珍稀濒危植物香果树胚性细胞悬浮系的建立和植株再生

以香果树(Emmenopterys henryi)未成熟种子为试材, 探讨不同的接种量、基本培养基、糖浓度及植物生长调节物质等对体细胞胚胎生长的影响, 建立稳定的香果树胚性细胞悬浮培养与植株再生体系。结果表明: 悬浮培养条件下, 最适接种量为2%(鲜重); 较适合的基本培养基为MS; 蔗糖浓度为1%时容易使球形胚聚合体愈伤化, 浓度为3%和6%适合球形胚聚合体增殖, 浓度为9%则容易使球形胚聚合体褐化; 添加0.5 mg.L-16-BA 和0.5 mg.L-1 NAA的MS液体培养基, 当初始蔗糖浓度为3%, 然后逐步提高到6%则有利于香果树各个发育阶段的同步化; 子叶胚转到不含任何植物生长调节物质的MS固体培养基中可以长成正常植株。     

唐菖蒲的愈伤组织诱导和植株再生

以唐菖蒲品种‘Advanced red’的籽球、花柱、子房和花丝为外植体,研究了不同种类和浓度生长调节物质以及籽球的不同接种方式对愈伤组织诱导和植株再生的影响。结果表明：唐菖蒲籽球的中部切片为最佳外植体,倒接（形态学下端向上）是最佳接种方式,诱导非胚性（NEC）和胚性（EC）愈伤组织形成的最佳诱导培养基分别为MS＋6mg·L^-1 NAA和MS＋6mg·L^-1 TDZ,诱导率分别达65．53％和71．88％。NEC和EC均能分化不定芽,分化率分别达88．89％和61．11％。最佳生根培养基上的生根率为87．50％。     

新疆雪莲体细胞胚胎发生

通过体细胞胚胎发生途径实现了新疆雪莲（Saussurea involucrata Kar．et Kir．）的植株再生。选用新疆雪莲子叶为外植体,接种于MS＋0．5mg·L^-12,4-D＋0．05—1mg·L^-1BA的固体培养基上,进行愈伤组织的诱导。从第1次继代培养的愈伤组织中挑选出黄绿色、颗粒状、质地致密的腔陛愈伤组织,转移到含0．05—0．1mg·L^-1 2,4-D的MS液体培养基中进行悬浮培养,20天后可分化产生大量球形胚。继代过程中相继加入PEG和GA3,可以促进体细胞胚的分化和生长。体细胞胚在含有5mg·L^-1 GA3的MS固体培养基上,可发育成完整的植株。     

香果树茎段和叶片的组织培养

以香果树（Emmenopterys henryi Oliv．）实生苗带芽茎段和叶片为外植体进行组织培养。结果表明,香果树带芽茎段愈伤组织的最适诱导培养基为含有1．0mg·L^-1～6-BA和0．01mg·L^-1 NAA的MS培养基,愈伤组织诱导率达100％;愈伤组织分化的最适培养基为添加2．0mg·L^-1KT和0．01mg·L^-1 NAA的MS培养基;在含有1．0mg．L^-1～6-BA和0．1mg·L^-1 NAA的MS培养基上,叶片诱导不定芽的效果较好,诱导率可达80％;在含有2．0mg．L^-1 KT和0．1mg·L^-1 NAA的MS培养基上,不定芽的增殖系数可达3—4;以含有1．5mg·L^-1 IBA的1／2MS培养基为生根培养基,香果树试管苗生根率达72．73％。移栽至大田后,香果树试管苗的成活率达到30％。     

香果树体细胞胚胎发生

香果树叶子在附加1.0mg·L-12,4-D 0.5 mg·L-1KT 3%蔗糖的MS固体培养基上培养,可诱导出愈伤组织.愈伤组织在附加0.7 mg.L-1KT 0.3 mg·L-16-BA 3%蔗糖的MS液体培养基中避光悬浮培养时,可形成体细胞胚胎.体细胞胚胎可在不含植物生长调节剂的MS固体培养基上形成正常植株.     

甜高粱再生体系的建立

利用甜高粱成熟种子和成熟胚作为外植体,通过愈伤组织再生途径建立了植株再生体系。结果表明,成熟种子在添加1.38 g·L^-1脯氨酸、500 mg·L^-1水解酪蛋白和3.0 mg·L^-1 2,4-D的MS培养基上可以较快地诱导出生长状态良好的愈伤组织;成熟胚在添加1.38 g·L^-1脯氨酸、500mg·L^-1水解酪蛋白、2.5 mg·L^-1 2,4-D和0.1 mg·L^-1KT的MS培养基上也能诱导出生长良好的愈伤组织。将愈伤组织转移到MS＋1 mg.L^-1 IAA＋0.5 mg·L^-1 6-BA培养基上诱导芽,然后再转移到MS＋3 mg·L^-1IBA培养基上生根后,可发育成为完整的植株。     

阳桃的组织培养与快速繁殖

以阳桃茎段为材料进行组培快繁。结果表明：阳桃离体培养的细胞分裂素以ZT的效果最好,其次是BA,KT最差;植物生长调节物质是NAA最好,其次是IBA、IAA;较适宜的植物生长调节物质配比为BA 0．5mg L^-1 NAA 0．2mg L^-1 GA 0．2mg L^-1,增殖系数高达3．7,而且畸苗率较低(23．3％)。生根培养基以1／2MS IBA 0．2mg L^-1 IAA 0．1mg L^-1效果好,生根率达87．1％,蔗糖浓度以2．0％一3．0％为宜。     

亚麻胚性细胞悬浮培养体系的建立和影响因素

亚麻品种‘双亚五号’的胚性愈伤组织诱导最佳培养基为MB（MS无机盐加B5维生素）＋1.0mg·L^-12,4-D;细胞初始悬浮培养的最佳培养基为MB＋0.2mg·L-16-BA;细胞继代悬浮培养的最佳培养基为改良的MB（NH4NO3减半,KNO3加倍）＋0.02mg·L^-12,4-D＋0.2mg·L^-16-BA;适宜的蔗糖量为50g·L^-1;适宜的继代接种量为1.0～1.5g·（25mL）^-1;继代间隔为5～7d。     

油樟悬浮培养及次生代谢产物的诱导

以油樟（Cinnamomum longepaniculatum）叶片为外植体在附加6-BA和NAA不同激素浓度组合的MS培养基上筛选质地疏松、生长旺盛的愈伤组织,分别接种在MS、B5、WPM三种液体培养基中进行细胞悬浮培养,并检测诱导产生的次生代谢产物。结果表明：2mg·L^-16-BA＋0.5mg·L^-1NAA能诱导质地疏松、生长旺盛的愈伤组织,B5基本培养基中细胞长势最好;愈伤组织在B5＋2mg·L^-16-BA＋0.5mg·L^-1NAA中悬浮培养,继代2次后形成均一的单细胞;从油樟悬浮培养物中检测出50%以上的成分是苯甲醇。     

新型分裂素PBU对尾巨桉胚性愈伤组织诱导及植株再生的影响

以尾巨桉优良无性系无菌苗茎段为外植体,通过对噻唑基脲类新型分裂素（N-phenyl-N′-[6-（2-chlorobenzothiazol）-yl]urea,PBU）等多种不同浓度生长调节剂组合的优化,进行胚性愈伤组织诱导及植株再生研究。结果表明,在添加了2mg·L^-1PBU和0.05mg·L^-1IAA的改良MS培养基上,茎段外植体培养5d后愈伤组织诱导率达96%以上。将愈伤组织接种在添加1mg·L^-16-BA和0.05mg·L^-1NAA的MS培养基上,诱芽率达90.8%。随后在添加了0.8mg·L^-1PBU与0.05mg·L^-1IAA的1/2MS培养基上诱导芽伸长,用1/2MS培养基附加0.5mg·L^-1IBA诱导生根,移栽后得到完整再生植株。     

水杉愈伤组织诱导及植株再生

通过愈伤组织诱导器官发生途径,建立了水杉（Metasequoia glyptostroboides）的植株再生体系,探讨了不同外植体（种胚、幼叶切块、茎段、根段）和植物生长调节剂对不定芽直接再生和愈伤组织诱导器官发生的影响。结果表明：以种胚、无菌苗叶片、茎段和根作为外植体,在MS补加2,4-D、NAA和6-BA不同组合的培养基上都能诱导得到愈伤组织,其中种胚诱导愈伤组织效果最好,诱导率可达100%,茎诱导效果次之,诱导率为97.1%。诱导愈伤组织效果较好的培养基有：MS＋1.0mg·L-12,4-D＋0.5mg·L-16-BA、MS＋0.1mg·L-16-BA＋1.0mg·L-1NAA、MS＋0.5mg·L-16-BA＋1.0mg·L-1NAA、MS＋1.0mg·L-16-BA＋1.0mg·L-1NAA、MS＋0.5mg·L-16-BA＋2.0mg·L-1NAA、MS＋1.0mg·L-16-BA＋2.0mg·L-1NAA和MS＋0.5mg·L-12,4-D＋0.5mg·L-1NAA。以愈伤组织在MS培养基上植株再生效果最好,再生率为62.5%。     

松潘乌头块根愈伤组织诱导及再生体系的建立

以野生松潘乌头块根为材料,进行愈伤组织诱导与植株再生培养。由于松潘乌头离体培养时,组织褐变严重,因此在愈伤组织诱导前须进行除褐培养,培养基以MS＋6-BA 1.0 mg·L^-1＋VC 300 mg·L^-1＋PVP 200 mg·L^-1效果较好,连续转移3次后褐变率显著降低到10%。适宜的愈伤组织诱导培养基为MS＋2,4-D 3.0 mg·L-1＋6-BA 2.0 mg·L^-1＋LH 500 mg·L^-1,诱导率100%;不定芽分化培养基为MS＋ZT 1.0 mg·L^-1＋6-BA 2.0 mg·L^-1＋NAA 0.5 mg·L^-1,分化率93%;不定芽增殖培养基为MS＋6-BA 2.0 mg·L^-1＋NAA 0.3 mg·L^-1,平均增殖倍数为6.0左右;生根培养基为1/2MS＋IAA 0.3 mg·L^-1＋VC 100 mg·L^-1（或PVP 300 mg·L^-1）,平均生根数10条左右,生根率为96%以上。将瓶苗移栽于森林土和蛭石以1：1（V/V）混合的基质中,生长良好,成活率达90%以上。     

‘巴斗’杏再生体系的建立与耐盐突变体的筛选

以‘巴斗’杏试管苗茎段为外植体,研究其再生体系的建立以及在含不同浓度NaCl培养基上诱导耐盐愈伤组织,筛选耐盐突变体。结果显示：茎段在MS＋6-BA1．5mg·L^-1＋IBA0．5mg·L^-1培养基上诱导愈伤组织效果最好,芽的分化率可达88％;将出芽愈伤组织块接种到附加IBA0．5mg·L^-1＋KT2．0mg·L^-1的MS分化培养基上效果最佳,芽的分化系数最高为12．7;较理想的生根培养基为MS＋NAA0．1mg·L^-1。＋IBA0．2mg·L^-1,生根率在46．3％以上;在含0．8％NaCl的愈伤组织诱导培养基中,连续继代筛选2代,转入不含NaCl的分化培养基中,分化出了完整植株。经继代培养筛选,测定发现获得的耐盐植株比正常培养植株的游离脯氨酸含量高。     

珍稀濒危植物珙桐胚的萌发与快速繁殖

首次采用均匀设计和回归分析方法对影响珙桐（Davidia involucrata）胚萌发的3种因素（基本培养基、赤霉素和活性炭）进行优化,并利用萌发胚建立了珙桐的高效再生体系。利用回归方程得出胚萌发的最优条件为：在含有0．5mg·L^-1 IBA和1mg·L^-16·BA的1/2MS培养基中添加2．85mg·L^-1GA3和0．25g·L^-1活性炭。在验证实验中珙桐胚萌发率为87．72％,与预测值无显著差异。最优的芽诱导与增殖条件为：添加0．1mg·L^-1NAA和2．0mg·L^-16-BA的WPM培养基,增殖系数为4．34。在生根培养基中增殖的芽生根率高达90％,移栽成活率为71％。     

肥荚红豆种子无菌诱导植株再生及快速繁殖

以肥荚红豆种子为外植体,研究了种子预处理、诱导萌发、不定芽增殖、壮苗、生根的方法,摸索培养基中激素的最佳配比,建立了肥荚红豆组织培养快速繁殖技术。结果表明：5％～10％NaOH溶液浸泡种子1h的预处理有利于促进肥荚红豆种皮的剥离和种子萌发;适宜于种子萌发的培养基为MS（Read）＋6-BA0．5mg·L^-1＋NAA0．1mg·L^-1,萌发率可达100％;最佳增殖培养基为Read＋6．BA1．0～1．5mg·L^-1＋KT0．1mg·L^-1＋NAA0．1mg·L^-1,增殖数可达每瓶23个以上;最佳壮苗培养基为Read＋6．BA0-0．5mg·L^-1＋NAA0．1mg·L^-1：最佳生根培养基为Read＋IAA1．0mg·L^-1,其生根率可达90．54％。研究结果提高了肥荚红豆的繁殖效率,有效促进肥荚红豆组培规模化育苗技术的成熟与推广应用,对推动其产业开发应用具有重要意义。     

Tissue culture and plant regeneration of Helianthemum songaricum Schrenk]

The cotyledonary segments of sterile seedlings of Helianthemum Songaricum Schrenk were cultured on different media containing different phytohormons. It was found that the calli could be induced efficiently on MS basal medium supplemented with 10.0 mg/L NAA and 0.2 mg/L 6-BA. When calli were transferred on MS medium with 2.0 mg/L 6-BA and 0.2 mg/L NAA, shoots were produced. The frequency of shoot differentiation reached about 85%. The regenerated shoots were rooted on 1/2MS medium added with 0.5 mg/L NAA. The rooting rate was about 76%. Regenerated plantlets were successfully transplanted in soil, with a success rate of 67%.     

茶条槭愈伤组织的再生体系建立及其没食子酸含量的测定

通过愈伤组织诱导途径,建立了快速高效的茶条槭再生体系。成熟种子在MS＋1．0mg·L^-1 6-BA的培养基中萌发,以茎段作为外植体,在WPM＋0．002-0．01mg·L^-1 TDZ＋0．1mg·L^-1 6-BAR培养3周诱导形成愈伤组织,诱导频率平均为98．0％。愈伤组织转入WPM＋0．01mg·L^-1 TDZ＋0．1mg·L-^1 6-BA培养基中得到再生芽,分化频率为42．0％,平均每块愈伤产生再生芽10个左右。转到WPM＋0．3mg·L^-1 IBA的培养基上的再生芽均可生根并长成完整植株,小苗移栽成活率达到89．0％。实验还建立了愈伤组织中没食子酸的提取和HPLC检测方法。对深绿色愈伤组织连续培养2个继代后,没食子酸含量达到2．8％。     

麻竹花药培养及再生植株的获得

以麻竹（Dendrocalamus latiflorus Munro）花药为材料, 于M8＋2 mg·L^–1 NAA ＋0.5 mg·L^–1 6-BA＋15 mg·L^–1 PAA＋7.5 mg·L^–1 STS＋500 mg·L^–1 CH＋100 mg·L^–1 proline＋100 mg·L^–1 glutamin＋5.4% maltose＋0.8% agar的诱导培养基上成功诱导出胚性愈伤组织, 在此培养基上继代可形成体胚并分化成苗, 初步建立了麻竹花药一步成苗的再生体系。