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哺乳动物胚胎发育受遗传和表观遗传的共同调控.精子作为重要的雄性生殖细胞,通过受精过程,将这些信息传递给卵子,进而影响子代的发育.精子中携带有丰富的表观遗传信息,其中小非编码RNAs(small noncoding RNAs,sncRNAs)在精子发育不同阶段发挥重要的作用,包括调控基因表达、介导蛋白质翻译,以及参与精子... 相似文献
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中枢神经系统靶向性CuZn—SOD的构建和表达 总被引:1,自引:0,他引:1
SOD对中风等由氧自由基毒性引起的神经性紊乱有保护作用,但因血脑屏障使血液中的SOD不能进入中枢神经系统。靶向性SOD可能是进入该系统的途径之一。将人CuZn-SODcDNA与破伤风毒素C部分基因融合,分别整合进pET-22b(+)及pFastBacHTb载体中,并分别在E.coli及粉纹夜蛾Tn-5B1-4细胞中表达。表达产物分子量为68kD,与理论计算值。蛋白质印迹实验证实,其表达产物能与人CuZn-SOD多克隆抗人本及抗破伤毒素全毒互抗体有免疫反应。在Tn细胞中高效表达,表达产物占可溶性总蛋白质的20%,表达产物有SOD活性,且具有逆行轴突运输的能力。这为靶向性SOD的进一步应用创造了条件。 相似文献
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人Mn—SOD cDNA的克隆及高效表达 总被引:13,自引:0,他引:13
用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR),以人肝细胞株(L02)总RNA为模板,扩增了人锰超氧化物歧化酶(hMn-SOD)的cDNA。重组到T7启动子控制下的表达载体pET-24a(+)中,构建表爱质粒pET-MnSOD,并转化大肠杆菌BL21(DE3)。SDS-PAGE及蛋白质印迹分析表明,经1mmol/L异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导后,可高效表达一分子量为22kD的蛋白质,与抗人 相似文献
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将Mn-SOD与抗癌胚抗原(CEA)单链抗体基因(ScFv gene)融合,重组到含T7启动子的表达载体pET-22b(+)中,构建表达质粒pETMnSOD-ScFv,并转化大肠杆菌BL21(DE3),进行高效表达,表达物占菌体可溶性总蛋白的24%。SDSPAGE和蛋白质印迹图谱显示表达物分子量为45kD与融合基因编码蛋白质的理论值相符。该蛋白质在大肠杆菌中为分泌型表达有利于纯化。RIA测定表明表达产物能特异性的与抗原CEA结合,同时邻苯三酚法测定也表明表达产物具有SOD酶的活性,该融合蛋白为分泌CEA肿瘤的靶向性治疗提供新的途径。 相似文献
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人铜锌超氧化物歧化酶cDNA的克隆,测序及表达 总被引:16,自引:1,他引:16
用逆转录聚合酶链反应(RTPCR),以人胎肝组织总RNA为模板,扩增了人铜锌超氧化物歧化酶(hCu,ZnSOD)的cDNA,并进行序列分析,将该hCu,ZnSODcDNA重组到T7启动子控制下的分泌型表达载体pET22b(+)中,构建表达质粒pETSOD,并转化大肠杆菌BL21(DE3)。SDSPAGE及蛋白质印迹分析表明,经1mmol/L异丙基硫代βD半乳糖苷(IPTG)诱导后,可高效表达一分子量为19kD的蛋白质,与抗人SOD多抗有特异的免疫反应,表达量约为菌体总蛋白质的30%,具有特异性SOD酶活性,酶活力可达1797u/ml培基。 相似文献
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幽门螺杆菌热休克蛋白A基因的克隆、表达及免疫原性研究 总被引:3,自引:0,他引:3
幽门螺杆菌的感染可诱发人体产生胃炎和消化性溃疡,其组成成分热休克蛋白A(HspA)可刺激机体产生保护性的免疫反应。用PCR方法从幽门螺杆菌的染色体DNA上扩增出HspA基因片段,将其插入原核表达载体pET22b(+)中,并在BL21(DE3)大肠杆菌表达。经测序HspA基因片段有354bp组成,可编码118个氨基酸残基的多肽。SDSPAGE和免疫印迹分析检测发现,HspA基因表达的蛋白质分子量约为15kD,并证实该重组蛋白质可以被幽门螺杆菌感染阳性患者的血清所识别,同时将其免疫小鼠可刺激机体产生抗该重组蛋白质的抗体。HspA有可能作为一种有效的蛋白质疫苗用于幽门螺杆菌感染的预防和治疗。 相似文献
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EGFP基因在粉纹夜蛾细胞中的高效表达 总被引:7,自引:0,他引:7
绿色荧光蛋白(greenfluorescentprotein,GFP)基因是从一种水母体内分离的新型报告基因(reportgene)(Chalfie等,1994),其编码的、由238个氨基酸组成的GFP是一种对光稳定的可溶性蛋白,在长波紫外光或蓝光激发下就能发出绿色荧光,而不需添加任何酶或底物,因而检测十分方便快速,无背景干扰。同时GFP也是目前唯一能在异源细胞内表达后自发产生荧光的蛋白质。EGFP基因是由野生型GFP基因经人工改造后更适合于在真核细胞中表达的突变体,基因编码区长717bp,编码… 相似文献
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