绿色荧光蛋白的发光机制

从多管水母（Ａｅｑｕｏｒｅａｖｉｃｔｏｒｉａ）中分离纯化的绿色荧光蛋白（ＧＦＰ）是由２３８个氨基酸残基组成的单链多肽,分子量约２７ｋＤ,１９９２年其ｃＤＮＡ被克隆［１］。１９９４年重组野生型ＧＦＰ（ＷｔＧＦＰ）在异源细胞中表达［２］。野生型ＧＦＰ被紫外光和蓝光激发后能发出绿色荧光,最大荧光吸收／激发峰在３９５ｎｍ,在４７５ｎｍ有一个肩峰,荧光发射峰为５０８ｎｍ。ＧＦＰ的结构和光致荧光非常稳定,而且因ＧＦＰ生色团的形成是自催化的,检测ＧＦＰ的光致荧光不需要外加底物和辅因子,便于活体观察［２］。如今…     

绿色荧光蛋白的特性及其在信号转导中的应用

细胞和分子生物学的最终目标是 ,明确细胞内的各种事件是如何发生的 ,明了细胞内复杂的动态变化的生化机制。绿色荧光蛋白 (ｇｒｅｅｎｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔｐｒｏｔｅｉｎ ,ＧＦＰ)自从克隆、表达之后 ,以其良好的物理特性及荧光特性而成为良好的报告基因和荧光标记分子 ,并在探索生命现象过程中得到了非常广泛的应用。ＧＦＰ作为报告基因 ,可用在活细胞中直接观察蛋白质向细胞器 ,如细胞核、内质网中运动 ;作为荧光标记分子 ,ＧＦＰ既具有敏感的标记检测率 ,又没有放射性的危害 ;最近又发现ＧＦＰ是一个良好的细胞间信号传递的动态标记…     

利用GFP示踪细胞内源性P53活性检测DNA损伤

ＤＮＡ损伤的检测对预防癌症和遗传病等非常重要。采用分子克隆技术,将报告基因—绿色荧光蛋白（ＧＦＰ）置于ＳＶ４０基本启动子调控下,构建成对照载体ｐＳＶ－ＧＦＰ。在ＳＶ４０基本启动子上游插入寡核苷酸Ｐ５３ＲＥ,构建成示踪载体ｐ５３ＲＥ－ＧＦＰ。转染ＮＩＨ３Ｔ３细胞,以ＧＦＰ示踪细胞内源性Ｐ５３的转录激活活性。紫外线照射或Ｈ２Ｏ２处理转化细胞使ＤＮＡ损伤,诱导细胞内源性Ｐ５３的表达。用激光扫描共聚焦成像系统（ＬＳＣＩＳ）对细胞进行红、绿、蓝三色光融合成像,并测定ＧＦＰ经４８８ｎｍ激发后发出的绿色荧光光密度,验证ＧＦＰ示踪Ｐ５３的特异性。ｐ５３ＲＥ－ＧＦＰ转化细胞３Ｔ３－ＲＥＧ经紫外线照射或Ｈ２Ｏ２处理后,ＧＦＰ的表达增高,处理后１ｈｒ光密度即达到最高水平,随后逐渐降低。血清“饥饿”—非ＤＮＡ损伤处理的３Ｔ３－ＲＥＧ细胞,以及经紫外和Ｈ２Ｏ２处理的对照载体ｐＳＶ－ＧＦＰ转化细胞３Ｔ３－ＳＶＧ,ＧＦＰ的表达无明显增强。实验表明：ＧＦＰ示踪内源性Ｐ５３转录激活活性用于检测ＤＮＡ损伤有很高的灵敏度和特异性,适宜推广应用。     

EGFP基因在粉纹夜蛾细胞中的高效表达

绿色荧光蛋白（ｇｒｅｅｎｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔｐｒｏｔｅｉｎ,ＧＦＰ）基因是从一种水母体内分离的新型报告基因（ｒｅｐｏｒｔｇｅｎｅ）（Ｃｈａｌｆｉｅ等,１９９４）,其编码的、由２３８个氨基酸组成的ＧＦＰ是一种对光稳定的可溶性蛋白,在长波紫外光或蓝光激发下就能发出绿色荧光,而不需添加任何酶或底物,因而检测十分方便快速,无背景干扰。同时ＧＦＰ也是目前唯一能在异源细胞内表达后自发产生荧光的蛋白质。ＥＧＦＰ基因是由野生型ＧＦＰ基因经人工改造后更适合于在真核细胞中表达的突变体,基因编码区长７１７ｂｐ,编码…     

GFP转基因指示系统建立的研究

ＧＦＰ（绿色荧光蛋白）是存在于发光水母体内的一种吸收蓝光或紫外光（３９５ｎｍ）后能够发出绿色荧光的天然蛋白质。本文报道了将ＧＦＰ表达质粒导入ＢＨＫ、ＤＫ、ＲＫ等真核细胞,建立ＧＦＰ真核细胞转基因指示系统。研究表明,ＧＦＰ在ＢＨＫ、ＤＫ、ＲＫ等传代细胞中表达的最佳条件是３３℃,ｐＨ７．２、５％ＣＯ２和转染后４８ｈ观察等。并对野生型ＧＦＰ和突变型ＧＦＰ的发光强度进行了比较,结果表明,在相同条件下,突变型ＧＦＰ的荧光比野生型的强     

用细菌/杆状病毒系统在昆虫细胞中表达GFP与HCV抗原融合蛋白

用细菌／杆状病毒（Ｂａｃ－ｔｏ－Ｂａｃ）系统在昆虫细胞中高效表达了绿色荧光蛋白（ＧＦＰ）与ＨＣＶ抗原的双功能融合蛋白,经ＥＬＩＳＡ测定和荧光显微镜观查证实,表达产物既能发射易于检测的绿色荧光,又具有ＨＣＶ的抗原活性,实现了用绿色荧光蛋白等分子标记抗原,为免疫诊断新方法的建立打下了理论基础．     

绿色荧光蛋白在生命科学研究中的应用

近年来,随着水母Ａｅｑｕｏｒｅａｖｉｃｔｏｒｉａ来源的绿色荧光蛋白（Ｇｒｅｅｎｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔｐｒｏｔｅｉｎ,ＧＦＰ）在各种异源细胞,如细菌、霉菌、线虫、酵母、果蝇、昆虫细胞、哺乳动物细胞及植物细胞中的表达,ＧＦＰ作为一种新型的报告物在生物学界...     

GFP及其在植物学研究中的应用

绿色荧光蛋白 (ｇｒｅｅｎｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔｐｒｏｔｅｉｎ ,ＧＦＰ)是来源于多管水母属 (Ａｅｑｕｏｒｅａｖｉｃｔｏｒｉａ)体内的一种天然发光蛋白 ,在植物体内不需任何底物和外源辅助因子的参与就能显现 ,本文就ＧＦＰ的基因在植物基因工程和分子生物学研究中的应用作一概述。1 .ＧＦＰ及其特性ＧＦＰ由ｇｆｐ基因编码 ,具有 2 38个氨基酸残基的多肽单体 ,分子量约为 2 7ｋＤ。ＧＦＰ有两个吸收峰 ,最大吸收峰在 395ｎｍ处 ,在475ｎｍ处还有一个吸收峰 ,前者由紫外光激发 ,后者由蓝光激发。发射光谱也具有两个峰值 ,一个为 5 0 9…     

用Bac—to—Bac杆状病毒表达系统高效表达绿色荧光蛋白标记的HBVe抗原

通过基因工程操作,使乙型肝炎病毒ｅ抗原（ＨＢｅＡｇ）基因与绿色荧光蛋白基因（ＧＦＰ）融合,用新型Ｂａｃ－ｔｏ－Ｂａｃ杆状病毒表达系统在昆虫细胞中高效表达了ＨＢｅＡｇ－ＧＦＰ双功能融合蛋白。经ＥＬＩＳＡ法和荧光显微镜观察证实,表达产物既能发射易于检测的绿色荧光,又具有ＨＢＶ的ｅ抗原活性,为免疫诊断新方法的建立进行了有益的探索。     

用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统高效表达绿色荧光蛋白标记的HBVe抗原

通过基因工程操作,使乙型肝炎病毒ｅ抗原（ＨＢｅＡｇ）基因与绿色荧光蛋白基因（ＧＦＰ）融合,用新型Ｂａｃ－ｔｏ－Ｂａｃ杆状病毒表达系统在昆虫细胞中高效表达了ＨＢｅＡｇ－ＧＦＰ双功能融合蛋白。经ＥＬＩＳＡ法和荧光显微镜观察证实,表达产物既能发射易于检测的绿色荧光,又具有ＨＢＶ的ｅ抗原活性,为免疫诊断新方法的建立进行了有益的探索     

绿色荧光蛋白及其在植物研究中的应用

绿色荧光蛋白（ＧＦＰ）是海洋生物水母（Ａｅｑｕｏｒｅａｖｉｃｔｏｒｉａ）体内的一种发光蛋白,分子量２７ｋＤ,由２３８个氨基酸组成。该蛋白６５～６７位ＳｅｒＴｙｒＧｌｙ三种氨基酸环化加氧形成特殊的生色团结构。野生型ＧＦＰ发光较弱,而且ｇｆｐｃＤＮＡ含有隐蔽型剪切位点,而加工改造的ＧＦＰ在植物中能够正常表达并且加强了荧光信号。ＧＦＰ作为新的报告基因和遗传标记被广泛应用于植物研究之中。     

绿色荧光蛋白基因研究进展

绿色荧光蛋白（ｇｒｅｅｎ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ ｐｒｏｔｅｉｎ,ＧＦＰ）基因是目前唯一在细胞内稳定表达,不需要任何反应底物及其它辅助因子,无种属,组织和位置特异性,其产物ＧＦＰ对细胞无毒性,且检测简单,结果真实可靠的新型报告基因,其特有的生物化学性质使其在细胞生物学和分子生物学领域有着广泛的应用前景。     

绿荧光蛋白及其在转基因动物研究中的应用

绿荧光蛋白（ｇｒｅｅｎｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔｐｒｏｔｅｉｎ,ＧＦＰ）是源于水母（Ｊｅｌｙｆｉｓｈ）、海笔（ＳｅａＰｅｎ,ＳｅａＰａｎｓｙ）等海洋无脊椎动物的一种蛋白质,这种蛋白质在体外经适当波长的光激发便可发出绿光,所发出的绿光用普通荧光显微镜或荧光激活细胞分拣器（ＦＡＣＳ）均可检测到。ＧＦＰ作为动、植物以及微生物基因工程研究上的一种选择标记具有检测灵敏度高,操作简便,对机体毒副作用小且不需要添加任何底物或辅助因子等优点,更重要的是检测ＧＦＰ无损于细胞或胚胎的完整性及活力。本文概括介绍ＧＦＰ的生化、发光光谱及遗传学特征及其在转基因动物研究上的应用。     

文摘

010 112绿色荧光蛋白与黄瓜花叶病毒运动蛋白融合基因的构建及在大肠杆菌中的表达 [中 ]/李睿… / /农业生物技术学报 .-2 0 0 1,9(1) .- 19～ 2 2采用重组 -ＰＣＲ方法 ,扩增获得绿色荧光蛋白 (ＧＦＰ)与黄瓜花叶病毒运动蛋白 (ＣＭＶＭＰ)融合基因 ,将其克隆到ｐＫＥＮ上 ,构建了该融合基因的原核表达载体 ｐＫＥＮＧ -Ｍ。ＳＤＳ -ＰＡＥＧ及免疫印迹分析显示 ,5 7ｋＤ的融合蛋白基因在大肠杆菌ＤＨ5ａ中正确表达。激光共聚焦显微镜分析表明 ,在 488ｎｍ光激发下 ,菌体呈亮绿色 ,表明融合蛋白保持绿色荧光特性。实验结果为进一步研究ＣＭ…     

绿色荧光蛋白在植物细胞生物学中的应用

克隆于海洋动物水母 (Ａｅｑｕｏｒｅａｖｉｃｔｏｒｉ ａ)的绿色荧光蛋白 (ｇｒｅｅｎｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔｐｒｏｔｅｉｎ ,ＧＦＰ)作为一种新型的非酶性报告基因具有检测简便 ,结果真实可靠 ,不需要任何外源底物或辅助因子的特点 ,自出现以来它已引起人们的广泛兴趣 ,目前已经应用于烟草、柑橘、拟南芥、玉米、水稻、大豆、苜蓿等多种植物材料的研究中。ＧＦＰ含有特殊的六肽生色团结构 ,用蓝紫光激发即能发出肉眼清晰可见的绿色荧光 ,而无需任何底物或辅助因子。ＧＦＰ能与多种不同蛋白质的Ｎ端或Ｃ端融合而保持与天然蛋白质相似的荧…     

GFP-pl6融合基因表达载体的构建

本文报道了以ＧＦＰ（绿色荧光蛋白）基因为报告基因,ｐｌ６基因为目的基因,将ｐｌ６基因分别插入ＧＦＰ基因的上游和下游,构建成ＧＦＰ－ｐｌ６融合基因表达载体ｐＣｐｌ６Ｇ和ｐＣＧｐ１６,并通过酶切、电泳技术对重组体进行了鉴定。该表达载体的构建成功为开展ｐｌ６转基因动物模型的建立及其特性研究奠定了基础     

转基因植物中的标记基因

概述并评价了转基因植物研究中所采用的标记基因,利用它们都无法实时、无伤地筛选出转化细胞,但新近用作标记基因的绿色荧光蛋白（ＧＦＰ）,与流式细胞仪（ＦＡＣＳ）联用,便弥补了上述标记基因的不足。     

血管平滑肌细胞增殖与Cdk抑制蛋白p27的表达

ｐ２７蛋白是细胞周期素依赖性激酶（Ｃｄｋ）抑制蛋白家族中的一种,主要对外部促进或抑制细胞增殖的信号起反应。本研究应用流式细胞仪（ＦＣＭ）双标记的方法观察血管紧张素Ⅱ（ＡｎｇⅡ）、血管加压素（ＡＶＰ）和血小板源生长因子（ＰＤＧＦ）对血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣｓ）细胞周期百分比和ｐ２７蛋白表达量的影响。静止状态培养的ＶＳＭＣｓ加入ＡｎｇⅡ,ＡＶＰ,ＰＤＧＦＢＢ后,在不同时间收集细胞,用碘化丙啶（ＰＩ）标记细胞ＤＮＡ,以确定细胞所处的周期。用ｐ２７蛋白的单抗和标记了ＦＩＴＣ的二抗标记细胞,通过流式细胞仪测定被激发出的荧光量来确定细胞ｐ２７蛋白表达的相对量。结果显示,ＡｎｇⅡ刺激ＶＳＭＣｓ增生,其蛋白含量增加了４３６％（Ｐ＜００１）,但不抑制ｐ２７蛋白的表达;ＡＶＰ可轻度抑制ｐ２７的表达,有轻度促进ＶＳＭＣｓ增殖和增生的作用（Ｐ＜００５）;ＰＤＧＦ明显抑制ｐ２７的表达,引起细胞增殖。本研究结果提示,ｐ２７蛋白抑制ＶＳＭＣｓ通过Ｇ１期进入Ｓ期,是抑制ＶＳＭＣｓ增殖的重要调节因子。     

绿色荧光蛋白与 HCV 核心蛋白的融合及在大肠杆菌中的高效表达

利用基因工程重组技术获得了绿色荧光蛋白（ｇｆｐ）基因与ＨＣＶ核心蛋白（ｃｏｒｅ）基因的嵌合体,并在大肠杆菌中高效表达了４８ｋＤａ的融合蛋白,经ＤｏｔＥＬＩＳＡ和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ免疫活性分析证实,融合蛋白仍具有ｃｏｒｅ抗原的三个免疫活性部位,同时用荧光显微镜观察并用荧光光度计测定了大肠杆菌表达的融合蛋白的荧光光谱,结果证实,我们在大肠杆菌中表达的ＧＦＰｃｏｒｅ融合蛋白既能发射易于检测的绿色荧光,又具有ＨＣＶ核心蛋白的抗原活性,实现了用绿色荧光蛋白等分子标记抗原,为免疫诊断新方法的建立,打下了理论基础。     

绿色荧光蛋白基因在青蒿转基因芽中的表达

将改良的绿色荧光蛋白（ＧＦＰ）基因,插入到植物表达载体中,构建双ＣａＭＶ３５Ｓ启动子驱动下的植物表达载体ｐＢＩＧＦＰ,在Ｋａｍ浓度为２０ｍｇ／Ｌ的筛选培养基上,用含有ｐＢＩＦＰ质粒的根癌农杆菌ＬＢＡ４４０４感染青蒿叶片,获得５个抗Ｋａｎ阳性丛生芽系。Ｓｏｕｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ分析表明,外源ＧＦＰ基因已整合到青蒿转基因芽Ｇ－１系的基因组中。在ＯＬＹＭＰＵＳ－ＢＨ２型荧光显微镜下,观察到转基因