山药糖蛋白的提取及纯化研究

采用正交试验得出了提取山药糖蛋白的优化试验条件,即提取温度40℃、提取时问2 h、料液比1:50.山药经水浸提分离、浸提液脱蛋白、透析、乙醇沉淀物经DEAE-52及Sephadex G-75柱层析得到两种糖蛋白组分GLP-Ⅰ和GLP-Ⅱ,经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳,相对分子量分别是13000和38000.     

亚洲小车蝗痘病毒增效因子的初步研究

OaEPV经2×SDS包涵体碱性裂解缓冲液裂解,离心,分别用上清液及沉淀与绿僵菌孢子混合感染黄胫小车蝗,上清液的增效活性比沉淀大2.5倍。用三种不同方法(2×SDS包涵体碱性裂解液法,0.02 mol/L NaOH裂解法,8 mol/L尿素裂解法)裂解OaEPV所得蛋白液与绿僵菌混用,生测结果表明,包涵体裂解液法制备所得蛋白增效活性最高,NaOH裂解法次之,尿素裂解法制备的蛋白几乎没有增效活性。将OaEPV用包涵体碱性裂解液裂解后,用葡聚糖G-200凝胶柱层析进行分离,出现两个洗脱峰,这两个峰的洗脱液浓缩后进行生物测定,初步表明增效作用主要为第二个峰的蛋白片段。经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳,第二个峰的蛋白片段的分子量为40kDa左右。     

亚洲小车蝗痘病毒增效因子的初步研究

OaEPV经2×SDS包涵体碱性裂解缓冲液裂解,离心,分别用上清液及沉淀与绿僵菌孢子混合感染黄胫小车蝗,上清液的增效活性比沉淀大2.5倍.用三种不同方法(2×SDS包涵体碱性裂解液法,0.02 mol/L NaOH裂解法,8 mol/L尿素裂解法)裂解OaEPV所得蛋白液与绿僵菌混用,生测结果表明,包涵体裂解液法制备所得蛋白增效活性最高,NaOH裂解法次之,尿素裂解法制备的蛋白几乎没有增效活性.将OaEPV用包涵体碱性裂解液裂解后,用葡聚糖G-200 凝胶柱层析进行分离,出现两个洗脱峰,这两个峰的洗脱液浓缩后进行生物测定,初步表明增效作用主要为第二个峰的蛋白片段.经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳,第二个峰的蛋白片段的分子量为40 kDa左右.     

从大肠杆菌B／r中同时制备ATP：RNA腺苷酰转移酶和多核苷酸磷酸化酶

本文报道了从大肠杆菌B／r中同时制备ATP：RNA腺苷酰转移酶和PNPase的简便方法。菌体经压力破碎,聚乙二醇、葡聚糖分相抽提及磷酸纤维素柱层析得到ATP：RNA腺苷酰转移酸。其滤液经DEAE纤维素柱层析和Scphadex G-200凝胶过滤得到PNFasc。用Oligo dT纤维素和聚丙烯酰胺凝胶电泳对酶反应产物作了初步鉴定。     

球形芽孢杆菌Ts-l毒蛋白的分离纯化

球形芽孢杆菌Ts-1对蚊虫幼虫有高效杀灭能力,其有毒成份为一种蛋白质。纯芽孢一晶体复合物经超声波处理后,以0．05 mol／L的NaoH抽提毒素,经sephadex G-2 00葡聚糖凝胶柱层析纯化,用SDS—PAGE检验柱层析得到的杀虫活性部分,Ts—1的芽孢-晶体复合物中主要为4zkD和43KD的两种蛋白质。经聚丙烯酰胺凝股制备电泳分离纯化,生物活性测定表明这两种蛋白质都有杀蚊毒效,经DEAE纤维素柱层析进一步纯化,获得了分子量为42kD的毒蛋白。     

半枝莲多糖的分离、纯化及其理化性质

唇形科植物半枝莲全草的热水提取液经乙醇沉淀、去蛋白、逆向流水透析、DEAE-纤维素柱层析和Sephadex G-100柱层析得纯品半枝莲多糖(S-BP)。凝胶过滤及聚丙烯酰胺凝胶电泳证明为单一均匀成分。SBP的比旋度为[α]_D~(20)=+26.2°,不含氮,分子量13000,具有890cm~(-1)红外吸收峰。经纸层析和气相色谱分析,SBP含鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、半乳糖和葡萄糖,其克分子比为1.14:1.50:0.20:0.75:1.0:2.18。     

明党参多糖的分离、纯化及其理化性质

伞形科植物明党参根的热水提取液经乙醇沉淀、去蛋白、逆向流水透析,DEAE-纤维素柱层析和 Sephadex G-100柱层析得纯品明党参多糖(CSP)。凝胶过滤及聚丙烯酰胺凝胶电泳证明为单一均匀成分。CSP 的比旋度为〔α〕_D~(20)=+170.9(C=0.4,H_2o),不含氮,分子量52000,具有845cm~(-1)红外吸收峰。经纸层析和气相色谱分析,CSP 含鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、半乳糖和葡萄糖,其摩尔比为0.09:0.25:0.17:1.0:1.56:11.94。     

BamHI DNA甲基化酶的提纯及物理化学性质

 通过硫酸铵盐析,DEAE-纤维素柱层析,磷酸纤维素亲和层析及SephadexG-100凝胶过滤法,从噬淀粉芽孢杆菌HI(Bacillus amyloliguefaciens HI)提纯了DNA甲基化酶。用聚丙烯酰胺凝胶电泳检查,已达电泳均一,比活力提高了326倍。并用聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳和Sephadex G-100凝胶过滤法测得其天然酶的分子量为273000,又用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳测得它的亚基分子量为34500,故该酶有8个分子量相同的亚基。用凝胶电聚焦法测得其pI_(22 c)=9.0。     

虫花菌胞外糖蛋白的分离、纯化及其性质研究

虫花菌(Isaria farinosa(Dicks)Fr.)发酵液经超滤浓缩、乙醇沉淀、弱酸性阳离子交换树脂和弱碱性阴离子交换树脂去杂蛋白后,又经Sephadex G-150纯化得到PG。PG经醋酸纤维膜电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳和Sepharose 4B柱层析,证明是单一均匀的糖蛋白。PG的分子量为11.1万。PG的糖含量为92.35％、蛋白含量为7.61％。PG用气相色谱、红外光谱分析表明含有D-甘露糖、D-半乳糖,其摩尔比是5.93:1。推测PG主要含α-型糖苷键。PG对小鼠实体瘤S-180有一定的抑制作用,抑瘤率为22.2％。     

桑叶凝集素分离纯化及抑菌活性研究

采用磷酸缓冲液提取桑叶凝集素,经硫酸铵分级沉淀法初步纯化、Cellulose DE-52阴离子柱层析、CMSepharose Fast Flow阳离子柱层析、Sephadex G-75分子筛柱层析对其进行逐级纯化,采用牛津杯法进行抑菌活性测试。结果表明桑叶凝集素经聚丙烯酰胺凝胶电泳检测显示为单一条带,SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳检测其亚基分子量为35.95、30.35 KD;该凝集素对供试菌具有较好的抑制作用,对绿色木霉、苹果落叶病菌、西瓜枯萎病菌及烟草黑胫病菌抑菌直径分别为20、30、15、18 mm。桑叶凝集素具有较好的抑菌活性,可为新农药创制领域提供有用的天然产物先导化合物。     

天然麝香抗炎蛋白质的研究Ⅰ.Mu-a-1的分离纯化及其部分性质的鉴定

天然麝香粉(Musk)经乙醚,乙醇脱脂后,再经4℃水冷渗,水提液低温旋转浓缩,冻干,得到的冻干粉先后经过Sephadex G-25,Sephadex G-50,和Sephadex G-100等柱层析,得到抗炎有效部分Mu-a,将此部分再通过DEAE-Sephadex A-25和Sephadex G-150等柱层析,得到一抗炎有效蛋白质,命名为Mu-a-1。经聚丙烯酰胺凝胶电泳及超薄等电聚焦电泳,以高碘酸-schiff试剂及Coomassie R250染色和分子筛层析,均显示一条区带和一均匀吸收峰。以蒽酮试剂法测定Mu-a-1含糖量在40％左右。经氨基酸自动分析仪测定Mu-a-1是由16种氨基酸组成,其中Glu,Asp等酸性氨基酸居多,等电点(PI=3-4),为酸性糖蛋白。最小蛋白质碎片含374个氨基酸残基。用凝胶过滤法估测其分子量在20万左右。药理实验表明Mu-a-1对巴豆油引起小鼠耳部炎症具有明显的抗炎作用,平均7.5mg/kg剂量下,对炎症抑制率为72.3％,P<0.001。     

紫球藻藻红蛋白的分离纯化及光谱学特性

采用4℃反复浸提、离心、硫酸铵沉淀、DEAE—Sepharose Fast Flow离子交换柱层析,从紫球藻（Porphyridium cruentum Naegeli）冻干粉中分离纯化藻红蛋白,分离纯度达到4．85,总收率51．9％;经羟基磷灰石柱层析纯化,藻红蛋白纯度达到5．10,总收率34．0％,聚丙烯酰胺凝胶电泳显示1条带。所分离纯化的藻红蛋白含有3个亚基（α、β、γ）,在可见光区545nm和560nm处有2个吸收峰,在498nm处有1个吸收肩峰。实验结果说明所分离纯化的藻红蛋白纯度符合要求。     

喇叭藻(T.ornata J.Ag)多糖的分离及纯化

采用热水抽提法从喇叭藻中提取粗多糖,经胰蛋白酶和Ｓｅｖａｇｅ法脱蛋白,用ＣＴＡＢ将多糖分级淀粉,得到多糖的半纯品。再经Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－２００凝胶柱层析进一步纯化,聚丙烯酰胺凝胶电泳进行纯度鉴定。     

视黄醇结合蛋白的分离纯化及其抗血清的制备

建立了经硫酸铵分级、DEAE-Sephadex A25柱、Sephadex G200柱、Ultrogel ACA44柱和 Sephadex G100柱层析分离纯化人血浆视黄醇结合蛋白的方法.经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定,其纯度达到电泳纯.以此电泳纯的视黄醇结合蛋白免疫家兔得到了高效价的抗血清.     

猪肺血管紧张素转换酶的提纯

本文报道了猪肺血管紧张素转换酶(ACE)的提纯方法及其鉴定,并讨论了方法的改进。肺匀浆经1.6—2.6mol/L硫酸铵沉淀,Sephadex G-200凝胶过滤,DEAE-Sephaeel及羟基磷灰石柱层析步骤,从168克肺中获得4.5毫克酶蛋白纯品。活力回收45.2％,比活力15.6单位/毫克蛋白;和匀浆上清比较,提纯390倍。经聚丙烯酰胺凝胶电泳(pH8.3)鉴定为一条带。按SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)测得其分子量为132,000道尔顿。酶蛋白在-30℃貯存10月,比活力丢失30％。     

大熊猫、小熊猫和黑熊血红蛋白的组份分离、结晶及氨基酸组成分析

 聚丙烯酰胺凝胶电泳和羧甲基纤维素柱层析都表明大熊猫(Ailuropodmelanoleuca)、小熊猫(Ailurus fulgens)和黑熊(Selenarctos thibetanus)的血红蛋白各有两个组份。在近似的条件下得到了它们的晶体。三种动物血红蛋白的氨基酸组成相似,而且N-末端氨基酸都是Val。有待进一步测定全部氨基酸顺序,以揭示它们之间的异同和亲缘关系。     

猪生长激素的提纯及其生物学活性和某些理化性质的研究

通过调pH抽提、硫酸铵分级分离和DEAE-纤维素柱层析等方法从猪垂体中提取了生长激素。平均产率约为0.5g生长激素/1000g鲜垂体。用去垂体大白鼠胫骨测定法测得共促生长效应为1.84。提取的生长激素在高pH不连续缓冲体系聚丙烯酰胺凝胶电泳时呈现两条带;Sephadex G75柱层析得到一个峰;SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳呈现一条带,其分子量约为21,900道尔顿;聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦电泳呈现五条带,主带在pH7.8处;DNS法测定其N-末端氨基酸为苯丙氨酸一种。此外,还测定了它的氨基酸组成。     

眼镜王蛇毒柱层析分离及其组份的活性测定和L—氨基酸氧化酶的分离纯化

用ＣＭ—ＳｅｐｈａｄｅｘＣ—２５分离广西产眼镜王蛇毒,得到了１３个蛋白峰,测定了６种酶在这些峰的分布,其中７个峰有酸活性。并对含量高的Ｌ—氨基酸氧化酶进一步纯化,得到聚丙烯酰胺凝胶电泳纯一的Ｌ—氨基酸氧化酶     

斑玉蕈酸性磷酸酯酶的酶学性质研究

以斑玉蕈为材料分别从菌盖和菌柄中提取一种酸性磷酸酯酶（ACPase,EC.3.1.3.2）,进一步用硫酸铵沉淀分离,Sephadex G-200柱纯化,从菌盖中分离到3个酶组分,从菌柄中分离到4个酶组分,分别对菌盖和菌柄的酶Ⅰ和酶Ⅰ′进行聚丙烯酰胺凝胶（PAGE）电泳纯度鉴定,均呈现单一酶蛋白带。SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）测定酶Ⅰ和酶Ⅰ′的相对分子量均为65kDa,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳及Sephadex G-75凝胶过滤测定分析,酶Ⅰ和酶Ⅰ′均为单亚基蛋白。紫外吸收光谱（UV）测     

裂褶菌胞内多糖的分离纯化鉴定及其性质

裂褶菌菌丝体用热水提取,乙醇沉淀,Sevag法脱蛋白,逆向流水透析,得胞内多糖粗品,经Sephadex A-50、Sephadex G-200柱层析纯化,得胞内多糖纯品,称SPG。纯度经纸层析、Sephadex G-200柱层析、高效液相色谱分析、聚丙烯酰胺凝胶电泳测定,结果表明SPG为单一均匀组分。 SPG水解物经纸层析、薄层层析分析证实它是由葡萄糖组成的一种葡聚糖结构,SPG的部分水解、酶解、红外光谱、核磁共振氢谱分析表明具有β(1→3),β(1→6)糖苷键。凝胶过滤法测定SPG的分子量约为10万。