T7启动子具有真核生物聚合酶Ⅱ顺式作用因子的功能

根据ａ－鹅膏蕈碱（ａ－ａｍａｎｉｔｉｎ）对真核生物ＲＮＡ聚合酶的选择性抑制,以氯霉素乙酰转 移酶基因（ＣＡＴ）作为报道基因进行体内表达实验,证明Ｔ７噬菌体启动子可为真核生物ＲＮＡ 聚合酶Ⅱ所启动。应用建立的竞争性ＤＮＡ－蛋白质凝胶泳动技术,分别以ＴＡＴＡ框、ＣＡＡＴ 框、ＧＣ框和八核苷酸序列（ｏｃｔａｍｅｒ）为竞争性寡核苷酸分子,发现人工合成的Ｔ７启动子可能 与 ＴＦⅡＤ起始转录因子结合,形成 ＤＮＡ－核蛋白质结合物。将 ＴＡＴＡ框和八核苷酸序列分别 接入Ｔ７启动子上游,ＣＡＴ实验显示八核苷酸序列可以增强ＲＮＡ聚合酶Ⅱ对Ｔ７启动子的转录 起始作用。实验结果表明Ｔ７启动子可作为ＲＮＡ聚合酶Ⅱ的顺式作用因子。     

人工环境影响胶原诱导性关节炎的免疫及内分泌观察

在大鼠胶原诱导性关节炎（ＣＩＡ）的诱导阶段,给予风寒湿或风湿热刺激,结果显示：１．风寒湿显著降低雌性鼠炎症积分,延迟起病时间。２．风寒湿,风湿热均可显著提高雌性鼠的胶原抗体水平。３．风寒湿显著降低雄性鼠的类风湿因子水平。风湿热显著降低雌性鼠类风湿因子水平。４．风寒湿显著升高雌性鼠血清Ｅ２及Ｔ３含量。提示：１．环境因素对ＣＩＡ的影响具有性别差异,单纯风寒湿环境刺激ＣＩＡ不能作为类风湿性关节炎风寒湿痹模型。２．风寒湿与风湿热均可促进雌性鼠炎症启动阶段的抗体形成。３．风寒湿促进雌性鼠Ｅ２的分泌可能是关节炎症程度降低的主要原因。     

类风湿性关节炎风寒湿痹与风湿热痹动物模型的病理研究

在大鼠胶原诱导性关节炎（ＣＩＡ）的诱导阶段,给予风寒湿、风湿热刺激（实验Ⅰ）或同时给予葡萄球菌肠毒素Ｂ（ＳＥＢ）外涂（实验Ⅱ）,第３１天取踝关节标本作组织切片观察,结果显示,滑膜细胞增生与关节炎症积分呈显著正相关;单纯风湿热显著加重雌性鼠关节软骨侵袭程度,且有加重滑膜内炎症细胞浸润及血管增生的趋势;风寒湿与ＳＥＢ外涂协同作用有加重雄性鼠的炎症细胞侵润及血管增生趋势。上述结果支持雌性鼠风湿热ＣＩＡ及雄性鼠风寒湿ＣＩＡ加ＳＥＢ分别作为类风湿性关节炎中医风湿热痹及风寒湿痹模型     

利用GFP示踪细胞内源性P53活性检测DNA损伤

ＤＮＡ损伤的检测对预防癌症和遗传病等非常重要。采用分子克隆技术,将报告基因—绿色荧光蛋白（ＧＦＰ）置于ＳＶ４０基本启动子调控下,构建成对照载体ｐＳＶ－ＧＦＰ。在ＳＶ４０基本启动子上游插入寡核苷酸Ｐ５３ＲＥ,构建成示踪载体ｐ５３ＲＥ－ＧＦＰ。转染ＮＩＨ３Ｔ３细胞,以ＧＦＰ示踪细胞内源性Ｐ５３的转录激活活性。紫外线照射或Ｈ２Ｏ２处理转化细胞使ＤＮＡ损伤,诱导细胞内源性Ｐ５３的表达。用激光扫描共聚焦成像系统（ＬＳＣＩＳ）对细胞进行红、绿、蓝三色光融合成像,并测定ＧＦＰ经４８８ｎｍ激发后发出的绿色荧光光密度,验证ＧＦＰ示踪Ｐ５３的特异性。ｐ５３ＲＥ－ＧＦＰ转化细胞３Ｔ３－ＲＥＧ经紫外线照射或Ｈ２Ｏ２处理后,ＧＦＰ的表达增高,处理后１ｈｒ光密度即达到最高水平,随后逐渐降低。血清“饥饿”—非ＤＮＡ损伤处理的３Ｔ３－ＲＥＧ细胞,以及经紫外和Ｈ２Ｏ２处理的对照载体ｐＳＶ－ＧＦＰ转化细胞３Ｔ３－ＳＶＧ,ＧＦＰ的表达无明显增强。实验表明：ＧＦＰ示踪内源性Ｐ５３转录激活活性用于检测ＤＮＡ损伤有很高的灵敏度和特异性,适宜推广应用。