姜半夏乙醇提取物对人胃癌SGC7901细胞增殖和凋亡的影响

目的：观察姜半夏乙醇提取物对人胃癌SGC7901细胞增殖和凋亡的影响。方法：不同浓度姜半夏乙醇提取物（终浓度为1mg／ml,0．5mg／ml,0．25mg／ml,0．125mg／ml）处理SGC7901细胞后,倒置相差显微镜下观察细胞的形态学变化;通过甲基噻唑基四唑法检测细胞增殖状况、描绘生长曲线,使用紫外分光光度法观察药物干预后细胞ATP酶活力;AnnexinV．异硫氰酸荧光素（fluorescein isothiocyanate,FITC）／碘化丙啶（propidium iodide,PI）双标记法流式细胞术检测姜半夏乙醇提取物对SGC7901细胞诱导凋亡的情况。结果：不同浓度姜半夏乙醇提取物均能不同程度地抑制人胃癌SGC7901细胞的增殖;在姜半夏乙醇提取物诱导细胞后细胞发生了边缘毛刺、体积缩小等形态学变化,同时可见细胞折光度和贴壁能力下降;Annexin V-F／TC／PI双标记法检测显示姜半夏乙醇提取物可诱导细胞发生凋亡;细胞总ATP酶活力在药物干预72小时后出现明显下降;并且随着药物浓度增加细胞凋亡率、细胞形态异常改变以及ATP酶活力抑制作用均呈上升趋势。结论：姜半夏乙醇提取物可抑制人胃癌SGC7901细胞的增殖,促进其凋亡,抑制细胞ATP酶活力。     

罗格列酮抑制人胃腺癌SGC7901增殖机制的研究

目的：探讨在体外不同浓度的过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）激动剂罗格列酮（ROZ）对人胃癌细胞系SGC7901的生长及细胞周期的影响。方法：采用MTT法比色实验、集落形成实验、电子显微镜,透射电镜,流式细胞仪分别观察不同浓度罗格列酮0.08μmol/L,0.4μmol/L,2μmol/L,10μmol/L,50μmol/L,作用于SGC7901细胞,对细胞增殖,细胞形态和细胞周期的影响。结果：ROZ可抑制SGC7901细胞的生长以及SGC7901细胞集落的形成,并呈现剂量依赖性,其半数抑制浓度（IC50）约为50μmol/L。透射电镜低倍镜以及高倍下可见凋亡细胞。流式细胞仪结果显示,ROZ可抑制SGC7901细胞,引起G0/G1期细胞大量增加,S期细胞减少,且细胞周期停滞于G1期。结论：ROZ具有抗肿瘤作用,能够抑制SGC7901细胞的增殖并诱导凋亡,这种作用与其诱导细胞周期G0/G1期的停滞和诱导凋亡作用有关。因此,ROZ有望成为胃癌治疗的辅助用药亦或治疗药,PPARγ有潜力成为肿瘤治疗的新靶点。     

无花果枝提取物体外诱导胃癌BGC-823细胞凋亡的研究

为探讨新鲜无花果枝提取物(FBE)对体外培养的人胃癌细胞株BGC-823增殖和凋亡的影响,用不同浓度FBE处理胃癌BGC-823细胞,采用细胞形态学观察,细胞活力测定(MTY法)及免疫组织化学法检测增殖细胞核抗原(PCNA)表达情况来评价FBE对BGC-823细胞体外增殖的影响,应用流式细胞术的膜联蛋白V/碘化丙啶技术(Annexin V/PI法)检测FBE诱导BGC-823细胞体外凋亡的情况.形态学观察发现中高剂量(＞0.5mg/mL)组处理4 h细胞出现明显凋亡,24 h检测到中高剂量(＞0.5 mg/mE)组细胞增殖活力和增殖细胞核抗原表达显著降低(P＜0.05),流式细胞仪检测到FBE处理4 h所有剂量组细胞平均凋亡率(9.76%,10.87%,14.29%,49.67%,71.37%)均高于对照组(6.1%)(P＜0.05或P＜0.01),以上作用效果呈现剂量依赖性.以上结果说明无花果枝提取物能够通过诱导胃癌BGC-823细胞凋亡从而抑制其体外的生长与增殖.     

二甲基胂酸抑制胃癌细胞增殖的研究

目的:探讨二甲基胂酸(DMAA)对SGC7901胃癌细胞增殖的抑制作用及其可能的机制.方法:依次用5,10,15,20,25,30mmol/L二甲基胂酸处理培养的SGC7901胃癌细胞24 hrs,在5 mmol/L和10 mmol/L的浓度下分别处理6,12,18.24,30,36,42,48hrs,用MTT计数法测定DMAA对肿瘤细胞增殖的抑制率,用激光共聚焦显微镜检测细胞形态变化以及用DNA凝胶电泳检测细胞凋亡.结果:DMAA在不同浓度下对肿瘤细胞的抑制作用呈现典型的双曲线,即随着浓度的增加DMAA对胃癌细胞的抑制率不断增加并逐渐趋于稳定;在形态学上DMAA在低浓度下引起胃癌细胞的胞膜出泡、核固缩、染色体断裂和凋亡小体等典型的细胞凋亡的变化,而在高浓度下主要引起细胞坏死;DNA凝胶电泳结果显示,在低浓度DMAA作用下胃癌细胞DNA呈现细胞凋亡的梯状带型,而在高浓度下梯状带型则消失.结论:DMAA抑制胃癌细胞的增殖,其在低浓度时能有效诱导胃癌SGC 7901细胞凋亡,而在高浓度时使胃癌细胞坏死而死亡.     

慢病毒介导的siRNA联合紫杉醇抑制胃癌细胞增殖的研究

目的:探讨慢病毒介导的靶向血管内皮生长因子(VEGF)的RNAi对人胃癌细胞SGC7901增殖、细胞凋亡及紫杉醇药物敏感性的影响.方法:慢病毒VEGF-RNAi-LV感染SGC7901细胞后,MTT法检测RNAi及RNAi联合紫杉醇对细胞增殖的影响,流式细胞术检测细胞周期的变化,Hoechst33258染色观察细胞的凋亡.结果:MTT结果显示:与未感染病毒的SGC7901细胞及感染阴性病毒对照NC-LV的胃癌细胞比较,VEGF-RNAi-LV感染后的胃癌细胞生长缓慢,对紫杉醇的敏感性增加;流式细胞周期分析结果表明VEGF-RNAi-LV转粢后的细胞GO/GI期比例升高,S期和G2/M期比例降低;Hoechst33258染色结果证实VEGF-RNAi-LV组细胞核出现典型的凋亡形态学改变.结论:慢病毒介导的RNAi可明显抑制人胃癌细胞增殖,促进细胞凋亡,提高胃癌细胞对紫杉醇的敏感性.     

白藜芦醇诱导胃腺癌SGC7901细胞凋亡及下调血管生成拟态相关蛋白水平

目的探讨白藜芦醇(resveratrol,Res)诱导人胃腺癌SGGC7901细胞株凋亡及对血管生成拟态(vasculogenic mimicry,VM)的影响。方法 MTT法检测不同浓度Res对胃腺癌SGC7901细胞株活力的影响,Annexin V/PI双染法流式细胞术检测Res对胃腺癌细胞凋亡的影响,蛋白免疫印迹法检测不同浓度Res对VM相关蛋白VE-cadherin、MMP-2水平的影响。结果Res对胃腺癌SGC7901细胞株活力呈明显的浓度依赖性抑制作用,流式细胞仪检测显示Res处理组细胞凋亡率较对照组显著升高。免疫印迹法检测发现VE-cadherin、MMP-2水平随着RES处理浓度的增加逐渐下降。结论 Res可能通过抑制增殖、下调VM相关蛋白抑制VM,从而诱导胃癌细胞调亡。     

索拉非尼联合顺铂对胃癌SGC7901细胞的抑制作用

目的:探讨索拉非尼联合顺铂(DDP)对胃癌SGC7901细胞的抑制作用以及可能的分子机制.方法:选取人胃癌细胞株SGC7901,用索拉非尼和DDP单药或联合作用于细胞,观察最佳抑制效果.MTT法检测索拉非尼、DDP及两药联用对胃癌SGC7901细胞的增殖抑制作用并计算半数抑制浓度(IC50);用流式细胞仪检测细胞凋亡;用Western blot观察ERK及pERK蛋白的表达.结果:MTT检测结果显示胃癌SGC7901细胞经索拉非尼、DDP单独处理以及两者联合处理后,在不同浓度均能出现细胞生长抑制作用,并且其抑制作用呈时间-剂量依赖效应.与单药组相比,联合作用组对细胞的抑制率明显增高,表现为协同作用(P＜0.05).流式细胞仪检测凋亡的结果显示,经药物处理后细胞凋亡率均较空白对照组升高,两药联合作用的凋亡率要明显高于单药组.单药组及联合用药组对SGC7901细胞ERK的表达无明显影响,但是pERK在单用索拉非尼及联合用药组的表达则降低,以联合用药组尤甚.结论:索拉非尼联合顺铂对胃癌SGC7901细胞有增殖抑制及促凋亡的作用,两药联合表现为协同作用,其机制可能与细胞增殖通路Raf/MEK/ERK的机制有关.     

红车轴草提取物对胃癌BGC-823细胞凋亡的影响

探讨红车轴草(TrifoliumpratenseL)提取物对胃癌细胞株BGC-823的抑制增殖效应及诱导凋亡作用.我们采用不同浓度(50、100、250、500、1000mg/L)红车轴草提取物处理BGC-823细胞,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测药物对细胞的抑制作用,倒置显微镜观察细胞的形态学改变;AO/EB染色,荧光显微镜观察细胞凋亡形态;采用DNALadder观察DNA的降解;应用流式细胞仪观察细胞凋亡过程中的细胞周期的变化和细胞凋亡.结果显示在红车轴草提取物的作用下,BGC-823细胞呈凋亡改变,DNA琼脂糖凝胶电泳呈典型的凋亡特征.细胞凋亡的同时,细胞周期阻滞于G2/M期.实验结果表明红车轴草提取物能抑制胃癌BGC-823细胞增殖,能诱导胃癌细胞凋亡.     

比较NRP-1反义寡核苷酸与VEGFR-2反义寡核苷酸对人胃癌SGC7901细胞增殖和凋亡的影响

目的:研究比较神经纤毛蛋白1(NRP-1)反义寡核苷酸(ASODN)与血管内皮生长因子受体2(VEGFR-2)反义寡核苷酸(ASODN)对人胃癌SGC7901细胞增殖活性及凋亡水平的影响。 方法:分别及同时将不同浓度经硫代磷酸化修饰的NRP-1 ASODN 和 VEGFR-2 ASODN 转染入人胃癌SGC7901细胞,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测NRP-1基因和VEGFR-2 基因mRNA的转录水平;MTT比色法测量细胞的增殖活性;流式细胞仪测量细胞的凋亡水平。 结果:转染NRP-1 ASODN和VEGFR-2 ASODN后,人胃癌SGC7901细胞NRP-1基因和VEGFR-2 基因mRNA的转录水平均出现降低;NRP-1 ASODN和VEGFR-2 ASODN对SGC7901细胞有明显抑制增殖和促进凋亡的作用,且随着ASODN浓度升高而增强;分别转染时其作用无显著差别,联合转染时其作用明显增强。结论:NRP-1 ASODN和VEGFR-2 ASODN可抑制人胃癌SGC7901细胞 NRP-1基因和VEGFR-2 基因mRNA的转录水平及细胞增殖活性,促进细胞凋亡;与分别转染相比,两者联合转染作用明显增强。     

长链非编码RNA UCA1在胃癌多药耐药中的作用研究

目的:研究胃癌耐药细胞及其亲本细胞中长链非编码RNA UCA1的表达差异,探讨UCA1在胃癌多药耐药中的作用。方法:通过实时荧光定量PCR(q RT-PCR)检测胃癌耐药细胞SGC7901/ADR、SGC7901/VCR及其亲本细胞SGC7901中UCA1的表达差异;通过si RNA转染降低SGC7901/ADR中UCA1表达,MTT法检测细胞半数抑制浓度(IC50)的变化,流式细胞仪检测细胞凋亡变化。结果:QRT-PCR结果显示,UCA1在SGC7901/ADR和SGC7901/VCR胃癌耐药细胞表达显著高于SGC7901胃癌亲本细胞;MTT实验表明,干扰UCA1的SGC7901/ADR相对于阴性对照(NC)组的IC50显著降低;凋亡检测结果显示,在相同剂量化疗药物作用下,干扰UCA1后SGC7901/ADR凋亡率显著高于NC组;Western blot证实,干扰UCA1表达可显著降低BCL-2蛋白表达。结论:长链非编码RNA UCA1在胃癌耐药细胞表达显著升高,干扰UCA1表达可明显逆转胃癌耐药,UCA1可作为治疗胃癌耐药的重要分子靶标。     

生半夏、南星水提物对人胃癌BGC823细胞的侵袭力及HIF-lαmRNA蛋白表达的影响

摘要目的：观察生半夏、南星中药水提物对缺氧环境中人胃癌细胞株BGC823细胞HIF-lα蛋白表达和侵袭力的影响。方法：运用CoCl2（氯化钴）诱导BCG823细胞缺氧,使得细胞中HIF-1α蛋白表达升高．实验组加入生半夏、南星水提物对细胞进行预处理,然后在进行缺氧诱导。通过甲基噻唑基四唑法（MTT）检测细胞活性,使用Transwell检测细胞侵袭能力变化,RT-PCR、Weste-rn blotting分别检测HIF-lαmRNA及蛋白含量及变化。结果：生半夏、南星水提物能抑制人胃癌BGC823细胞的增殖;生半夏、南星水提物均能抑制缺氧诱导胃癌细胞的侵袭力,并且能降低HIF-1αmRNA及蛋白表达。结论：生半夏、南星水提物可抑制人胃癌BGC823细胞的增殖,抑制人胃癌BGC823细胞侵袭力,可能通过降低HIF-1α蛋白表达有关。     

生半夏、南星水提物对人胃癌BGC823 细胞的侵袭力及 HIF-1αmRNA 蛋白表达的影响

目的:观察生半夏、南星中药水提物对缺氧环境中人胃癌细胞株BGC823细胞HIF-1α蛋白表达和侵袭力的影响。方法:运用CoCl(2氯化钴)诱导BCG823细胞缺氧,使得细胞中HIF-1α蛋白表达升高.实验组加入生半夏、南星水提物对细胞进行预处理,然后在进行缺氧诱导。通过甲基噻唑基四唑法(MTT)检测细胞活性,使用Transwell检测细胞侵袭能力变化,RT-PCR、Western blotting分别检测HIF-1α mRNA及蛋白含量及变化。结果:生半夏、南星水提物能抑制人胃癌BGC823细胞的增殖;生半夏、南星水提物均能抑制缺氧诱导胃癌细胞的侵袭力,并且能降低HIF-1α mRNA及蛋白表达。结论:生半夏、南星水提物可抑制人胃癌BGC823细胞的增殖,抑制人胃癌BGC823细胞侵袭力,可能通过降低HIF-1α蛋白表达有关。     

Reversal effects of pantoprazole on multidrug resistance in human gastric adenocarcinoma cells by down-regulating the V-ATPases/mTOR/HIF-1α/P-gp and MRP1 signaling pathway in vitro and in vivo

To investigate reversal effects of pantoprazole (PPZ) on multidrug resistance (MDR) in human gastric adenocarcinoma cells in vivo and in vitro. Human gastric adenocarcinoma cell SGC7901 was cultured in RPMI‐1640 medium supplemented with 10% fetal bovine serum and antibiotics in a humidified 5% CO₂ atmosphere at 37°C. Adriamycin (ADR)‐resistant cells were cultured with addition of 0.8 µg/ml of ADR maintaining MDR phenotype. ADR was used to calculate ADR releasing index; CCK‐8 Assay was performed to evaluate the cytotoxicity of anti‐tumor drugs; BCECF‐AM pH‐sensitive fluorescent probe was used to measure intracellular pH (pHi) value of cells, whereas pH value of medium was considered as extracellular pH (pHe) value; Western blotting and immunofluorescent staining analyses were employed to determine protein expressions and intracellular distributions of vacuolar H⁺‐ATPases (V‐ATPases), mTOR, HIF‐1α, P‐glycoprotein (P‐gp), and multidrug resistant protein 1 (MRP1); SGC7901 and SGC7901/ADR cells were inoculated in athymic nude mice. Thereafter, effects of ADR with or without PPZ pretreatment were compared by determining the tumor size and weight, apoptotic cells in tumor tissues were detected by TUNEL assay. At concentrations greater than 20 µg/ml, PPZ pretreatment reduced ADR releasing index and significantly enhanced intracellular ADR concentration of SGC7901 (P < 0.01). Similarly, PPZ pretreatment significantly decreased ADR releasing index of SGC7901/ADR dose‐dependently (P < 0.01). PPZ pretreatment also decreased cell viabilities of SGG7901 and SGC7901/ADR dose‐dependently. After 24‐h PPZ pretreatment, administration of chemotherapeutic agents demonstrated maximal cytotoxic effects on SGC7901 and SGC7901/ADR cells (P < 0.05). The resistance index in PPZ pretreatment group was significantly lower than that in non‐PPZ pretreatment group (3.71 vs. 14.80). PPZ at concentration >10 µg/ml significantly decreased pHi in SGC7901 and SGC7901/ADR cells and diminished or reversed transmembrane pH gradient (P < 0.05). PPZ pretreatment also significantly inhibited protein expressions of V‐ATPases, mTOR, HIF‐1α, P‐gp, and MRP1, and alter intracellular expressions in parent and ADR‐resistant cells (P < 0.05). In vivo experiments further confirmed that PPZ pretreatment could enhance anti‐tumor effects of ADR on xenografted tumor of nude mice and also improve the apoptotic index in xenografted tumor tissues. PPZ pretreatment enhances the cytotoxic effects of anti‐tumor drugs on SGC7901 and reverse MDR of SGC7901/ADR by downregulating the V‐ATPases/mTOR/HIF‐1α/P‐gp and MRP1 signaling pathway. J. Cell. Biochem. 113: 2474–2487, 2012. © 2012 Wiley Periodicals, Inc.     

FPR2介导内外源性配体HP(2-20)/ANXA1促进胃癌细胞侵袭和转移

目的:分析FPR2在内外源性配体对胃癌细胞侵袭和转移影响中的作用。方法:采用构建成功的XN0422/SGC7901-mock细胞和XN0422/SGC7901-sh FPR2低表达细胞,通过划痕实验、transwell实验观察和比较FPR2的内外源性配体-HP(2-20)/ANXA1对XN0422/SGC7901迁移和增殖的影响。结果:HP(2-20)/ANXA1处理的XN0422/SGC7901-mock和XN0422/SGC7901-sh FPR2细胞侵袭和转移能力均相较于DMSO处理的XN0422/SGC7901-mock和XN0422/SGC7901-sh FPR2细胞明显增强(P0.05),且XN0422/SGC7901-mock组细胞的侵袭转移能力明显优于XN0422/SGC7901-sh FPR2组细胞(P0.05)。结论:HP2-20和Ac2-26可以促进胃癌细胞的侵袭和迁移,而这一作用与FPR2有关。     

胃癌SGC7901 表柔比星耐药细胞亚系的建立与耐药机制研究

目的:建立人胃癌SGC7901表柔比星耐药细胞系,探讨其对表柔比星的耐药机制。方法:采用逐步增加表柔比星浓度,间歇作用体外诱导法,建立人胃癌SGC7901表柔比星耐药细胞亚系SGC7901/EPI。用MTT法测定药物敏感性;流式细胞仪检测其药物排除能力和凋亡抵抗能力等生物学指标的改变,western blot检测相关蛋白的表达。结果:经过12个月建成人胃癌SGC7901表柔比星耐药细胞系SGC7901/EPI,其对表柔比星明显耐药,且对其他多种抗癌药具有不同程度的交叉耐药性,阿霉素蓄积潴留实验显示SGC7901/EPI的阿霉素含量明显低于亲本细胞,Western blot显示MRP1的表达上调;SGC7901/EPI凋亡抵抗能力明显上升,Bcl-2表达比亲本细胞增高,而Bax的表达下调。结论:SGC7901/EPI细胞具有多药耐药表型,其可能通过MRP1的上调增加药物排出和上调Bcl-2/Bax的比值促进凋亡抵抗等机制产生耐药。该胃癌多药耐药细胞亚系为进一步研究胃癌耐药机制及逆转方法奠定基础。     

重组抗HER2 ScFv/tBid 基因的表达对SGC7901胃癌细胞的促凋亡作用

目的：构建重组抗HER2 ScFv/tBid载体并观察其对胃癌SGC7901细胞的促凋亡作用。 方法： 将重组抗HER2 ScFv/tBid基因克隆入真核表达载体pCMV中,转染SGC7901细胞,用RT-PCR方法检测目的基因在mRNA水平的表达,间接免疫荧光法检测目的蛋白表达和细胞形态学变化,通过细胞计数检测转染目的基因后对细胞生长的影响,通过检测细胞周期来观察其促凋亡作用。 结果：转染SGC7901细胞后,检测出目的蛋白的表达。细胞计数发现细胞的增殖被明显抑制。细胞周期分析有明显的凋亡峰出现,说明重组抗HER2 ScFv/tBid表达后有促凋亡作用。 结论： 重组抗HER2 ScFv/tBid基因可以在转染的SGC7901细胞中表达,并且可抑制转染细胞的生长,诱导细胞发生凋亡。     

Mad2beta, an alternative variant of Mad2 reducing mitotic arrest and apoptosis induced by adriamycin in gastric cancer cells

Mad2beta is an alternative splicing variant of spindle checkpoint gene mad2, which was previously found by us and was related to the drug resistance in gastric cancer cells. In this paper, we explored the molecular mechanisms that Mad2beta variant promoted the formation of multidrug resistance in gastric cancer cells. We found that Mad2beta variant was detected only in the two human drug resistant gastric cancer cell sublines SGC7901/VCR and SGC7901/ADR, and it did not appear in its parental cell line SGC7901 and other detected gastric cancer cell lines. Expressions of Mad2 mRNA and protein in SGC7901 cells transfected with Mad2beta, SGC7901/VCR and SGC7901/ADR were significantly lower than that in SGC7901 cells. Moreover, SGC7901 cells overexpressing Mad2beta variant became more resistant to adriamycin, vincristine and mitomycin by abrogating mitotic arrest and apoptosis. This suggests that expression of Mad2beta variant decreases the relative expression of efficient MAD2, which may help gastric cancer cells to develop the phenotype of multidrug resistance.