茶条槭愈伤组织的再生体系建立及其没食子酸含量的测定

通过愈伤组织诱导途径, 建立了快速高效的茶条槭再生体系。成熟种子在MS+1.0 mg·L-1 6-BA的培养基中萌发, 以茎段作为外植体, 在WPM+0.002-0.01 mg·L-1 TDZ+0.1 mg·L-1 6-BA中培养3周诱导形成愈伤组织, 诱导频率平均为98.0%。愈伤组织转入WPM+0.01 mg·L-1 TDZ+0.1 mg·L-1 6-BA培养基中得到再生芽, 分化频率为42.0%,平均每块愈伤产生再生芽10个左右。转到WPM+0.3 mg·L-1 IBA的培养基上的再生芽均可生根并长成完整植株, 小苗移栽成活率达到89.0%。实验还建立了愈伤组织中没食子酸的提取和HPLC检测方法。对深绿色愈伤组织连续培养2个继代后, 没食子酸含量达到2.8%。     

柚木无性系愈伤组织诱导及植株再生

以柚木优良无性系71-14组培苗节间茎段为材料,MS 为基本培养基,采用正交设计对6-BA、IBA、TDZ、NAA 等4个生长调节剂各4水平进行愈伤组织诱导,并以最佳组合使用不同浓度的 TDZ 进行柚木愈伤组织再生.结果表明：TDZ 对形成具再生能力的致密型愈伤组织影响最大,低浓度水平的 TDZ 和6-BA 更易形成致密型愈伤组织;以愈伤组织大小、诱导率和致密型所占比例采用隶属函数法评定得出最优的愈伤组织诱导培养基为 MS＋0．9 mg·L-16-BA＋0．04 mg·L-1 IBA＋0．02 mg·L-1 TDZ＋0．8 mg·L-1 NAA,愈伤组织诱导率达80．78％、平均直径1．65 cm,获致密型愈伤组织83．0％;得出优化的再生培养基为 MS＋0．132 mg·L-1 TDZ,分化率为34．22％;初步建立了以茎段为外植体的柚木优良无性系71-14的再生体系,为柚木转基因技术的研究提供技术支撑.     

香果树茎段和叶片的组织培养

以香果树（Emmenopterys henryi Oliv．）实生苗带芽茎段和叶片为外植体进行组织培养。结果表明,香果树带芽茎段愈伤组织的最适诱导培养基为含有1．0mg·L^-1～6-BA和0．01mg·L^-1 NAA的MS培养基,愈伤组织诱导率达100％;愈伤组织分化的最适培养基为添加2．0mg·L^-1KT和0．01mg·L^-1 NAA的MS培养基;在含有1．0mg．L^-1～6-BA和0．1mg·L^-1 NAA的MS培养基上,叶片诱导不定芽的效果较好,诱导率可达80％;在含有2．0mg．L^-1 KT和0．1mg·L^-1 NAA的MS培养基上,不定芽的增殖系数可达3—4;以含有1．5mg·L^-1 IBA的1／2MS培养基为生根培养基,香果树试管苗生根率达72．73％。移栽至大田后,香果树试管苗的成活率达到30％。     

火龙果愈伤组织诱导与植株再生

为了建立火龙果愈伤组织诱导与植株再生体系,以火龙果茎段、幼苗和子叶为外植体进行离体培养试验。结果表明：茎段诱导愈伤组织的最优培养基为1／2MS＋2,4-D2．0mg·L^-1＋6-BAO．5mg·L^-1,诱导子叶愈伤组织的最适培养基是1／2MS＋2,4-D2．0mg·L^-1＋6-BA1．0mg·L^-1,诱导愈伤组织分化的最优培养基为1／2MS＋6-BA4．0mg·L^-1＋NAA0．5mg·L^-1,最佳生根培养基为1／2MS＋6．BA1mg·L^-1＋NAA0-3mg·L^-1。     

胡杨雌花离体培养中的不定根诱导和植株再生体系的建立

正交实验的方差和极差分析表明,胡杨雌花诱导的愈伤组织和芽的效果明显优于雄花;雌花诱导愈伤组织的最适培养基是B5添加1．0mg·L^-16-BA和1．0mg·L^-1。NAA,诱导芽的最适培养基为MS＋0．5mg．L^-16-BA＋0．2mg．L^-1NAA,诱导根的最适培养基为1／2MS＋0．5mg·L^-1IBA。     

甜高梁离体再生体系的建立和组织结构变化的观察

以甜高粱成熟种子为外植体,调节不同生长调节物质配比建立甜高梁离体再生体系。结果表明在MS＋2．5mg．L^-12,4．D＋0．3mg·L^-1KT培养基上愈伤组织的诱导率可达77．26％;比较不同浓度6-BA或TDZ与NAA配合诱导愈伤组织分化和苗形成的情况,TDZ的作用优于6-BA。观察培养组织的结构变化发现,甜高粱离体再生过程中除了体细胞胚发生途径之外,还伴随有器官发生途径。     

‘巴斗’杏再生体系的建立与耐盐突变体的筛选

以‘巴斗’杏试管苗茎段为外植体,研究其再生体系的建立以及在含不同浓度NaCl培养基上诱导耐盐愈伤组织,筛选耐盐突变体。结果显示：茎段在MS＋6-BA1．5mg·L^-1＋IBA0．5mg·L^-1培养基上诱导愈伤组织效果最好,芽的分化率可达88％;将出芽愈伤组织块接种到附加IBA0．5mg·L^-1＋KT2．0mg·L^-1的MS分化培养基上效果最佳,芽的分化系数最高为12．7;较理想的生根培养基为MS＋NAA0．1mg·L^-1。＋IBA0．2mg·L^-1,生根率在46．3％以上;在含0．8％NaCl的愈伤组织诱导培养基中,连续继代筛选2代,转入不含NaCl的分化培养基中,分化出了完整植株。经继代培养筛选,测定发现获得的耐盐植株比正常培养植株的游离脯氨酸含量高。     

松潘乌头块根愈伤组织诱导及再生体系的建立

以野生松潘乌头块根为材料,进行愈伤组织诱导与植株再生培养。由于松潘乌头离体培养时,组织褐变严重,因此在愈伤组织诱导前须进行除褐培养,培养基以MS＋6-BA 1.0 mg·L^-1＋VC 300 mg·L^-1＋PVP 200 mg·L^-1效果较好,连续转移3次后褐变率显著降低到10%。适宜的愈伤组织诱导培养基为MS＋2,4-D 3.0 mg·L-1＋6-BA 2.0 mg·L^-1＋LH 500 mg·L^-1,诱导率100%;不定芽分化培养基为MS＋ZT 1.0 mg·L^-1＋6-BA 2.0 mg·L^-1＋NAA 0.5 mg·L^-1,分化率93%;不定芽增殖培养基为MS＋6-BA 2.0 mg·L^-1＋NAA 0.3 mg·L^-1,平均增殖倍数为6.0左右;生根培养基为1/2MS＋IAA 0.3 mg·L^-1＋VC 100 mg·L^-1（或PVP 300 mg·L^-1）,平均生根数10条左右,生根率为96%以上。将瓶苗移栽于森林土和蛭石以1：1（V/V）混合的基质中,生长良好,成活率达90%以上。     

费尔干猪毛菜愈伤组织的诱导、分化及植株再生体系的建立

探讨了植物生长调节剂、外植体等因子对费尔干猪毛菜（Salsola fergartica Drob．）愈伤组织诱导、分化与植株再生的影响。结果表明：2,4-D与6-BA组合使用时,在一定浓度范围内均有愈伤组织产生,最佳的诱导培养基为MS＋2,4-D2．0mg／L＋6-BA0．2mg／L,下胚轴为诱导愈伤组织的最佳材料;愈伤组织继代培养较好的培养基为MS＋NAA0．1mg／L＋6-BA1．0mg／L;愈伤组织不定芽分化培养基为MS＋6-BA0．5mg／L＋NAA0．05mg／L;根分化的培养基为1／2MS＋IBA0．2mg／L,且生根率可达72％。以带柄子叶为外植体,诱导丛生芽的最佳分化培养基为MS＋6-BA1．0mg／L,再生频率可达90．74％。     

甜高粱再生体系的建立

利用甜高粱成熟种子和成熟胚作为外植体,通过愈伤组织再生途径建立了植株再生体系。结果表明,成熟种子在添加1.38 g·L^-1脯氨酸、500 mg·L^-1水解酪蛋白和3.0 mg·L^-1 2,4-D的MS培养基上可以较快地诱导出生长状态良好的愈伤组织;成熟胚在添加1.38 g·L^-1脯氨酸、500mg·L^-1水解酪蛋白、2.5 mg·L^-1 2,4-D和0.1 mg·L^-1KT的MS培养基上也能诱导出生长良好的愈伤组织。将愈伤组织转移到MS＋1 mg.L^-1 IAA＋0.5 mg·L^-1 6-BA培养基上诱导芽,然后再转移到MS＋3 mg·L^-1IBA培养基上生根后,可发育成为完整的植株。     

狭叶小金梅草组织培养与快速繁殖

以狭叶小金梅草(Hypoxis angustifolia)当年花苞为材料进行离体快速繁殖体系研究。结果表明,花苞的愈伤诱导适宜培养基为MS+6-BA 0.8 mg·L^-1+NAA 0.05 mg·L^-1+TDZ 0.1 mg·L^-1;诱导芽培养基为MS+6-BA 0.5 mg·L^-1+NAA 0.02 mg·L^-1+AC(活性碳)0.2 g·L^-1;芽继代增殖培养基为MS+6-BA 1.0 mg·L^-1+NAA 0.1 mg·L^-1+花宝1号1 g·L^-1+AC 0.2 g·L^-1,30 d为一个继代周期,增殖系数达10~20倍;壮苗生根培养基为1/2MS+IBA 0.5 mg·L^-1+NAA 0.02 mg·L^-1+AC 0.5 g·L^-1。将生根苗移栽至泥土:蛭石按3:1配制旳基质中,盖膜保湿,成活率达80%。     

雷竹体细胞胚诱导的初步研究

以雷竹（Phyllostachys violascens）种胚为外植体, 脱分化产生愈伤组织, 愈伤组织诱导产生体细胞胚, 并发育成苗。实验结果表明： 愈伤组织诱导体细胞胚基本培养基为MS无机盐＋20 g·L^-1葡萄糖（glucose）＋10 mg·L^-1腺嘌呤（adenine sulfate）＋ 0.5 g·L^-1麦芽抽提物（malt extract）＋0.1 mg·L^-1 6-BA＋0.01 mg·L^-1氨氯吡啶酸（picloram）＋10 g·L^-1type A agar; 将基本培养基中的氨氯吡啶酸浓度升高至0.1 mg·L^-1即为愈伤组织诱导的最佳培养基, 早期子叶胚是愈伤组织诱导的最佳胚体; 愈伤组织在添加0.001 mg·L^-1TDZ和0.3 mg·L^-1ABA的愈伤组织最佳培养基上光照培养4周后, 去除其中的ABA, 并添加0.1 mg·L^-1NAA继续培养1个月, 体细胞胚数量最多可达87.43%, 该培养基是体细胞胚发生的最佳培养基; 将上述体细胞胚发生培养基中的6-BA浓度升高至1 mg·L^-1, 继代培养2个月后有小苗出现。组织学观察显示, 体细胞胚细胞核大、质浓且多数呈球形原胚状。     

矮丛蓝莓叶片的愈伤组织诱导及植株再生

以矮丛蓝莓'Blomidon'品种的试管苗叶片为外植体,研究不同培养基、激素、转接时间以及转接方式对愈伤组织诱导及植株再生的影响.结果表明:WPM1/2为适宜的培养基;添加0.5 mg·L~(-1) CPPU+1.0 mg·L~(-1) ZT+0.5 mg·L~(-1) TDZ和0.5 mg·L~(-1) CPPU+0.5 mg·L~(-1) ZT+1.0 mg·L~(-1) TDZ诱导愈伤率较高达100%;ZT、CPPU与生长素IAA、IBA的配比诱导愈伤率效果不佳;添加ZT诱导的愈伤组织适合20 d后转接,CPPU诱导的愈伤组织适合50 d后转接;转接方式均以固体培养为宜.矮丛蓝莓'Blomidon'最适宜培养基为WPM1/2+0.5 mg·L~(-1) CPPU+1.0 mg·L~(-1) ZT+0.5 mg·L~(-1) TDZ,其诱导愈伤组织50 d后转接平均分化芽数最多达10.26个.     

多花黄精诱导愈伤组织与不定芽培养基筛选

以多花黄精Polygonatum cyrtonema的根状茎为外植体,通过L9(34)正交试验比较不同植物生长调节剂及其组合对多花黄精愈伤组织诱导的影响,筛选最适生长调节剂配方,同时筛选通过器官发生方式直接成芽较为合适的培养基。结果表明,含有2,4-D和KT的培养基诱导愈伤组织效果显著,多花黄精愈伤组织诱导的最适培养基为MS + 6-BA 2.0 mg·L-1 + 2,4-D 0.5 mg·L-1 + NAA 0.1 mg·L-1 + KT 1.0 mg·L-1,该培养基的愈伤组织诱导率可达39.10%;培养基MS + 6-BA 4.0 mg·L-1 + NAA 0.2 mg·L-1可诱导多花黄精根状茎直接产生不定芽。     

珍稀濒危植物珙桐胚的萌发与快速繁殖

首次采用均匀设计和回归分析方法对影响珙桐（Davidia involucrata）胚萌发的3种因素（基本培养基、赤霉素和活性炭）进行优化,并利用萌发胚建立了珙桐的高效再生体系。利用回归方程得出胚萌发的最优条件为：在含有0．5mg·L^-1 IBA和1mg·L^-16·BA的1/2MS培养基中添加2．85mg·L^-1GA3和0．25g·L^-1活性炭。在验证实验中珙桐胚萌发率为87．72％,与预测值无显著差异。最优的芽诱导与增殖条件为：添加0．1mg·L^-1NAA和2．0mg·L^-16-BA的WPM培养基,增殖系数为4．34。在生根培养基中增殖的芽生根率高达90％,移栽成活率为71％。     

欧洲百合愈伤组织诱导及植株再生体系的建立

以欧洲百合(Lilium martagon)无菌苗鳞片为外植体, 探讨不同植物激素组合及光暗培养条件对愈伤组织诱导、增殖和再生不定芽的影响, 进而建立欧洲百合高效再生体系。结果显示, 诱导愈伤组织的最佳培养基为MS+0.2 mg?L^-1 TDZ+0.5 mg?L^-1 NAA, 诱导率为77.14%。在添加TDZ和NAA组合的培养基中进行继代培养, 愈伤组织极易褐化, 胚性活性下降; 采用添加6-BA和NAA组合的培养基可改善愈伤组织的褐化现象, MS+0.5 mg?L^-1 6-BA+0.1 mg?L^-1 NAA是愈伤组织增殖的最佳培养基, 增殖指数为2.93, 表明6-BA在愈伤组织状态维持中起关键作用。暗培养条件下愈伤组织的诱导率、增殖指数和芽再生系数最高, 分别可达77.14%、2.93和5.43, 且愈伤组织生长状态较好, 不定芽生根正常。研究建立的欧洲百合高效再生体系对于百合种质资源保存、基因工程育种及在国内的推广应用具有重要意义。     

油樟悬浮培养及次生代谢产物的诱导

以油樟（Cinnamomum longepaniculatum）叶片为外植体在附加6-BA和NAA不同激素浓度组合的MS培养基上筛选质地疏松、生长旺盛的愈伤组织,分别接种在MS、B5、WPM三种液体培养基中进行细胞悬浮培养,并检测诱导产生的次生代谢产物。结果表明：2mg·L^-16-BA＋0.5mg·L^-1NAA能诱导质地疏松、生长旺盛的愈伤组织,B5基本培养基中细胞长势最好;愈伤组织在B5＋2mg·L^-16-BA＋0.5mg·L^-1NAA中悬浮培养,继代2次后形成均一的单细胞;从油樟悬浮培养物中检测出50%以上的成分是苯甲醇。     

马尾松胚乳愈伤组织发生的初步研究

为获取马尾松(Pinus massoniana)单倍体材料，建立其胚乳组织培养体系，对马尾松胚乳不同的消毒方法进行筛选，并分析不同基本培养基、生长调节剂配比和热激处理对愈伤诱导的影响。结果表明，胚乳的最佳消毒方式为75%酒精处理30 s+2% NaClO消毒15 min，外植体污染率为0，死亡率仅为15.56%；生长素可促进愈伤诱导且是必需的；细胞分裂素浸泡种子可代替培养基中的细胞分裂素，并能取得比较好的胚乳愈伤诱导效果，1.0 mg·mL-1 6-BA浸泡30 min处理的效果最佳，在培养基WPM+NAA 2.0 mg·L-1+2,4-D 1.0 mg·L-1+蔗糖30 g·L-1+琼脂7 g·L-1中，愈伤诱导率高达87.78%；培养基DCR+NAA 2.0 mg·L-1+6-BA 1.0 mg·L-1+蔗糖30 g·L-1+琼脂7 g·L-1的胚乳愈伤诱导率最高(68.75%)；热激处理可提高胚乳愈伤的诱导率和质量，以相对湿度85%下45 ℃热激10 min最佳，总愈伤诱导率为66.25%，成团愈伤诱导率达8.75%；增殖培养以培养基WPM+NAA 0.1 mg·L-1+6-BA 2.0 mg·L-1+蔗糖30 g·L-1+琼脂7 g·L-1最佳，增殖率达83.33%。