我国商品糖化酶酶制剂中分解生淀粉糖化酶活力的比较

共收集国内有代表性酶制剂厂生产的糖化酶商品样２１份,测定其分解生淀粉糖化酶活力结果表明,万单位糖化酶含分解生淀粉糖化酶活力最高样品为１０８３８单位,最低为１０３９单位,平均为５４５０单位。取分解生淀粉糖化酶活力高、中、低的样品,进行了生淀粉吸附分离,并经凝胶电泳鉴定,其吸附的酶与测定的酶活力高低相符。     

纤维素酶产生菌和糖化酶产生菌液体混合发酵的研究

应用正交试验设计研究了糖化酶高产菌株黑曲霉UV-11(Aspergillus niger UV-11)和纤维素酶高产菌株黑曲霉F_(27)(A.niger F_27)液体混合发酵条件。结果表明,发酵液糖化酶活力为6500U/ml,CMC酶活力为99mg葡萄糖/ml·h。与UV-11单菌发酵相比,糖化酶活力提高16％,CMC酶活力提高266％。     

疏水吸附法稳定糖化酶的研究

 本文提出了一种新的稳定糖化酶的方法。用带有疏水基团的亲水性多糖,可以方便有效地稳定糖化酶,明显提高了糖化酶的储存稳定性。实验结果表明,在含有芳香基右旋糖酐,钙离子,甘油的缓冲溶液中,糖化酶于室温放置5个月,酶活力没有损失,放置7个月,活力只损失15.7％。     

特异腐质霉葡糖化酶催化生淀粉一步糖化的酶学特征

从北京西郊森林土壤中分离到产生糖化生淀粉的葡糖化酶的特异腐质霉Humicola insolens HG‐618菌株。优化的产酶培养基如下:6%麦麸、2%玉米粉、0.7%磷酸氢二铵和1%玉米浆,p H 8.0,250m L三角瓶装40m L培养基,在40℃和280r/min培养90h。以生玉米淀粉为底物,发酵液中葡糖化酶活力为180U/m L。酶学性质试验表明,该酶的最适反应p H为6.0,最适反应温度为65℃;在p H 6.0–9.0范围酶活力稳定;酶热稳定性强,在60℃和p H 6.0保温8h,酶活力仍保留83%。一步糖化生玉米粉试验表明,在50m L 30%浓度生玉米粉浆和270U HG‐618葡糖化酶的反应体系中,采用自然p H 6.7,在55℃和100r/min条件下糖化40h。获得的糖化液还原糖浓度为17.1%(由酶产生的还原糖浓度为15.9%),生玉米粉中所含淀粉的糖化率为90%,且产生的糖全部为葡萄糖。因此,该葡糖化酶具有良好的一步糖化生玉米粉前景,它也可以用于生大米粉、生小麦粉和生马铃薯粉的直接糖化。     

水不溶酶的研究II．对氨基苯磺酰乙基纤维素-葡萄糖淀粉酶的制备

1．用甘蔗渣纤维素及对-β-硫酸酯乙砜基苯胺为原料,研究了ABSE-纤维素的制备条件,探讨了黑曲霉(Asp. Niger)粗制糖化酶共价键台到重氮化的ABsE一纤维素上的影响因子。获得ABSE-纤维素糖化酶合适的制备方法。 2．ABSE-纤维素糖化酶含3.7-6.4％蛋白量,酶活力约为10000单位／克,以淀粉为底物,与自然酶比较,相对活力为20—30％,满联时加入适量的硫酸铵能提高相对活力至43．9％。该水不溶酶最高活力是在pH4.5和65～70℃(对淀粉)。在55℃淀粉化液液中稳定性良好。 3．将ABSE-纤维素糖化酶(33912单位)装柱,在55℃,以25．4毫升／小时的流速通过pH 4．5的3l～34％的淀粉液化液进行连续糖化,218小时内得到DE值为93．9的葡萄糖液,326小时后不溶酶柱仍保持原活力的74．9％。而搅拌糖化在140小时后只保持64.8％原活力．     

接枝淀粉载体固定化糖化酶的研究

合成了淀粉接枝丙烯腈及丙烯酰胺的两亲性高分子化合物,并以此为载体,用物理吸附方法固定化了糖化酶。最适偶联条件研究表明：缓冲液的浓度,ｐＨ值及吸附时间和加酶量都对固定化酶活力,比活有一定的影响。在最适固定化条件下,固定化酶的活力为１５００Ｕ／ｇ干胶,蛋白载量为２５ｍｇ／ｇ干胶,比活为６０Ｕ／ｍｇ蛋白,比天然酶的比活（８．０Ｕ／ｍｇ蛋白）提高６倍。最适反应温度比天然酶提高１０℃（天然酶最适反应温度为５０℃）．无底物存在下,固定化酶在５５℃的半衰期为２４ｈ,而天然酶只有１ｈ;有底物存在下,固定化酶在５５℃的半衰期为２２０ｈ,４５℃的操作半衰期由外推法算得为６９天,而且该载体对糖化酶有一定的保护作用,当固定化酶在低于５５℃热处理一段时间后,对酶活力有激活作用,酶活力最大可提高４０％。该载体合成简单,固定化方法简单,步骤少,因而为工业上应用提供了一种新的可能性。     

糖化酶在丝素膜上的固定化及性质研究

利用丝素作糖化酶的固定化载体,应用包埋法和共价交联法两种方法,制备了固定化糖化酶丝素膜,研究结果表明,共价交联法制备的酶膜活力较高,且回收率可达50%以上;与溶液酶相比,固定化酶的最适温度提高了10℃,热稳定性与贮存稳定性也有了很大提高。     

黑曲霉糖化酶热稳定性的研究

本文报导了黑曲霉糖化酶三种同工酶的相似的热稳定性。活力测定表明,糖化酶在60℃时易失活,三个同工酶的半衰期分别是GⅠ30’,GⅡ48.,GⅢ80’;而对40℃和50℃则有较强的抗性,但其活力曲线呈现复杂的变化,显示出在一定时间内,温热可以诱导酶活提高。紫外吸收及紫外差示光谱表明,在热处理过程中引起了酶分子的构象变化。本文还对酶分子的构象及活力变化的关系进行了探讨。 糖化酶(glucoamylase EC.3.2.1.3)水解淀粉为葡萄糖,是食品酿造工业的重要用酶之一。我们已经从黑曲霉AS.3.4.309变异株B-11发酵液中分离提纯了三种糖化酶的同工酶(1),并对其基本性质进行了研究。本文主要对黑曲霉糖化酶的热稳定性作了进一步的探讨。     

葡萄糖氧化酶法测定糖化酶活力

糖化酶也叫葡萄糖淀粉酶(glucoamylase),是应用于葡萄糖、酒精等生产的一种工业用酶。测定糖化酶活力是以在一定条件下作用于可溶性淀粉后生成的葡萄糖的毫克数来表示的。但在实际测定时,一般都采用斐林法和次亚碘酸盐法等定量测定还原糖总量的方法。我们在糖化酶研究工作中发现,用上述方法能比较准确     

多孔醋酸纤维素球形载体固定化糖化酶的研究

报道了一种多孔醋酸纤维素球形固定化酶载体的制备技术,以NaIO₄氧化法活化,固定糖化酶,测定了固定化糖化酶的催化反应特性,并与游离酶作了比较.固定化酶在55℃下水解10批淀粉溶液,总反应时间超过24 h,活力无显著变化.     

糖化酶生产工艺的改进

在前面研究的基础上,仍采用黑曲霉突变株ＷＭＣ－１５为产酶菌株,对糖化生产和提取工艺进行了较大的改进,提高了菌株的产酶缩短了发酵时间,提高回收率,大幅度降离糖化酶的生产成本,按最佳的培养基配方和发酵工艺条件,采用突变株ＷＭＣ－１５仅发酵９６小时左右,酶活力可达２５,０００ｕ／ｍｌ以上,对提高我国的糖化酶活力及设备利用率都具有现实意义。     

黑曲霉变异株AS3.4309产葡萄糖淀粉酶的研究 Ⅱ酶的性质和糖化条件的研究

葡萄糖淀粉酶(简称糖化酶),在生产上有广泛的应用。关于糖化酶的性质,国内外已有不少报道,而AS 3.4309变异株,与文献介绍的菌株相比,具有产糖化酶活力高、耐酸性条件、产转移葡萄糖苷酶的量少等优点。本     

接枝淀粉载体固定化糖化酶的研究

合成了淀粉接枝丙烯腈及烯酰胺的两亲性高分子化合物,并以此为载体,用物理吸附方法固定化了糖化酶,最适偶联条件研究表明：缓冲液的浓度,ＰＨ值及吸附时间和加酶量都对固定化酶活力,比活有一定的影响,有最适固定化条件下,固定化酶的活力为１５００Ｕ／ｇ干胶,蛋白载量为２５ｍｇ／ｇ干胶,比活为６０Ｕ／ｍｇ蛋白,比天然酶的比活提高６倍,最适反应温度比天然酶提高１０℃。无底物存在下,固定化酶在５５℃的半衰期为２４ｈ     

α淀粉酶和糖化酶在酿酒酵母中的表达和分泌

将地衣芽孢杆菌α-淀粉酶基因及黑曲霉糖化酶cDNA重组进大肠杆菌-酵母穿梭质粒,转化酿酒酵母,构建能分解淀粉的酵母工程菌。酶活力测定和酶学性质分析的结果显示:在酵母MF-α1因子及磷酸甘油酸激酶基因的启动子和终止信号的调控下,α-淀粉酶和糖化酶基因在酵母中获得高表达并向胞外分泌这两种酶。构建的酵母工程菌在含10％淀粉的培养基中6天内能水解97％的淀粉,重组质粒能在酵母中较稳定地存在。     

α－淀粉酶和糖化酶在酿酒酵母中的表达和分泌

将地衣芽孢杆菌α－淀粉酶基因及黑曲霉糖化酶cDNA重组进大肠杆菌．酵母穿梭质粒,转化酿酒酵母,构建能分解淀粉的酵母工程菌。酶活力测定和酶学性质分析的结果显示：在酵母MF—αl因子及磷酸甘油酸激酶基因的启动子和终止信号的调控下,α－淀粉酶和糖化酶基因在酵母中获得高表达并向胞外分泌这两种酶。构建的酵母工程菌在含10％淀粉的培养基中6天内能水解97%的淀粉。重组质粒能在酵母中较稳定地存在。     

黑曲霉变异株UV-11-48的选育及产糖化酶条件的研究

以黑曲霉(Aspergillus niger)变异株UV-11为出发菌株,经亚硝基胍多次诱变,获得一株比亲株产糖化酶活力提高30%左右的变异株UV-11-48。对UV-11-48菌株进行了发酵条件及酶系组成等的研究。固体曲生产性试验,种曲糖化酶活力最高达12240u/g,麸曲酶活力平均8000—9000u/g,最高达11700u/g,在酿酒工业固体曲生产中,取得明显经济效益。     

水不溶酶的研究I．用DEAE-葡聚糖凝胶作载体制备水不溶葡萄糖淀粉酶

在我们试验的几种离子交换剂中,DEAE-葡聚糖凝胶是制备不溶性糖化酶的较好载体。其吸附的最适pH为4.5—6.0,每克载体吸附50000单位酶量为宜。DEAE-葡聚糖凝胶糖化酶与自然酶比较最适pH与最适温度基本相同,而米氏常数明显增加,前者为0．023(％),后者为0.005 7(％)。采用搅拌糖化方式,以30％淀粉为原料,葡萄糖值能达95以上,连续使用10次原活力仍能保持63％。     

糖化酶菌种AS3·4309的自然选育

黑曲酶有较强的糖化力,我国目前大多用黑曲酶AS3.4309作为糖化酶生产菌种,但酶活力相差很大,直接影响经济效益。我们采用自然选育的方法获得优良菌种,酶活力达10000u/ml—12000u/ml,现将研究结果报告如下:     

蓝光诱导促进黑曲霉产糖化酶的研究

考察了蓝光对黑曲霉产糖化酶的影响并采用扫描电镜观察蓝光下黑曲霉形态发育过程,结果表明,与黑暗对照组相比,蓝光处理使菌丝粗壮,孢囊增大,分生孢子发育提前,黑曲霉糖化酶活力增加,孢子发育和产糖化酶的进程有一定的对应性。黑曲霉在黑暗下生长至36h时,经蓝光诱导糖化酶产量提高更为明显,提示了黑曲霉存在一个对蓝光反应产生最适光感应的发育阶段,对于光调节黑曲霉产糖化酶来说,蓝光诱导的光强由弱到强,比持续蓝光培养或采用较高光强诱导效果更好,表明黑曲霉产糖化酶存在一种光适应机制,能够感应和适应光强度变化,调节其自身代谢。从抑制性扣除杂交实验和蓝光光强变化对差异基因表达的分析来看,糖化酶基因以及呼吸链中部分氧化还原酶基因在蓝光诱导下表达皆有增强,蓝光信号转导影响了核基因编码的线粒体呼吸链相关酶基因表达水平,交替氧化酶可能参与了蓝光信号途径,影响了黑曲霉产糖化酶和孢子发育。研究结果可为在现有水平上应用蓝光调节提高糖化酶产量找到新的技术突破口和提供新思路。     

离子型多孔聚苯乙烯固定化糖化酶

 用离子型多孔聚苯乙烯固定化了糖化酶。研究了制孔剂比例对载体孔径的影响。用麦芽糖做底物,三乙醇胺基聚苯乙烯载体使固定化糖化酶的最适pH向左移动约2个pH单位;磺酸基苯胺基聚苯乙烯载体使固定化糖化酶最适pH向右移动2个单位。固定化酶最适pH的移动值随缓冲液浓度的增加而减少。用可溶性淀粉为底物时固定化糖化酶的pH—活力曲线变宽。用dextrin作底物,天然糖化酶的Km为3.47×10~(-3)mol/L,固定化糖化酶的素质K_m为4.17×10~(-3)mol/L,表现K_m(app)为1.11×10~(-2)mol/L。延长重氮化反应时间,得到2000ug~(-1)干胶的高活力固定化糖化酶。