Rb基因在人胃癌中异常的初步观察

Rb基因是一种抗癌基因,其产物Rb蛋白与细胞转化、细胞周期调节及转录调控有密切关系。许多肿瘤如视网膜母细胞瘤、乳腺癌、小细胞肺癌、前列腺癌、膀胱癌、骨肉瘤、软组织肉瘤等,都与Rb基因的失活或缺失有关。胃癌是消化道常见多发肿瘤,研究表明,其发生发展与多种癌基因的活化、抗癌基因的异常有关。我们用Southern印迹杂交法,以Rb基因为探针,检测了九例胃癌患者的癌组织和一个胃癌细胞株,发现它们与正常人血相比Rb基因全部呈现异常。其中5例发生Rb基因部分缺失,3例及人胃腺癌细胞株BGC-823全部缺失。这表明在胃癌发生过程中Rb基因的丢失是一个重要环节。我们相信用更灵敏的多聚酶链式反应(PCR)技术检测胃脱落细胞,对患癌危险性的早期预报会有很大帮助。同对,本实验也对肿瘤的基因治疗研究提供了靶细胞。     

Rb、P53调控平滑肌细胞c-fos和c-jun基因表达

为研究外源性Rb和P53基因导入血管平滑肌细胞后对c-fos和c-jun基因表达的调控作用,将Rb基因或P53基因重组腺病毒载体转染人脐动脉血管平滑肌细胞,应用RT-PCR和免疫组化法检测c-fos、c-jun的mRNA及蛋白质表达水平,以DNA琼脂糖凝胶电泳和β-半乳糖苷酶染色分别观察细胞凋亡和细胞衰老.结果显示,野生型P53基因导入可诱导平滑肌细胞凋亡,c-fos和c-jun mRNA及蛋白质表达水平显著增高.外源性Rb基因导入能促进细胞衰老,下调c-fos基因表达,但对c-jun基因表达没有明显影响.     

动物细胞凋亡相关基因在植物中的同源笥研究进展

细胞凋亡是由基因调节的主动过程。对动物细胞凋亡相关基因在植物中的同源性的研究发现,dad—1基因的结构和功能在动物和植物中均具有保守性。动物中的其他细胞凋亡相关基因,如ras、myc、Rb、p53、bcl-2 等基因,在植物中均有其同源序列,有的在植物中找到了功能相似的基因。细胞凋亡的调控机制在生物进化过程中,不但具有一定程度的保守性,而且在调控机制上具有多样性。     

P16^INK4、Rb基因表达在肺癌发生中协调性研究

采用mRNA原位双杂交和免疫组织化学方法对31例非小细胞肺癌组织进行P16^INK、Rb基因、Rb基因表达水平及其相关性的研究。结果显示,以Dig-碱性磷酸酶－NBT／BCIP系统检测P16^INK4基因转录,阳性结果呈蓝色,阴性杂交率为22．6％（7／31）;以Bio－辣根过氧化物酶－AEC系统检测Rb基因转录,阳性结果为红色,阴性率为16．1％（5／31）。免疫组织化学检测显示P16^INK4蛋白质阴性率为42％（13／31）;Rb蛋白表达阴性率为19．4％（6／31）。Rb、P16^INK4基因在非小细胞肺癌发生中起协同调控作用,以P16^INK4基因表达异常为主。     

Rb、P53调控平滑肌细胞c-fos和c-jun基因表达

为研究外源性Rb和P₅₃基因导入血管平滑肌细胞后对c-fos和c-jun基因表达的调控作用,将Rb基因或P₅₃基因重组腺病毒载体转染人脐动脉血管平滑肌细胞,应用RT-PCR和免疫组化法检测c-fos、c-jun的mRNA及蛋白质表达水平,以DNA琼脂糖凝胶电泳和β-半乳糖苷酶染色分别观察细胞凋亡和细胞衰老.结果显示,野生型P₅₃基因导入可诱导平滑肌细胞凋亡,c-fos和c-jun mRNA及蛋白质表达水平显著增高.外源性Rb基因导入能促进细胞衰老,下调c-fos基因表达,但对c-jun基因表达没有明显影响.     

胃癌及癌旁组织中Rb基因缺失和重排的研究

<正> Rb基因即视网膜母细胞瘤敏感基因,被认为是一种抑癌基因。它在正常细胞中存在,而在视网膜母细胞瘤中有缺失。将正常的Rb基因导入有Rb基因缺失的视网膜母细胞瘤和骨肉瘤细胞内,可以抑制上述两种肿瘤细胞的生长。目前已在多种人类肿瘤中如骨肉瘤、纤维肉瘤、小细胞肺癌、乳腺癌等发现有Rb基因的缺失。胃癌组织中Rb基因丢失的研究未见报道。本实验使用Southern杂交方法在胃癌及癌旁组织中进行Rb基因缺失和重排的研究,探索Rb基因在胃癌发生、发展中的作用。     

水稻bicoid反义基因转基因植株胚胎发育的形态变化

Bicoid 是调控果蝇胚胎极性及以后分节发生过程的重要基因,这一基因编码的蛋白是一种转录调控因子,对一组早期胚胎发育过程中的多齿基因的表达具有调控作用,并被称为形态发生剂。在以前的工作中,从水稻cDNA文库中分离了一个同果蝇bicoid 有相当同源性的克隆—Rb24 基因（EMBL登录号：AJ2771380） 。为进一步了解它在水稻中功能,将Rb 的反义基因片段通过农杆菌的介导转入水稻中。通过Gus活性检测和PCR鉴定所获的抗性植株为转基因植株,转基因植株一个很明显的变化就是大约有50%的种子是败育的。通过石蜡切片观察了转基因水稻幼胚的发育情况,结果表明细胞和组织的分化在胚的发育过程中被阻断了。因此Rb基因同控制水稻胚的发育有关。     

EB病毒阳性和阴性胃癌中视网膜母细胞瘤基因甲基化状态及其表达

目的:了解EB病毒(Epstein-Barr virus,EBV)相关胃癌(EBVaGC)和阴性胃癌(EBVnGC)组织中视网膜母细胞瘤(Rb)基因甲基化状态及蛋白表达,探讨EBV感染与Rb基因甲基化的关系.方法:采用甲基化特异性PCR(MSP)对各种临床病理指标匹配的23例EBVaGC和25例EBVnGC组织及相应癌旁组织中Rb基因启动子区域的甲基化状态进行检测,并采用免疫组化技术检测两种胃癌组织中Rb蛋白的表达.结果:胃癌与相应癌旁组织中Rb基因启动子区的甲基化率分别为64.6%(31/48)和39.6%(19/48),差异有显著性(P<0.05);EBVaGC组织中Rb基因启动子区的甲基化率为82.6%(19/23),高于EBVnGC中的检出率(48.0%,12/25),差异有显著性(P<0.05);EBVaGC和EBVnGC组织中Rb蛋白的表达率分别为52.2%(12/23)和72.0%(18/25),差异无显著性(P□0.05);胃癌组织中Rb启动子基因甲基化与蛋白表达无明显负相关.结论:Rb异常甲基化在胃癌细胞中较常见,EBV可以诱导Rb基因甲基化,影响其基因表达而参与EBVaGC的发生.     

水稻bicoid反义基因转基因植株胚胎发育的形态变化

Bicoid是调控果蝇胚胎极性及以后分节发生过程的重要基因,这一基因编码的蛋白是一种转录调控因子,对一组早期胚胎发育过程中的多齿基因的表达具有调控作用,并被称为形态发生剂。在以前的工作中,从水稻cDNA文库中分离了一个同果蝇bicoid有相当同源性的克隆-Rb24基因（EMBL登录号：AJ2771380）。为进一步了解它在水稻中功能,将Rb的反义基因片段通过农杆菌的介导转入水稻中。通过Gus活性检测和PCR鉴定所获的抗性植株为转基因植株,转基因植株一个很明显的变化就是大约有50%的种子是败育的。通过石蜡切片观察了转基因水稻幼胚的发育情况,结果表明细胞的组织的分化在胚的发育过程中被阻断了。因此Rb基因同控制水稻胚的发育有关。     

Rb蛋白功能缺陷降低肝细胞对TGF-β的敏感性

目的：探讨肝细胞内视网膜母细胞瘤（Rb）基因缺陷对转化生长因子-β（TGF-β）诱导的细胞周期静止的影响。方法：分离并培养原代肝细胞,特异性siRNA腺病毒封闭细胞内Rb基因表达后加入TGF-β诱导,然后MTT法检测细胞生长变化,流式细胞仪检测细胞周期变化,并用Western blot和荧光定量逆转录聚合酶反应（FQ-RT-PCR）法检测细胞中pRb、E2F、c-MYC和p16的表达变化。结果：原代培养肝细胞感染Rb-siRNA重组腺病毒后,正常对照肝细胞抑制率高于Rb基因封闭的肝细胞（69.76%,p<0.01）,流式细胞检测可见对照组TGF-β诱导后处于G1期的肝细胞数明显增多（99.80%,p<0.05）,而在Rb基因封闭组中,TGF-β诱导后各细胞周期分布与未诱导的正常肝细胞基本一致。Western blotting检测可见48h时对照组TGF-β诱导后,E2F和c-MYC蛋白表达减少而p16高表达,Rb基因封闭组TGF-β诱导后c-MYC表达减少而p16表达增高。结论：TGF-β可诱导肝细胞静止于G1期,而Rb基因功能缺陷的肝细胞对TGF-β的诱导敏感性显著降低。     

肿瘤抑制基因Rb与细胞周期调控研究新进展

Rb与人类多种肿瘤发生关系密切,是一种重要的肿瘤抑制基因.Rb蛋白参与细胞周期调控,与p16、CDK4/6、cyclinD1等形成复杂的反馈调节网络,在G1/S关卡调控中处于中心环节,决定着细胞周期的进程.Rb又是核内信号与胞外信号相互作用的界面,受到胞内外多种因素的调控,使Rb功能与细胞生长、分化状态相适应.     

胸苷激酶基因在人二倍体成纤维细胞衰老过程中的表达调控

为研究人胸苷激酶 (humanthymidinekinase ,hTK)基因在复制衰老细胞及早衰细胞中表达下调的分子机制 ,构建了含hTK启动子的荧光素酶报告基因载体 .转染结果显示 ,复制衰老细胞与早衰细胞中hTK启动子的转录活性比年轻细胞中下降了近 3倍 ,表明转录水平的调控是hTK在衰老细胞中表达下降的主要调控机制 .定点突变的结果显示 ,转录因子Sp1、NF Y结合位点的突变可使hTK启动子活性降低近 5 0 % ,而E2F结合位点的突变可使其活性升高 2倍多 ,提示Sp1和NF Y是hTK基因的转录活化因子 ,而E2F为转录抑制因子 .电泳迁移率变更实验发现 ,与年轻细胞相比 ,Sp1、NF Y与hTK启动子的DNA结合活性在复制衰老细胞和早衰细胞中无明显改变 ,提示转录活化因子Sp1、NF Y并非hTK在衰老细胞中下调的主要因素 .染色质免疫共沉淀结果显示 ,在细胞内Rb结合在hTK启动子上 ,且同年轻细胞相比 ,复制衰老细胞及早衰细胞中的hTK启动子结合着更多的Rb ,这提示细胞衰老过程中Rb的去磷酸化可能与hTK基因在衰老过程中的下调有关 .     

BRD7调控Rb/E2F通路的分子机制研究

BRD7是采用cDNA代表性差异分析法克隆的一个新的Bromodomain基因,过表达BRD7可抑制鼻咽癌细胞的生长和细胞周期进程,同时发现BRD7基因可以调控Rb/E2F通路的活性.该研究旨在进一步探讨BRD7调控Rb/E2F通路的分子机制.通过蛋白质印迹和RT-PCR实验方法发现,BRD7能够降低Rb的磷酸化水平,抑制cyclinD1、cyclinE的蛋白质表达,上调CDK4抑制子P19的mRNA表达,但对CDK4和CDK2的蛋白质表达没有明显影响;通过荧光素酶实验从转录调控水平进一步证实了BRD7能够明显抑制cyclinD1启动子活性;采用反义核酸技术抑制COS7细胞内源性BRD7的表达后,发现cyclinD1、cyclinE、磷酸化Rb的蛋白质表达水平上调,并且可以促进细胞生长.这些结果表明:BRD7参与调控Rb/E2F信号通路中重要靶分子的表达,抑制Rb/E2F通路的活性,从而阻止细胞周期G1-S期进程,抑制鼻咽癌细胞生长.     

Egr-1基因及其相关癌基因蛋白在放疗后食管鳞癌的表达

目的研究早期生长反应基因1（Egr-1基因）在放疗后切除人食管癌组织的表达及其与癌基因蛋白C－fos、C—Jun和Egr-1靶基因蛋白P53、Rb和Bax表达的关系。方法应用原位杂交和免疫组化法分别检测80例非放疗和放疗后外科切除食管鳞状细胞癌Egr－1mRNA、Egr-1、Cfos、C-Jun、P53、Rb和Bax蛋白的表达。结果Egr-1mRNA和Bax蛋白阳性定位于细胞质;而Egr-1、Fos、Jun、P53和Rb蛋白阳性定位于细胞核。40例非放疗和40例放疗后的食管癌切除肿瘤标本均存在Egr-1表达,其中40例例放疗病人外科切除标本Egr-1阳性表达9例（22．5％）,40例放疗后病人Egr-1阳性表达23例（57．5％）。Egr-1基因表达与Fos、Jun癌基因蛋白的表达无关。食管癌放疗后癌组织Egr-1超表达病人预后较好。结论放疗反应上调食管癌Egr-1表达。Egr-1超表达可作为食管鳞癌放疗反应的基因标志,并对食管鳞状细胞癌的预后判断有重要作用。     

动物细胞凋亡相关基因在植物中的同源性研究进展

细胞凋亡是由基因调节的主动过程.对动物细胞凋亡相关基因在植物中的同源性的研究发现,dad-1基因的结构和功能在动物和植物中均具有保守性.动物中的其他细胞凋亡相关基因,如ras、myc、Rb、p53、bcl-2 等基因,在植物中均有其同源序列,有的在植物中找到了功能相似的基因.细胞凋亡的调控机制在生物进化过程中,不但具有一定程度的保守性,而且在调控机制上具有多样性.     

抗癌基因──p53和Rb基因甲基化的研究进展

介绍p53和Rb基因甲基比研究的最新进展.CpG序列是DNA甲基化和基因突变的频发位点.p53和Rb基因的CpG序列易发生甲基化.其高度甲基化可能与基因功能失活有关,从而丧失抑制细胞增殖的功能,可能为肿瘤等发生的重要原因之一.     

Rb基因在小鼠胚胎发育中期肾组织的表达

用原位杂交法检测小鼠肾组织中细胞周期调控基因Rb的表达;用免疫组织化学及缺口末端标记法观察小鼠肾组织发育过程中的细胞增殖与凋亡：结果表明,Rb基因主要在肾上皮细胞表达,随胎龄增长而表达颜色加深。肾组织在第13天有一个较大的增殖增长,到第14天生长趋于稳定。以上结果说明Rb基因在小鼠胚胎肾发育中期有表达,该基因在胚胎肾发育中期起一定的作用;同时胚胎发育中期肾细胞增殖与凋亡相伴存在。     

防癌基因可成为肿瘤杀手

Jefferson医学院的研究发现，Rb2／p130肿瘤抑制基因(Rb2)还能抑制血管生成，这一发现可能导致新的、更有效的癌症治疗方法的出现。     

人细胞中QuOX-1基因的定位、表达和多态性

用Southern杂交法研究Quox-1基因在人正常白细胞、LCE细胞及其HeLa细胞中的限制性酶切片段多态性;免疫组织化学方法研究Quox-1基因在人细胞中的表达。结果表明：在正常人细胞DNA中存在鹌鹑Quox-1基因的同源序列,在LCE等肿瘤细胞中Quox-1基因表现出明显的限制性酶切片段多态性和基因扩增现象。Quox-1蛋白在HeLa、LCE等肿瘤细胞中激活表达,而在正常人白细胞未检测出Quox-1基因的表达。Quox-1基因同人类的肿瘤发生、发展和癌变具有一定的相关性。     

葡萄孤儿基因的表达分析和功能推测

孤儿基因为某物种基因组内特有的,在其它物种内没有同源基因存在的特殊基因.对物种孤儿基因的鉴定和分析已成为比较基因组学研究的一个新兴领域.本研究通过生物信息学的分析,着重研究了49个葡萄孤儿基因在各发育阶段和各器官中的特异表达特性、亚细胞定位预测和共表达基因群的生物学过程基因本体论(GO)分析.结果显示,35个基因在NCBI的EST数据库中存在EST表达证据,其中有7个基因具有器官表达特异性,且大部分在生殖器官中特异表达.通过亚细胞定位预测到大部分葡萄孤儿基因为分泌蛋白.GO分析表明葡萄孤儿基因的共表达基因群主要参与寡肽转运和跨膜运输等生物学过程,这与葡萄孤儿基因的亚细胞定位预测结果相一致.本文研究结果将为葡萄孤儿基因的进一步功能分析提供重要研究基础.