中添加生长素极性运输抑制剂TIBA后,无一花柄中部能形成愈伤组织,再生花芽的形态变化也很大,有具锥形花柄的花芽、喇叭叶和一些难于确定由何种器官衍生而来的喇叭状器官。这些异于正常形态的器官发生,显然与花柄外植体中生长素极性运输受抑制有关,本文对它们的形成机理作了一些推测。     

新疆紫草的组织培养及其染色体分析

新疆紫草(Arnebia euchroma)的胚轴、子叶、根都产生愈伤组织。不同来源的外植体产生苗的能力不同,胚轴来源的愈伤组织分化苗最多,而且苗生长旺盛。根的愈伤组织只产生不定根。新疆紫草的核型是 K(2n)=14=2m 8sm 2sm(SAT) 2st。随着继代培养代数增多,染色体变异的种类和频率以及染色体数目显著增加。如果继代培养时间较长,染色体数目变异的范围更广,而且出现染色体结构变异。     

新疆紫草的组织培养及其染色体分析

新疆紫草(Arnebia euchroma)的胚轴、子叶、根都产生愈伤组织。不同来源的外植体产生苗的能力不同,胚轴来源的愈伤组织分化苗最多,而且苗生长旺盛。根的愈伤组织只产生不定根。新疆紫草的核型是K(2n)=14=2m+8sm+2sm(SAT)+2st。随着继代培养代数增 多,染色体变异的种类和频率以及染色体数目显著增加。如果继代培养时间较长,染色体数目变异的范围更广,而且出现染色体结构变异。     

银鹊树胚性愈伤组织继代培养过程中的细胞染色体数目变异

以银鹊树幼嫩的合子胚为外植体诱导胚性愈伤组织,胚性愈伤经增殖后转接到液体培养基中悬浮继代培养,对其多次继代培养的胚性愈伤细胞的染色体数目检测发现:多次继代培养后的胚性愈伤细胞染色体数正常的比例为48.28%(2n=30),部分细胞出现染色体数目2n=15~60的变异,其变异率高达51.72%,其中以亚二倍体变异为主(40.07%).结果表明,在体细胞胚胎诱导形成过程中,胚性愈伤组织细胞在染色体水平上发生部分变异,这可能是体胚形成过程中畸形胚产生的根本原因.     

菘蓝两种外植体愈伤组织诱导研究

为寻找菘蓝愈伤组织诱导的最佳外植体,最佳培养基及愈伤组织继代增殖的最佳培养基,选用叶片和叶柄两种外植体,在添加不同种类植物激素处理组合的培养基上,对不同外植体进行愈伤组织的诱导和继代增殖研究.结果表明叶片比叶柄愈伤组织的诱导能力强,表现为出愈时间早,诱导率高,出愈多且质量好.叶片愈伤组织诱导培养基:MS 6-BA1.0mg/L 2,4-D0.3～0.5mg/L;继代增殖培养基:MS 6-BA0.5mg/L 2,4-D0.3mg/L.因此,采用菘蓝叶片为外植体,能高效的诱导出愈伤组织并能快速增殖.     

烟草叶片愈伤组织BECTLIN Ⅰ基因的表达

分别以烟草盆栽实生苗和组培继代苗的叶片为外植体,在MS (1.0 mg·L^-1 6-BA与0.5mg·L^-1 2, 4-D)培养基中诱导形成的愈伤组织为材料,检测与细胞程序性死亡有关的BECTLIN Ⅰ基因。RT-PCR检测表明,烟草盆栽实生苗和组培继代苗的叶片及其愈伤组织均有BECTLIN Ⅰ基因的表达,但组培继代苗叶片愈伤组织的BECTLIN Ⅰ基因表现出持续、稳定的表达,说明培养基中的激素可能对BECTLIN Ⅰ基因的表达产生影响,同时表明烟草叶片愈伤组织形成过程中可能产生了细胞程序化死亡,其结果可能导致烟草叶片原初形态不同、功能各异的细胞在脱分化阶段形成了形态结构和功能完全相似的胚性细胞。     

细叶黄芪叶肉原生质体植株再生

从细叶黄芪(Astragalus tenuis)外植体愈伤组织分化出的再生苗叶片分离原生质体。原生质体培养在改良 K8p 培养基中形成了愈伤组织。增殖后的愈伤组织转入分化培养基中分化出苗。幼苗在生根培养基中长出不定根,再生成为完整植株。再生苗叶肉原生质体在 AY培养基中,种子无菌苗叶肉原生质体在改良 K8p 或 AY 培养基中均不能形成愈伤组织。较低的2,4-D 浓度有利于原生质体愈伤组织的形成和分化,过高的2,4-D 浓度对愈伤组织的形成和分化有不利的影响。     

二甲戊灵对离体大蒜染色体的加倍研究

在MS分化培养基中分别添加不同浓度的秋水仙素和二甲戊灵,以 "改良蒜" 的蒜瓣基部为外植体诱导愈伤组织染色体变异并再生植株,观察根尖细胞染色体数和叶片下表皮保卫细胞特征检测诱变效果.结果表明:大蒜染色体数变异受诱变剂浓度和处理持续时间的影响,诱变剂高浓度和短时间处理均有利于大蒜愈伤组织的分化;添加0.1%秋水仙素处理5 d,愈伤组织存活率为80.7%,分化率为78.1%,四倍体的诱导率为4%;添加 100 μmol/L二甲戊灵处理5 d,愈伤组织存活率为100%,四倍体的诱导率为6%.对根尖细胞染色体和叶片下表皮气孔数目和大小观察显示,诱变株具有四倍体的基本特征.说明二甲戊灵能在离体条件下有效诱导大蒜产生四倍体,可替代秋水仙素对大蒜染色体的加倍作用.     

玉米胚性愈伤组织的长期继代及其染色体分析

对５种基因型幼胚诱导的愈伤组织继代培养表明,玉米胚性愈伤组织的长期继代受基因型,培养基成分,激素,培养条件的影响。适时继代,逐代筛选对胚性保持起重要作用。适当降低培养温度（１２±２℃）有利于愈伤组织的保存和胚性保持,可以减少愈伤组织长期继代所需的物质和工作量。长期继代培养的胚性愈伤组织,胚状体发生能力和植株再生率无显著变化,但正常苗的再生频率显著下降。观察愈伤组织细胞染色体发现：（１）基因型对不同倍性细胞的比例有明显影响。（２）随着继代时间的延长,二倍体细胞下降,四倍体和非二倍体细胞增多。（３）愈伤组织中出现多种染色体结构变异,这些结构变异有可能导致非整倍体细胞的形成。     

一种新型的棉花体细胞胚胎发生的快速诱导法

用异常苗的茎段和叶片进行培养,可快速高效诱导获得棉花体细胞胚胎发生,激素组膈及其浓度配比影响异常苗的直接胚胎发生,在附加有０．１ｍｇ／Ｌ ＩＡＡ和０．１ｍｇ／ＬＺＴ的改良ＭＳ培养基上,异常苗不仅体细胞胚胎发生率高,而且形成的体细胞胚数目多,用异常苗作外植体获得胚性愈伤组织仅需要时间１０ｄ,获得成熟胚需要２０－３０ｄ,获得再生植株需要６０ｄ,大大短于常规方法获得胚性愈伤组织、体细胞胚和再生植株的时间     

甘薯外植体组织培养和植株再生

近年来国内外开展了甘薯组织培养和花药培养的研究工作,报道了从甘薯块根愈伤组织获得再生苗和应用茎尖分生组织培养获得无病毒植株。吴耀武,Biding 和Shepard 分别报道了甘薯茎段、叶片原生质体和叶肉细胞培养形成了愈伤组织和细胞团。蔡新声等培养甘薯茎段获得愈伤组织并分化出胚状体。我们自1982年开始进行甘薯外植体——茎段、叶柄和叶片诱导成植株的探索,1983年由外植体的三个部分愈     

黄槐叶片培养过程中器官发生的研究

以黄槐（ＣａｓｓｉａｓｕｒａｔｔｅｎｓｉｓＢｕｒｍ．ｆ．）幼嫩叶片为材料,接种于ＭＳ＋ＮＡＡ１ｐｐｍ＋２,４－Ｄ１ｐｐｍ＋６－ＢＡ２ｐｐｍ的培养基上,诱导形成两种形态的愈伤组织,即致密愈伤组织与雪花状愈伤组织．将愈伤组织转移到ＭＳ＋ＮＡＡ：１ｐｐｍ＋６－ＢＡ２ｐｐｍ的分化培养基上．仅致密型愈伤组织经过球状体至不定芽途径形成大量再生植株。扫描电镜及组织细胞学观察表明,致密愈伤组织表层细胞排列紧密,有许多分生细胞团,而雪花状愈伤组织表层细胞薄壁化,分裂能力很低。球状体起源于致密愈伤组织表层的分生细胞团,其细胞有极强的分生能力,顶端可以分化发育成不定芽原基,最后形成不定芽并发育成小植株。球状体可以看成是具有形成不定芽能力的繁殖单位．     

白Qian胚性愈伤组织长期继代培养中的分化能力及染色体稳定性 …

白Ｑｉａｎ（Ｐｉｃｅａ ｍｅｙｅｒｉ Ｒｅｈｄ．ｅｔ．Ｗｉｌｓ．）的胚性愈伤组织ＭＳ＋２,４－Ｄ１ｍｇ／Ｌ＋ＫＴ１ｍｇ／Ｌ的培养基上继代３年,增殖能力和分化潜力仍保持在原来的水平,没有明显降低的趋势。但随着继代时间的增长,胚性愈伤组织内有细胞的染色体数目发生了无规律的变化,而再生植株根尖细胞染色体数目比较稳定（２ｎ＝２８）。     

罗汉果不同器官直接分化再生苗的研究

以青皮果品种的叶片、叶柄和无芽茎段作为外植体,研究其直接分化再生苗能力的差异。结果表明:⑴MS 6-BA1.0mg/L IAA0.1mg/L和MS 6-BA2.0mg/L IAA0.1mg/L两组培养基均可使叶片外植体直接分化出芽并建成再生苗。叶片基部的分化能力最强,中部稍次,尖部最弱。⑵MS 6-BA3.0mg/L IAA0.1mg/L则诱导叶片外植体首先脱分化形成愈伤组织,继而再分化成再生苗,,且畸形苗居多,无应用价值。⑶叶柄和无芽茎段在三组培养基中都只能脱分化形成大量愈伤组织,难以分化再生苗。     

罗布麻愈伤组织诱导及植株再生

以罗布麻(Apocynum venetum L.)当年的成熟种子和5周龄的幼苗叶片为外植体,研究了不同激素组合、暗培养对愈伤组织及植株再生的影响.结果表明,幼苗作外植体诱导愈伤的最佳培养基为添加1.0 mg/L 6-BA 0.2 mg/L IBA的MS培养基;继代培养中1.0 mg/L 6-BA与0.2 mg/L IBA组合愈伤致密而生长迅速,长时间培养硬化的愈伤组织可用添加0.5 mg/L 6-BA和0.1 mg/L IBA培养基和初期暗培养获得大量质地疏松、增殖迅速的愈伤组织;再生苗诱导以0.5 mg/L 6-BA 0.2 mg/L IBA组合为佳;1/2MS附加NAA 0.6 mg/L为适宜的生根培养基,初步建立了罗布麻离体再生体系.     

非洲菊试管苗叶柄愈伤组织的诱导与分化研究

以非洲菊(Gerbera janesonii Bolus)品种‘Sunanda'试管苗幼叶的带叶叶柄为材料,研究了培养基、外植体类型和继代次数等因素对愈伤组织诱导及分化的影响.结果表明:培养基上附加不同植物生长调节剂所诱导出的愈伤组织在形态和分化能力上存在显著差异,叶柄基部诱导愈伤组织的最适培养基是MS+TDZ 0.3 mg L-1+NAA0.1 mg L-1.外植体以叶片长度＞0.5 cm,叶片已舒展,颜色嫩绿的幼叶最佳,继代培养基以MS+KT 1.0 mg L-1较适宜,愈伤组织在分化培养基MS+6-BA 2.0 mg L-1+NAA 0.1 mg L-1上分化出芽的同时还会增殖,分化率达87.4%,继代培养2次的愈伤组织分化率可提高至95%.不定芽在生根培养基1/2MS+IBA0.6 mg L-1上的生根率达100%,试管苗移栽45 d后,成活率达97%以上.     

箭胡毛杨愈伤组织诱导、保存与再分化

本研究以箭胡毛杨幼叶为外植体,通过对愈伤组织的诱导、保存的再分化的研究,筛选出适宜的培养基和培养条件。外源激素6－BA与IAA的9种配比中,0．5／0．1对箭胡毛杨愈伤组织诱导率可达90％。蔗糖浓度的大小与愈伤组织增长量成正比,与褐变开始时间成反比,当浓度为2％时,继代周期可长达63d。适宜的光照时间可延长愈伤组织保存期并维持良好的组织结构：日光照14h,愈伤组织褐化时间可达到80d;日光照时间少于12h,愈伤组织松散,颜色黄白,褐变开始时间短。经较长时间保存后未褐变愈伤组织的胚状体和丛生苗分化发生时间与分化率不受继代周期影响。当愈伤组织开始褐化后,组织再分化时间延长,分化率大幅度降低。不同继代周期对再生试管苗的生根无影响。     

苹果原生质体培养及芽分化的诱导

苹果原生质体培养难度较大。目前再生植株的仅有苹果砧木 M9、MM106及斯巴坦。许多研究均停留在愈伤组织阶段,可见诱导愈伤组织的分化,是苹果原生质体再生植株的关键。本文报道了从新红星苹果花蕾胚性愈伤组织建立的悬浮细胞系分离原生质体,经培养获得无根绿苗的结果。4月末,5月初采集大蕾期苹果花蕾,0.1%升汞消毒,接种于含激素的 MS 培养基上,诱导愈伤组织,再建立胚性悬浮细胞系。继代5天左右的悬浮细胞培养物可作为游离原生质体