PKC抑制剂对力竭运动大鼠肾脏裂孔膜蛋白表达的影响*

目的: 观察大鼠在一次性力竭运动后肾脏裂孔膜蛋白的表达水平,探究PKC抑制剂对其蛋白表达水平的影响,揭示PKC在运动性蛋白尿形成中的作用机制。方法: SD雄性大鼠30只随机分为对照组(C)、运动组(E)、运动联合PKC抑制剂组(EPI),每组10只。E组和EPI组大鼠分别进行一次性跑台力竭运动(25 m/min),EPI组大鼠运动前1 d及1 h腹腔注射PKC抑制剂白屈菜红碱(chelerythrine,5 mg/kg),C组和E组注射相应体积的生理盐水。运动后即刻麻醉后,取血液、尿液及肾脏组织,使用化学比色法检测尿蛋白、尿酸、尿糖、血尿素、血尿酸、血糖水平,使用荧光探针法检测肾脏ROS水平,使用Western blot法检测肾脏PKC、Nox2、Nox4、nephrin、podocin蛋白表达。结果: ①与C组相比,E组尿蛋白、尿酸、尿糖、血尿素、血尿酸显著增多(P＜0.05),血糖显著减少(P＜0.01),肾脏ROS生成显著增多(P＜0.01),肾脏nephrin、podocin蛋白表达明显降低(P＜0.05),PKC、Nox2、Nox4蛋白表达明显增多(P＜0.05);②与E组比,EPI组尿蛋白、尿糖、血尿素显著减少(P＜0.05),血糖显著增加(P＜ 0.01),肾脏ROS生成显著降低(P＜0.01),EPI组肾组织中nephrin、podocin蛋白表达明显增加(P＜0.05),PKC、Nox2蛋白表达明显降低(P＜0.05)。结论: 一次性力竭运动通过PKC/NOX/ROS途径使大鼠肾脏裂孔膜蛋白nephrin、podocin表达下调;PKC抑制剂缓解力竭运动导致的肾脏裂孔膜蛋白表达下降,预防运动性蛋白尿的发生。     

JNK1信号分子参与调控糖尿病大鼠心肌细胞肥大和纤维化

目的:探讨c-jun N端蛋白激酶1(JNK1)信号分子在糖尿病(DM)大鼠心肌细胞肥大和纤维化过程中的作用。方法:使用60mg/kg链脲佐菌造模后,将造模成功的48只大鼠分为3组,依次为糖尿病模型组(A组,n=16),腹腔注射生理盐水20μg/(kg·d);AngⅡ给药组(B组,n=16),将血管紧张素Ⅱ+0.9%生理盐水的ALZET微渗透泵植入皮下,以剂量700 ng/kg·d血管紧张素Ⅱ连续给药6周;SP600125给药组(C组,n=16),一次性尾静脉注射15 mg/kg SP600125。另外,选取20只大鼠为正常对照组(D组),给予等量溶媒。连续喂养两个月后检测相关指标。每周检测大鼠的空腹血糖水平,并称重,之后处死大鼠,称量心脏重量,计算心体比值和左室指数,同时应用免疫组化法检测心肌组织中Vimentin、collagenⅠ和α-actin的表达情况,另外,应用RT-PCR检测心肌组织中PI3Km RNA和Akt-1m RNA的表达情况。结果:D组大鼠状态良好,无死亡现象;A组和B组大鼠状态不佳,C组大鼠状态较好,三组大鼠均有死亡现象;A组、B组和C组大鼠的体重、心重明显低于D组,而心体比值显著高于D组,且差异具有统计学意义(P0.05);A、B、C三组大鼠的体重、心重和心体比值之间的差异具有统计学意义(P0.05);A、B、C组大鼠造模后空腹血糖水平明显高于D组,差异具有统计学意义(P0.05);与D组相比,A组、B组和C组大鼠心肌组织中Vimentin、collagenⅠ和α-actin的平均光密度值明显升高;C组大鼠心肌组织中Vimentin、collagenⅠ和α-actin的平均光密度值显著低于A组和B组,同时B组大鼠心肌组织中Vimentin、collagenⅠ和α-actin的平均光密度值明显高于A组,差异均具有统计学意义(P0.05);A组、B组和C组大鼠心肌组织中PI3Km RNA和Akt-1m RNA表达水平明显高于D组,C组大鼠心肌组织中PI3Km RNA和Akt-1m RNA表达水平显著低于A组和B组,而A组大鼠心肌组织中PI3Km RNA和Akt-1m RNA表达水平明显低于B组,差异均具有统计学意义(P0.05)。结论:JNK1信号分子可以通过IRS-1-PI3K-Akt途径影响信号传导,进而诱发糖尿病心肌病,Vimentin、collagenⅠ和α-actin表达水平升高,加速心肌细胞肥大和纤维化的进程。使用抑制剂后能明显改善这些蛋白的表达,这为临床上的治疗提供理论基础。     

受体成分蛋白在降钙素基因相关肽和血管紧张素II对血管平滑肌细胞血管过氧化物酶1表达调控中的作用

血管紧张素II(angiotensin II,Ang II)和降钙素基因相关肽(calcitonin gene-related peptide,CGRP)在血管的损伤和保护中起重要作用。为了探讨CGRP受体成分蛋白(receptor component protein,RCP)在CGRP和Ang II对血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)血管过氧化物酶1(vascular peroxidase-1,VPO1)表达调控中的作用及机制,本研究采用体外培养鼠源性A10血管平滑肌细胞株(A10VSMC),给予CGRP或/和Ang II刺激,并用小干扰RNA(si RNA)干扰细胞RCP基因的表达,Western Blot检测RCP以及VPO1蛋白表达水平;RT-PCR检测RCP及VPO1 m RNA的表达水平。结果显示,在静止期野生型A10VSMC,CGRP和Ang II能分别上调RCP和VPO1蛋白和m RNA表达(均P0.05),但CGRP预孵育细胞后,Ang II诱导的RCP和VPO1蛋白表达降低(均P0.05);与野生型组比较,VPO1在所有RCP基因干扰组的表达均显著降低(均P0.01)。同时,在RCP基因干扰条件下,和对照组相比,CGRP处理组VPO1蛋白的表达显著增加,而Ang II组没有明显变化;和Ang II组相比,CGRP与Ang II联合作用显著增加VPO1蛋白表达,但这种作用能被抗氧化酶Catalase所抑制(P0.05)。以上结果提示,RCP可能参与CGRP或Ang II诱导的VPO1蛋白表达;RCP可能在介导CGRP和Ang II受体共同调控VPO1表达的信号转导整合中起一定作用。     

菠菜和芫荽对雄性大鼠性功能的影响与植物雌激素样作用研究

目的:研究菠菜、芫荽对雄性大鼠性功能的影响,探讨植物雌激素样作用机制。方法:60只正常雄性SD大鼠,随机分为正常组(N组)、大豆对照组(A组)、菠菜组(B组)、芫荽组(C组)和菠菜+芫荽组(D组),每组12只,不同饲料干预20周后,进行性行为学试验并取材。采用放免法检测各组外周血清中T、E2、LH、FSH和PRL等性腺轴激素含量,HE染色观察睾丸组织形态学变化,IHC和western blot法检测大鼠睾丸中ERα,ERβ蛋白表达。结果:(1)性行为学检测结果:C和D组插入、射精潜伏期较N组显著延长(P0.05),爬背、插入,射精次数较N组显著减少(P0.05);D组插入潜伏期较A组显著延长(P0.05)(2)性激素水平检测结果:D组T水平较N组显著降低(P0.05);C组E_2水平较A组显著升高(P0.05),D组E_2水平较N、A组显著升高(P0.05);C和D组LH水平较N组显著降低(P0.05),同时C组LH水平亦较A组显著降低(P0.05);FSH水平在各组之间无显著差异(P0.05);D组PRL水平较N组显著降低(P0.05)。(3)睾丸HE染色结果:光镜下N组睾丸组织结构完整,B、C和D组睾丸组织形态结构发生明显变化,生精小管间连接疏松,间质细胞减少,生精细胞减少。(4)ERα和ERβ的表达结果:ERα和ERβ分别在睾丸中精原细胞和间质细胞中表达,其中ERα在B、C和D组表达较N组显著增多(P0.05),ERβ在各组间无显著差异(P0.05)。结论:芫荽及菠菜和芫荽联合干预可延长大鼠爬背、插入、射精潜伏期和减少其爬背、插入和射精次数,导致大鼠性功能障碍;具体机制可能与发挥雌激素样作用,升高血清中E_2水平,使ERα在睾丸间质中的表达增多,进而降低T水平有关。芫荽与大豆相比具有更强的雌激素样作用,而菠菜与大豆雌激素样作用接近,菠菜和芫荽联合干预出现累加效应。     

Podocin蛋白对肾小球足细胞的影响

目的：探讨肾小球足细胞裂隙膜蛋白podocin对足细胞形态及蛋白尿的影响.方法：32只体重160g～220g的雄性SD大鼠按阿霉素给药剂量随机分成小剂量组（3.0mg/Kg）、肾病剂量组（7.5mg/Kg）、超剂量组（10.0mg/Kg）、正常对照组.于给药第三周末处死大鼠,用氯化苄乙氧铵比浊法检测大鼠24h尿蛋白量,用免疫胶体金电镜检测大鼠肾小球蛋白podocin的表达和足细胞形态.结果：阿霉素组大鼠24h尿蛋白排泄量明显高于正常对照组,尤以肾病组最明显（P＜0.05）;正常对照组大鼠podocin分布在靠近肾小球基底膜（GBM）的足突基底部,主要定位于裂隙隔膜的胞质面,部分金颗粒也可发现于GBM稍远的足突细胞表面.肾病组肾小球足突广泛融合,免疫胶体金颗粒几乎见不到;超剂量组和小剂量组podocin分布在靠近肾小球基底膜（GBM）的足突基底部,免疫胶体金颗粒数明显少于正常对照组,有部分足突退缩.结论：（1）podocin表达减少或消失可能是导致肾小球足突细胞融合的关键因素（2）蛋白尿的发生与肾小球足细胞裂隙膜蛋白podocin的减少或缺失有关.     

黄芩苷对STZ诱导糖尿病大鼠肾组织保护作用实验研究

目的探讨黄芩苷对链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病大鼠肾组织的保护作用及其相关机制。方法将用STZ造模成功的糖尿病大鼠48只,随机分为模型组、黄芩苷低、中、高剂量组,每组12只,另设空白组12只。持续给药18周。给药结束后测血糖、24小时尿蛋白总量、血浆及肾组织中血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)的含量、转化生长因子β1(TGF-β1)。结果与模型组比较,黄芩苷中、高剂量组能明显降低糖尿病大鼠血肌酐和24小时尿蛋白量,降低血浆中AngⅡ的含量,减少TGF-β1的表达。结论黄芩苷对糖尿病大鼠肾组织具有较好的保护作用,其机制可能通过降低糖尿病大鼠血浆中AngⅡ含量,抑制TGF-β1过度表达,改善肾小球毛细血管和基底膜的通透性,对糖尿病大鼠肾脏起保护作用。     

骨化三醇对自身免疫性甲状腺炎大鼠T淋巴细胞亚群的影响

目的:研究骨化三醇对自身免疫性甲状腺炎模型大鼠甲状腺功能、甲状腺过氧化物酶抗体(TPOAb)、甲状腺球蛋白抗体(TGAb)及脾脏T淋巴细胞亚群的影响。方法:20只Lewis大鼠采用高碘饮水联合猪甲状腺球蛋白皮下注射的方法建立自身免疫性甲状腺炎动物模型。造模成功后大鼠随机分为模型组和骨化三醇组。经10周灌胃后,检测各组大鼠甲状腺功能三项、甲状腺抗体,流式细胞技术检测大鼠脾脏T淋巴细胞亚群的比例。结果:(1)与正常组相比,模型组及骨化三醇组大鼠促甲状腺激素(TSH)明显降低,血清游离甲状腺素(FT4)及TPOAb、TGAb明显升高,差异均具有统计学意义(P0.01);与模型组大鼠相比,骨化三醇组大鼠TPOAb、TGAb明显降低(P0.01);(2)与正常组相比,模型组大鼠表现为Th1、Th17细胞比例升高(P0.05),Th1/Th2、Th17/Treg比例升高(P0.05),与模型组相比,骨化三醇组大鼠Th1、Th17细胞比例降低(P0.05),Th2、Treg比例升高(P0.05),Th1/Th2、Th17/Treg比例降低(P0.01)。结论:骨化三醇可通过抑制Th1、Th17免疫亢进,改善Th1/Th2、Th17/Treg失调,改善自身免疫性甲状腺炎免疫反应。     

二氢杨梅素激活AMPK通路预防糖尿病肾病的作用研究

目的:探讨二氢杨梅素(DHM)对糖尿病肾病(DN)的预防作用及其与激活腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)通路的关系。方法:选择40只SD雄性大鼠,采用腹腔注射链脲佐菌素(STZ)60 mg/kg的方法建立DN大鼠模型,并将其分为正常组(CON)、糖尿病肾病组(DN组)、实验组(DHM50 mg/kg、100 mg/kg)各10只。其中,实验组分别给予DHM(50 mg/kg、100 mg/kg)灌胃,DN组则给予蒸馏水灌胃,持续8周。采用HE和Masson染色法观察肾脏的病理形态,ELISA法检测大鼠肾脏组织中I型胶原(COL I)、IV型胶原(COL IV)、纤维连接蛋白(FN)的含量,Western blot法检测大鼠肾脏组织中AMPK、转化生长因子-β1(TGF-β1)、α-平滑肌动蛋白(a-SMA)、雷帕霉素哺乳靶蛋白(m TOR)、自噬相关微管相关蛋白1轻链3(LC3Ⅰ/LC3Ⅱ)、Beclin-1蛋白的表达。结果:HE染色显示与DN组相比,DHM组系膜基质增生减轻、系膜区变窄,肾小囊腔变宽以及囊壁黏粘减轻;Masson染色显示DHM组较DN组的肾间质蓝染程度变浅。ELISA结果显示DHM组COL I、COL IV、FN的含量较DN组明显降低(P0.01),且100 mg/kg DHM处理组COL I、COL IV、FN的含量明显低于50 mg/kg DHM处理组(P0.05)。Western blot检测结果显示DHM组肾脏组织AMPK、P-AMPK/AMPK、LC3Ⅰ/LC3Ⅱ和Beclin-1蛋白表达量显著高于DN组,且100 mg/kg DHM处理组以上指标均显著高于低剂量组(P0.01);而DHM组肾脏组织TGF-β1、α-SMA和m TOR的蛋白表达较DN组明显降低(P0.01),且100 mg/kg DHM处理组TGF-β1、m TOR表达显著低于50 mg/kg DHM处理组(P0.05)。结论:DHM可显著减少DN的肾小球细胞外基质沉积,改善肾小球硬化和减轻肾脏纤维化的功能,其作用机制可能是通过激活AMPK/m TOR通路,促进细胞自噬和抑制TGFβ-1、α-SMA的表达。     

缺血再灌注对大鼠肾脏足细胞podocin的表达影响及意义

目的:观察SD大鼠缺血再灌注肾损伤足细胞表面相关蛋白(podocin)表达的变化,探讨podocin分子在足细胞损伤中的作用.方法:60只雄性SD大鼠随机分为假手术组(S组)30只和模型组(M组)30只,各组又分为lh、3h、6h、12h、24h、48h六个亚组,每个亚组各5只.采用Westemblot蛋白印迹法检测肾皮质足细胞podocin蛋白表达.并观察各组血肌酐、尿素氮的变化.结果:与S组相比,肾缺血再灌注损伤后,M组尿素氮于6h开始升高,且48h达高峰(P＜0.05);血肌酐48 h才升高(P＜0.05).Podocin 蛋白在3h表达开始下降,以后随缺血再灌注时间的延长podocin蛋白的表达逐渐下降,且48h组下降最明显(P＜0.01).结论:(1)缺血再灌注肾损伤时大鼠肾功明显发生改变,尿素氮早期开始升高,血肌酐晚期升高明显,说明造模成功.(2)大鼠肾脏足细胞podocin的蛋白表达随着缺血再灌注时间的延长而改变,早期下降不明显,3h组开始逐渐下降,48h组下降最明显.此结果表明podocin蛋白在肾脏缺血再灌注肾损伤表达减少.我们可以推想在缺血再灌注肾损伤时,podocin随缺血时间延长而表达逐渐减少的同时,也破坏了与足细胞相关蛋白之间的联系,这种关系的破坏最终导致足细胞受损.通过对足细胞表面蛋白podocin的研究,对将来肾脏足细胞损伤的防治提供新的思路.     

姜黄素对大鼠运动性肾脏裂孔隔膜损伤的保护作用

本文就姜黄素对运动性肾脏裂孔隔膜损伤的保护作用及机制进行了研究。44只7周龄SPF级SD大鼠随机分为3组:对照组(C),过度训练组(OT)和姜黄素+过度训练组(COT)。实验中OT组、COT组大鼠进行6周递增负荷跑台训练。训练期间COT组以200 mg/kg/d、5 m L/kg姜黄素进行干预,其他组给予等体积1%的羧甲基纤维素纳灌胃。末次训练后24 h,光镜观察肾脏组织病理学改变;检测尿液、血液及肾脏组织相关生化指标。结果显示,6周跑台运动后,C组大鼠肾脏组织结构正常,OT、COT组大鼠肾脏均发生病理学改变,COT组较OT组有所缓解。肾小管Paller评分,OT组显著高于C组(P0.01),COT组显著低于OT组(P0.05)。尿蛋白(TP),OT组显著高于C组(P0.01),COT组低于OT组,但无显著性差异(P0.05)。微量白蛋白(m Alb),OT组显著高于C组(P0.01),COT低于OT组,但无显著性差异(P0.05)。血清睾酮(T),OT组低于C组(P0.01),COT组显著高于OT组(P0.01)。血清皮质酮(C),OT组显著高于C组(P0.01),COT组显著低于OT组(P0.01)。组间T/C比值变化趋势与T变化相一致。血清肌酐(SCr)、尿素氮(BUN),OT组显著高于C组(P0.01),COT组显著低于OT组(P0.01)。肾脏Nephrin蛋白表达,OT组显著低于C组(P0.01),COT组较OT组明显升高(P0.05)。肾脏NF-κB p65蛋白表达,OT组显著高于C组(P0.01),COT组较OT组显著降低(P0.05)。肾脏TNF-α,OT组显著高于C组(P0.01),COT组较OT组明显降低(P0.05)。肾脏AngⅡ,OT组显著高于C组(P0.01),COT组显著低于OT组(P0.05)。从而说明6周的大强度跑台训练导致大鼠出现过度训练及运动性肾脏裂孔隔膜损伤。姜黄素通过抑制NF-κB的表达,减少TNF-α产生,降低RAS活性,缓解Nephrin的表达下调,有效地预防过度训练的发生与发展,进而保护大鼠肾脏裂孔隔膜结构与功能的正常。     

A Unique Protease Cleavage Site Predicted in the Spike Protein of the Novel Pneumonia Coronavirus (2019-nCoV) Potentially Related to Viral Transmissibility

正Dear Editor,In December 2019, a novel human coronavirus caused an epidemic of severe pneumonia(Coronavirus Disease 2019,COVID-19) in Wuhan, Hubei, China(Wu et al. 2020; Zhu et al. 2020). So far, this virus has spread to all areas of China and even to other countries. The epidemic has caused 67,102 confirmed infections with 1526 fatal cases     

Curcuminoids as inhibitors of thioredoxin reductase: A receptor based pharmacophore study with distance mapping of the active site

Curcumin is the yellow pigment of turmeric that interacts irreversibly forming an adduct with thioredoxin reductase (TrxR), an enzyme responsible for redox control of cell and defence against oxidative stress. Docking at both the active sites of TrxR was performed to compare the potency of three naturally occurring curcuminoids, namely curcumin, demethoxy curcumin and bis-demethoxy curcumin. Results show that active sites of TrxR occur at the junction of E and F chains. Volume and area of both cavities is predicted. It has been concluded by distance mapping of the most active conformations that Se atom of catalytic residue SeCYS498, is at a distance of 3.56 from C13 of demethoxy curcumin at the E chain active site, whereas C13 carbon atom forms adduct with Se atom of SeCys 498. We report that at least one methoxy group in curcuminoids is necessary for interation with catalytic residues of thioredoxin. Pharmacophore of both active sites of the TrxR receptor for curcumin and demethoxy curcumin molecules has been drawn and proposed for design and synthesis of most probable potent antiproliferative synthetic drugs.     

The structure, reproduction and taxonomy of Vidalia and Osmundaria (Rhodophyta, Rhodomelaceae)

Comprises species occurring mostly in subtidal habitats in tropical, subtropical and warm-temperate areas of the world. An analysis of the type species, V. spiralis (Sonder) Lamouroux ex J. Agardh, a species from Australia, establishes basic characters for distinguishing species in the genus. These characters are (1) branching patterns of thalli, (2) flat blades that may be spiralled on their axis, (3) width of the blade, (4) primary or secondary derivation of sterile and fertile branchlets and (5) position of sterile and fertile branchlets on the thalli. Application of the latter two characters provides an important basic method for separation of species into three major groups. Osmundaria , a genus known only in southern Australia, was studied in relation to Vidalia , and its separation from the Vidalia assemblage is not accepted. Species of Vidalia therefore are transferred to the older genus name, Osmundaria. Two new species, Osmundaria papenfussii and Osmundaria oliveae are described from Natal. Confusion in the usage of the epithet, Vidalia fimbriala Brown ex Turner has been clarified, and Vidalia gregaria Falkenberg, described as an epiphyte on Osmundaria pro/ifera Lamouroux, is revealed to be young branches of the host, Osmundaria prolifera.     

New or rare chromosome counts in Artemisia L. (Asteraceae, Anthemideae) and related genera from Kazakhstan

Fifteen chromosome counts of six Artemisia taxa and one species of each of the genera Brachanthemum, Hippolytia, Kaschgaria, Lepidolopsis and Turaniphytum are reported from Kazakhstan. Three of them are new reports, two are not consistent with previous counts and the remainder are confirmations of very scarce (one to four) earlier records. All the populations studied have the same basic chromosome number, x = 9, with ploidy levels ranging from 2x to 6x. Some correlations between ploidy level, morphological characters and distribution are noted.     

肝癌中HBV和HCV基因和抗原的分布及意义

采用原位分子杂交方法检测HCV RNA及HBV X基因;采用免疫组织化学方法研究HCV核心抗原,非结构区C33c抗原及HBxAg在肝细胞肝癌中的定位及分布.结果表明(1)HCV RNA、HBV X基因在肝细胞肝癌组织检出率分别为40%(55/136)和82%(112/136).HCV RNA定位于癌细胞的胞浆内,阳性细胞呈散在、灶状及弥漫分布三种形式;HBV X基因在肝癌细胞中的分布呈胞浆型、核型及核浆型,阳性细胞也呈上述三种分布形式;(2)HCV C33c抗原、核心抗原在肝细胞肝癌中的阳性率为81%(133/164)及86%(141/164).C33c抗原定位于癌细胞及肝细胞的胞浆内;核心抗原既定位于癌细胞核中,又可定位于胞浆中.C33c抗原阳性细胞以灶状分布为主;而核心抗原阳性细     

Comparative morphology of the carpel in the Liliaceae: Hewardieae, Petrosavieae, and Tricyrteae

The young pistils in the melanthioid tribes, Hewardieae, Petrosavieae and Tricyrteae, are uniformly tricarpellate and syncarpous. They lack raphide idioblasts. All are multiovulate, with bitegmic ovules. The Petrosavieae are marked by the presence of septal glands and incomplete syncarpy. Tepals and stamens adhere to the ovary in the Hewardieae and the Petrosavieae but not in the Tricyrteae. Two vascular bundles occur in the stamens of the Hewartlieae and Tricyrtis latifolia. Ventral bundles in the upper part of the ovary of the Hewardieae are continuous with compound septal bundles and placental bundles in the lower part. Putative ventral bundles occur in the alternate position in the Tricyrteae and putative placental bundles in the opposite. position in the Petrosavieae. The dichtomously branched stigma in each carpel of the Tricyrteae is supplied by a bifurcated dorsal bundle.