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表面活性剂对嗜热脂肪芽孢杆菌产高温蛋白酶的影响 总被引:7,自引:0,他引:7
研究了表面活性剂对嗜热脂肪芽孢杆菌(Bacillusstearothermophilus)WF146产胞外高温蛋白酶的影响。结果表明,表面活性剂Tween80在0.05%~0.1%(体积比)浓度范围内对WF146产酶有一定的促进作用。在培养基中添加0.1%Tween80可使发酵液酶活提高12.7%,Tween20和TritonX100则抑制嗜热脂肪芽孢杆菌WF146产酶。另外,TritonX100抑制嗜热脂肪芽孢杆菌WF146生长,而Tween80和Tween20不抑制其生长。 相似文献
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嗜热脂肪芽孢杆菌高温蛋白酶的产生条件及酶学性质 总被引:31,自引:0,他引:31
对嗜热脂肪芽孢杆菌(Bacillusstearothermophilis)WF146的产蛋白酶的条件进行了研究,在58℃条件下,WF146在pH值为75的Fd培养基中振荡发酵培养48h后,发酵液中高温蛋白酶产量可达600u/mL以上。对该酶性质的研究表明,酶分子量为34kD,最适作用pH为80,最适作用温度为80℃,具有良好的pH稳定性及热稳定性。Ca2+对该酶的稳定性具有重要影响,PMSF、DFP及IAA能强烈抑制酶活力,而DTT对该蛋白酶活力无影响 相似文献
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用化学诱变剂N甲基N′硝基N亚硝基胍进行随机诱变,获得了穿梭启动子探测质粒pPGV5的温度抗性突变型pPGV5(tr65),序列分析发现质粒上卡那霉素核苷转移酶基因kan的+238位碱基发生了G→T的单点突变。以来自嗜热脂肪芽孢杆菌FDTP3菌株的耐热邻苯二酚2,3双加氧酶基因pheB作为报道基因,构建了转录融合质粒pPGVPB452,用高压电穿孔法将其转化嗜热脂肪芽孢杆菌,通过报道蛋白活性的分析,证明了嗜热脂肪芽孢杆菌T521菌株的6磷酸葡萄糖异构酶同工酶基因pgiB上游含启动子样序列的425bp片段在嗜热脂肪芽孢杆菌中不具有启动子功能。 相似文献
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从腾冲县4个酸性(pH 3.0—5.0)高温(85--96℃)温泉中分离到16株极端嗜热性芽孢杆菌。经鉴定,10株为嗜热脂肪芽孢杆菌(Bacillus stear6thermophilus),2株(YN86317和YN86326)为高温凝结芽孢杆菌(Bacillus thermoaoagulans sp. Nov.),4株(YN86325、YN86344、YN86344-2和YN86345)为 Baaillus spp.。 相似文献
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嗜热脂肪芽孢杆菌高温蛋白酶分解毛发角蛋白的研究 总被引:2,自引:0,他引:2
本文研究了嗜热脂肪芽孢杆菌 (Bacillusstearothermophilus)WF - 1 4 6高温蛋白酶对毛发角蛋白的水解作用。结果表明 ,在体积分数为 2 %的巯基乙醇存在的条件下 ,WF - 1 4 6高温蛋白酶对毛发角蛋白有明显的水解作用。对酶解液氨基酸分析表明 ,酶解液中含有对照液中没有的游离蛋氨酸和亮氨酸 ,且游离氨基酸总量是对照样品的 2 .4倍 ,达 1 5 8mg·L-1 。此外 ,酶解液中含有大量的肽 相似文献
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嗜酸乳杆菌与嗜热链球菌共发酵互生机理的研究 总被引:2,自引:0,他引:2
目的:对嗜酸乳杆菌和嗜热链球菌共发酵时两者的互生作用机理进行研究。方法:以质量浓度100gL脱脂乳为培养基,将嗜酸乳杆菌主要代谢产物—氨基酸,如赖氨酸、精氨酸、缬氨酸分别以0.0083mgml、0.0036mgml、0.0053mgml的量加入含嗜热链球菌脱脂乳培养基中,40℃培养,测定凝乳时间;将嗜热链球菌的代谢产物-乳酸、甲酸分别为0.1332mgml和0.075mgml的量加入含嗜酸乳杆菌脱脂乳培养基中,37℃培养,测定其发酵乳的凝乳时间。结果:嗜热链球菌发酵乳凝乳时间由12h缩短到4h,pH为4.52~4.62,吉尔涅尔度为54.23~64.74°T;嗜酸乳杆菌发酵乳的凝乳时间由16h缩短为5h,pH为4.61~4.65;且嗜酸乳杆菌在CO2环境中发酵时,发酵时间明显缩短。结论:嗜酸乳杆菌和嗜热链球菌共发酵时具有互生关系。 相似文献
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《生物技术通报》2015,(6)
旨在通过ERIC-PCR、BOX-PCR、RAPD等技术对4株地芽孢杆菌属菌株进行DNA指纹图谱分析,找到一种适合于地芽孢杆菌属尤其是嗜热脂肪地芽孢杆菌的菌株分型方法。4株地芽孢杆菌属菌株呈现出4种不同的指纹图谱,其中ERIC-PCR的方法获得的条带较为清晰,实验方法较为简便快捷,且能相对较好地区分不同株系;BOX-PCR的方法得到的条带相对较少,不能很好地区分同一种菌的不同株系;RAPD的方法获得的条带相对较多,区分性更高,但同时也增加了一部分工作量和成本。3种菌株分型技术均能有效的区分地芽孢杆菌属菌株,其中ERIC-PCR是一种最有效最便捷区分嗜热脂肪地芽孢杆菌不同株系的方法。 相似文献
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极端嗜酸硫杆菌高效筛选、高密度发酵及保藏方法的研究 总被引:1,自引:0,他引:1
【目的】针对嗜酸硫杆菌极端特殊的生化特性,分别建立双层平板培养高效筛选方法和补料分批高密度发酵策略,并优选最佳保藏方法,以强化对该类菌种资源的利用和储备效率。【方法】分别采用以异养型微生物Sacchromyces ellipsoideu和Rhodotorula sp.为底层培养物的双层平板培养嗜酸硫杆菌,并结合透射电子显微镜技术(TEM)考察细胞形态差异。结合硫化矿培养基设计及单质硫补料培养策略,延长Acidithiobacillus thiooxidans对数期,提高比生长速率。分析不同保藏方法对嗜酸硫杆菌细胞存活率的影响。【结果】采用异养微生物——Rhodotorula sp.作为底层培养物的双层平板培养法在缩减1/3检出周期的同时将Acidithiobacillus ferrooxidans和Acidithiobacillus thiooxidans的检出率提高了3倍左右。TEM结果表明双层培养中细胞形态更为规则。采用基于Starkey-硫化矿培养基的补料分批发酵策略提高了Acidithiobacillus thiooxidans平均比生长速率,硫对生物量转化率和生产强度分别比分批培养提高31.1%和187.9%。4°C低温保藏方式更适于嗜酸硫杆菌的保藏,有效保藏期1–3月。【结论】Rhodotorula sp.为辅助培养物的双层平板培养法可有效提高嗜酸硫杆菌的筛选效率。设计的Starkey-硫化矿培养基结合补料分批培养策略可实现Acidithiobacillus thiooxidans高密度培养。简单高效的4°C低温保藏方式更适合于嗜酸硫杆菌的中短期保藏。 相似文献
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浓缩苹果汁生产过程中脂环酸芽孢杆菌的分离及初步鉴定 总被引:8,自引:0,他引:8
本文对浓缩苹果汁生产过程中的嗜酸耐热菌进行了分离,得到45株纯的嗜酸耐热芽孢杆菌。根据脂环酸芽孢杆菌(Alicyclobacillus)嗜酸的特点,用LB平板进行筛选,结果表明所有的菌株都嗜酸。用抗热性试验研究了这些菌株产生芽孢的培养时间,结果表明,所有考察的菌株中,33株与DSM3922的生长周期一致,48h内产生芽孢;3株菌生长速度较快,培养17h就能产生芽孢;还有3株菌生长速度较慢,需培养48h后才能产生芽孢。在采用16S rDNA PCR-RFLP法对筛选得到的脂环酸芽孢杆菌进行快速鉴定的基础上,选取7株可能是新种的未知菌株与5株已知的参比菌株的19个表型特征进行了试验研究和聚类分析,结果进一步证实了这7株菌都是与已知参比菌株不同的菌株。 相似文献
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本文以枯草芽孢杆菌为例,应用一种含血浆沉淀物的新型培养基PSM-1培养基和常规培养基(Luria-Bertani培养基,下简称LB培养基),在相同条件下,培养枯草芽孢杆菌进行液体发酵;并分别用PSM-1培养基和LB培养基培养的枯草芽孢杆菌菌液进行几种常见植物病原菌的抑菌实验。结果表明,(1)PSM-1培养基即减少了酵母粉、蛋白胨等昂贵营养物的使用量,实现了废弃物的循环利用,为工业化生产降低了约70%的生产成本;(2)用PSM-1培养基发酵芽孢类细菌时,芽孢率≥90%,而用LB培养基时,芽孢率约为80%,所以用PSM-1培养基发酵芽孢类细菌芽孢率提高了12.5%;(3)通过枯草芽孢杆菌的抑菌实验观察,PSM-1培养基培养出的枯草芽孢杆菌菌液抑菌性能优于LB培养基培养的枯草芽孢杆菌菌液的抑菌性能。50 L及2 t发酵罐生产性实验结果表明,此种含血浆沉淀物的新型培养基(PSM-1)性能可靠,可以用于芽孢类细菌的培养。 相似文献
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半乳糖寡糖在体内和体外对双歧杆菌生长的影响 总被引:5,自引:1,他引:4
目的:利用固定化产β-半乳糖苷酶的嗜热脂肪芽孢杆菌连续合成的产物。方法:经柱层析分离纯化得到了纯半乳糖三寡糖和半乳糖四寡糖,用于体外双歧杆菌培养和动物试验。结果:证实了半乳糖寡糖能高效、专一地促进双歧杆菌的生长繁殖。结论:半乳糖寡糖具有改善小鼠肠道内菌群分布,降低小鼠盲肠内pH值的生理功能。 相似文献
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嗜热菌Thermus sp.YBJ-1的分离和淀粉酶基因的克隆 总被引:4,自引:0,他引:4
从西藏热泉水样分离得到一株嗜热菌(YBJ-1),其16S rDNA(1511bp)序列与栖热菌(Thermus scotoductus ITI-252T)的同源性为98%。通过PCR技术将Thermus sp.YBJ-1的淀粉酶基因(amyT)全长开放阅读框克隆到T载体。分析表明,amyT的ORF全长为1767bp,编码588个氨基酸。推导的氨基酸序列与嗜热脂肪芽孢杆菌的阿尔法环糊精酶(Bacillus stearothermophilus alpha-eyclodextrinase)和栖热菌Thermus sp.IM6501的麦芽糖淀粉酶(Thermus sp.IM6501 mahogenic amylase)分别有99%和96%的同源性,与嗜热脂肪芽孢杆菌的新普鲁兰酶(neopullulanase)的同源性为81%。 相似文献
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多菌种酸奶中活性乳酸菌的计数方法研究 总被引:6,自引:0,他引:6
利用4种选择性培养基MRS、MRS-山梨醇、MRS-5.2、Elliker,采用平板涂布法和倾注接种法。在蜡烛缸法(缺氧)、封口膜法(微氧)和供氧条件下对4种市售多菌种酸奶中保加利亚乳杆菌、嗜热链球菌、嗜酸乳杆菌、双歧杆菌进行选择性计数方法研究。结果表明:蜡烛缸法较能反映乳酸菌活菌数量的实际情况,封口膜法次之;在不同培养条件下4种选择性培养基对于乳酸菌活菌的计数都是灵敏的;而涂布法和倾注法接种活菌数有显著差异,倾注法要优于涂布法。 相似文献
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NAD激酶能催化NAD生成NADP。本研究采用PCR技术从嗜热脂肪地芽孢杆菌基因组中获得NAD激酶基因,以pET30a(+)为表达载体、E.coliBL21(DE3)为宿主菌,实现其在大肠杆菌中异源表达,并进行酶学性质研究。结果显示,嗜热脂肪地芽孢杆菌中NAD激酶编码基因大小为816bp,酶分子量大约为35kD。酶学性质分析表明,来源于嗜热脂肪地芽孢杆菌的NAD激酶最适反应温度和pH分别为35℃、pH7.5,在35qC中保温2h后仍能保持80%左右的活性。Mn2+、Ca2+对该酶有较强的激活作用,在最适反应条件下该酶的比活力为4.43U/mg。动力学性质分析结果显示NAD激酶对底物NAD催化的k和圪。,分别为1.46mmol/L和0.25tzmol/(L·min)。NAD激酶在大肠杆菌的异源表达为以NAD为底物生物合成NADP提供了更多生物资源。 相似文献