地衣芽孢杆菌胞外耐高温α-淀粉酶的研究

地衣芽孢杆菌(Bacillus Licheniformis)突变株7902培养液离心后的上清液,于75℃至100℃作用．Α-淀粉酶活力基本上随温度提高呈直线上升。酶液在不加Ca2+和无任何保护剂条件下于90℃处理60分钟,95℃处理20分钟,酶活力均能保留90％以上。培养液经硫酸铵分段沉淀、Sephadex G-50疑胶过滤和制备垂直平板电泳纯化,经PAGE鉴定为一条带,纯酶比活提高49.3倍,淀粉酶法区带定位鉴定证明提纯样品是α-淀粉酶。SDS凝胶电泳测定分子量为68000。金属离子Ca242+、Li+、Mg2+等对酶有激活作用,而AI3+、Ag+、Cu2+、Mn2+和Fe2+等有一定的抑制作用。     

用原生质体融合技术提高α-淀粉酶稳定性

工业生产上一般都采用物理和化学诱变的方法选育优良菌株,Foder和Schaeffer将种内细菌原生质体融合成功之后,用原生质融合方法育种的报道较多,所得融合子也逐渐应用于工业生产.本研究用产α-淀粉酶活力高的解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)生产菌株和活力低、耐热性好的地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)进行原生质融合,选育出耐热高产的α-淀粉酶产生菌.1 材料和方法1.1 菌种Bacillus amyloliquefaciens BF 7658,北京房山交道酶制剂厂生产菌株;Bacillus licheniformis ATCC9789,中国科学院微生物所保藏.     

用原生质体融合技术提高α-淀粉酶稳定性

工业生产上一般都采用物理和化学诱变的方法选育优良菌株,Foder和Schaeffer将种内细菌原生质体融合成功之后,用原生质融合方法育种的报道较多,所得融合子也逐渐应用于工业生产.本研究用产α-淀粉酶活力高的解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)生产菌株和活力低、耐热性好的地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)进行原生质融合,选育出耐热高产的α-淀粉酶产生菌.1 材料和方法1.1 菌种Bacillus amyloliquefaciens BF 7658,北京房山交道酶制剂厂生产菌株;Bacillus licheniformis ATCC9789,中国科学院微生物所保藏.     

缺氧诱导因子-1α与血管内皮生长因子及其受体2在大鼠3期压力性损伤皮肤组织中的表达及意义*

目的:分析缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、血管内皮生长因子(VEGF)和血管内皮生长因子受体2(KDR)在不同受压时间点大鼠压力性损伤局部皮肤组织中的表达及相互关系,探讨3期压力性损伤慢性难愈的可能机制。方法:将40只SD雄性大鼠随机分为正常对照组、受压3 d、5 d、7 d、 9 d组( n=8 ),使用磁铁压迫法建立3期压力性损伤动物模型。HE染色观察皮肤组织形态;免疫组化法检测VEGF表达,Western blot 检测皮肤组织HIF-1α、VEGF、KDR蛋白表达;对数据行单因素方差分析、LSD检验。结果:①HE结果显示,与正常对照组相比,受压组大鼠表皮逐渐增厚,血管数量不断减少,胶原排列紊乱,炎症细胞浸润增加。②免疫组化结果显示:受压3 d组大鼠皮肤组织中VEGF蛋白表达量较正常对照组明显增高(P＜0.01);受压5 d、7 d和 9 d组大鼠皮肤组织中VEGF蛋白表达量均明显低于正常对照组(P＜0.05)。WB结果和免疫组化结果一致。③WB结果显示:受压3 d、5 d和7 d组大鼠皮肤组织中HIF-1α表达量均明显高于正常对照组(P＜0.01 或 P＜0.05);4组受压组大鼠皮肤组织KDR蛋白表达量均低于正常对照组(P＜0.05或P＜0.01)。结论:HIF-1α介导的VEGF和KDR蛋白表达减少引起组织血管生成减少可能是3期压力性损伤慢性难愈的重要原因之一。     

炎症因子、生长因子以及凋亡因子在压疮慢性难愈合性创面中的表达及作用

目的：探讨炎症反应、生长因子及凋亡因子在压疮慢性创面中的表达及作用。方法：选取2013年10月至2015年7月河南大学第一附属医院收治的患者,其中临床Ⅲ、Ⅳ期压疮患者共20例,急性创面10例,正常皮肤组织6例。通过HE染色观察不同创面组织的形态学特征;免疫组织化学法检测组织中细胞凋亡因子Caspase-3的分布规律;荧光定量PCR法定量分析IL-1β、IL-6、TNF-α、VEGF、bFGF及其受体KDR、FGFR1基因水平的变化特征。结果：Ⅲ、Ⅳ期压疮创面中可见炎性细胞浸润;凋亡信号因子caspase-3在压疮组中的表达高于其他两组,差异有统计学意义;IL-1β、IL-6、TNF-α表达高于急性创面组和正常皮肤组;VEGF和bFGF生长因子及其受体KDR和bFGFR1表达分别低于对照组。结论：炎症因子和凋亡因子在压疮慢性创面中持续长时间的高表达、生长因子及其受体显著的低表达可能是压疮慢性难愈合性创面形成的机制和难以彻底治愈的重要因素。     

碱性成纤维生长因子对大鼠成肌细胞氧化应激损伤的作用及其机制

目的：探讨碱性成纤维生长因子（bFGF）下调氧自由基水平在大鼠成肌细胞氧化应激中的保护作用。方法：采用对数生长期大鼠成肌细胞,随机分为四组（n=6）：正常对照组（control）,单纯bFGF组（bFGF）,氧化应激组（H₂O₂）,干预组（bFGF+H₂O₂）。氧化应激组采用含100μmol/L H₂O₂的培养基继续孵育4 h。免疫组化检测B淋巴细胞瘤-2基因（Bcl-2）阳性沉积颗粒;免疫荧光观察活性氧自由基（ROS）水平、Bcl-2、B淋巴细胞瘤-2基因相关X蛋白（Bax）及细胞色素C（Cyt.C）表达;Western blot检测Cyt.C、聚腺苷二磷酸核糖聚合酶（PARP）蛋白表达情况。结果：与正常组比较,氧化应激组成肌细胞Bcl-2表达降低,ROS、Cyt.C表达显著增加（P < 0.05）。与氧化应激组比较,bFGF干预后的成肌细胞Bcl-2表达增加,ROS及Cyt.C表达减少（P < 0.05）。结论：bFGF对成肌细胞氧化应激具有保护作用,其机制可能与bFGF下调氧自由基水平、Bcl-2蛋白增加、Cyt.C表达减少有关。