幽门螺杆菌感染细胞模型的建立及感染相关microRNAs的筛选鉴定

目的：建立稳定的幽门螺杆菌（H.pylori）感染人胃上皮细胞模型;筛选并鉴定H.pylori感染相关microRNAs（miRNAs）的表达,为深入研究感染相关miRNAs的调控作用机制奠定基础。方法：将H.pylori标准株按MOI=100：1感染人胃上皮细胞,通过检测炎性细胞因子及炎症反应关键酶的表达综合评价感染模型;采用博奥公司miRNAs V3.0芯片分析细胞感染前后miRNAs表达谱变化,运用实时定量PCR技术和Northern杂交对表达显著差异的miRNAs进行分析鉴定。结果：H.pylori感染细胞24 h后,细胞分泌促炎细胞因子IL-8显著升高（P〈0.01）;启动炎症反应的关键酶COX-2的表达明显增加。芯片数据显示：H.pylori感染引起超过2倍显著差异表达的miRNAs包括：表达上调的PREDICTED-MIR191、miR-155、miR-92b、miR-30b、miR-146a、miR-16等,和表达降低的miR-181b、miR-324。实时定量PCR和Northern杂交结果显示感染相关miR-155和miR-146a在H.pylori感染细胞模型中表达均显著增加（P〈0.01）。结论：miR-155和miR-146a在感染细胞模型中的表达增加提示二者可能参与H.pylori感染的免疫调控过程。     

幽门螺杆菌感染细胞模型的建立及感染相关microRNAs 的筛选鉴定

目的:建立稳定的幽门螺杆菌(H.pylori)感染人胃上皮细胞模型;筛选并鉴定H.pylori感染相关microRNAs(miRNAs)的表达,为深入研究感染相关miRNAs的调控作用机制奠定基础。方法:将H.pylori标准株按MOI=100:1感染人胃上皮细胞,通过检测炎性细胞因子及炎症反应关键酶的表达综合评价感染模型;采用博奥公司miRNAs V3.0芯片分析细胞感染前后miRNAs表达谱变化,运用实时定量PCR技术和Northern杂交对表达显著差异的miRNAs进行分析鉴定。结果:H.pylori感染细胞24 h后,细胞分泌促炎细胞因子IL-8显著升高(P<0.01);启动炎症反应的关键酶COX-2的表达明显增加。芯片数据显示:H.pylori感染引起超过2倍显著差异表达的miRNAs包括:表达上调的PREDICTED-MIR191、miR-155、miR-92b、miR-30b、miR-146a、miR-16等,和表达降低的miR-181b、miR-324。实时定量PCR和Northern杂交结果显示感染相关miR-155和miR-146a在H.pylori感染细胞模型中表达均显著增加(P<0.01)。结论:miR-155和miR-146a在感染细胞模型中的表达增加提示二者可能参与H.pylori感染的免疫调控过程。     

miR-125b在急性加重期慢性阻塞性肺疾病患者血浆中的表达及与肺功能和炎症细胞因子的关系

目的:探讨微小RNA-125b(miR-125b)在急性加重期慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者血浆中的表达及其与肺功能、炎症细胞因子的关系。方法:选择2016年11月至2019年1月应急总医院收治的69例急性加重期COPD患者作为急性加重组,并于同期随机选取58例稳定期COPD患者作为稳定组和50例健康体检者作为对照组。采用实时荧光定量PCR法检测各组血浆miR-125b表达水平;采用肺功能检测仪测定肺功能,包括用力肺活量(FVC)、第1秒用力呼气量(FEV_1)、FEV_1/FVC;采用酶联免疫吸附法测定血清炎症细胞因子,包括白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)、高敏C反应蛋白(hs-CRP)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)。结果:急性加重组血浆miR-125b表达水平高于稳定组和对照组,差异有统计学意义(P0.05)。急性加重组、稳定组肺功能指标FVC、FEV_1、FEV_1/FVC低于对照组,且急性加重组低于稳定组,差异有统计学意义(P0.05)。急性加重组、稳定组血清炎症细胞因子IL-6、IL-8、hs-CRP、TNF-α水平高于对照组,且急性加重组高于稳定组,差异有统计学意义(P0.05)。Pearson相关分析结果显示,急性加重期COPD患者血浆miR-125表达水平与FVC、FEV_1、FEV_1/FVC呈负相关(P0.05),与IL-6、IL-8、hs-CRP、TNF-α呈正相关(P0.05)。结论:miR-125b在急性加重期COPD患者血浆中异常表达,并与肺功能及炎症细胞因子密切相关,可作为临床辅助诊断及评估患者病情严重程度的参考指标。     

microRNAs与糖尿病肾病

microRNAs(miRNAs)是一类内源性非编码调控单链小RNA,通过与靶mRNA的3'端非翻译区(3'UTRs)序列相互识别而引起靶mRNA降解或蛋白翻译抑制,从而参与机体器官发育分化、细胞增殖凋亡、肿瘤发生等多种生理病理过程。目前研究表明,miRNAs在糖尿病肾病(DN)的发病进展中发挥重要作用,一些miRNAs的表达异常(如miR-192、miR-21、miR-29、miR-377、miR-93、miR-200家族、miR-451和miR-251等的上调或下调)与DN的发生、发展密切相关。近期发现miRNAs在血清、血浆和尿液等多种体液中稳定存在,并且在DN发病状态下,一些miRNAs会发生特异性改变,提示miRNAs可作为DN诊断性标志物。而且,随着对miRNAs调控机制的深入研究,特定的miRNAs有可能成为DN的治疗靶点,为疾病的预防和进展提供新的治疗策略。     

慢性阻塞性肺疾病发病机制的研究进展

慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease, COPD)是呼吸系统中的常见病和多发病,其发病率和致死率居高不下。根据WHO调查数据显示,预计到2020年, COPD将成为全球第三大致死病因。COPD的形成与发展涉及众多因素,包括遗传因素和环境因素等。COPD的发病机制至今未明,氧化应激、炎症机制、蛋白酶/抗蛋白酶失衡以及细胞凋亡与之密切相关。另外,自身免疫反应、微生物组的变化以及无效的受损修复在COPD的发病机制中同样具有关键作用。因此,深入了解并研究COPD的发病机制对预防与治疗该疾病具有重要意义。     

红霉素对慢性阻塞性肺疾病大鼠ICAM-1、MMP-9的表达影响

目的：观察慢性阻塞性肺疾病（COPD）大鼠肺组织中ICAM-1及MMP-9的表达及红霉素的干预作用。方法：复制COPD大鼠模型,并用红霉素干预,收集支气管肺泡灌洗液行细胞学计数和分类检查;采用HE染色观察病理形态变化;免疫组化法检测大鼠支气管肺组织ICAM-1、MMP-9的表达。结果：与模型组比较,干预组支气管肺组织中ICAM-1、MMP-9表达显著降低;模型组中ICAM-1、MMP-9的表达与BALF中白细胞总数及中性粒细胞数成正相关;ICAM-1与MMP-9的表达成正相关。结论：COPD大鼠肺组织中的ICAM-1、MMP-9表达明显升高,可能与COPD的发病机制有关;红霉素可降低ICAM-1、MMP-9的表达,可能是红霉素在COPD中抗炎症反应的作用机制之一。     

内皮祖细胞移植在慢性阻塞性肺疾病小鼠体内分布

目的:观察经气管移植内皮祖细胞(EPCs)在烟雾暴露所致慢性阻塞性肺疾病模型小鼠中的分布及分化.方法:体外分离小鼠骨髓单个核细胞于EGM-2MV培养基中培养并鉴定.24只C57BL/6J小鼠随机分为正常对照组、COPD+PBS干预组及COPD+EPCs干预组;香烟烟雾暴露90 d建立慢性阻塞性肺疾病(COPD)小鼠模型;烟雾暴露结束后,COPD+PBS干预组及COPD+EPCs干预组分别经气管注入30 μ LPBS和30 μ L细胞悬液(含1×105个CM-DiI标记EPCs).移植后观察30 d处死小鼠,通过荧光显微镜观察移植细胞在肺内的分布及通过免疫荧光检测广谱细胞角蛋白的表达水平.结果:EPCs移植后30d可见EPCs分布于肺血管及气道,部分细胞表达上皮特异标志广谱细胞角蛋白.结论:EPCs移植后可定植COPD模型小鼠肺血管及气道,且可能转化为支气管及肺泡上皮细胞.     

红霉素对慢性阻塞性肺疾病大鼠ICAM-1、MMP-9的表达影响

目的:观察慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠肺组织中ICAM-1及MMP-9的表达及红霉素的干预作用。方法:复制COPD大鼠模型,并用红霉素干预,收集支气管肺泡灌洗液行细胞学计数和分类检查;采用HE染色观察病理形态变化;免疫组化法检测大鼠支气管肺组织ICAM-1、MMP-9的表达。结果:与模型组比较,干预组支气管肺组织中ICAM-1、MMP-9表达显著降低;模型组中ICAM-1、MMP-9的表达与BALF中白细胞总数及中性粒细胞数成正相关;ICAM-1与MMP-9的表达成正相关。结论:COPD大鼠肺组织中的ICAM-1、MMP-9表达明显升高,可能与COPD的发病机制有关;红霉素可降低ICAM-1、MMP-9的表达,可能是红霉素在COPD中抗炎症反应的作用机制之一。     

miR-22-3p通过激活PTEN/PI3K/AKT/NF-κB信号通路加重慢性阻塞性肺疾病

摘要 目的：探索miR-22-3p对慢性阻塞性肺疾病（COPD）的影响及作用机制。方法：将7周龄（体重250~280 g）雄性SD大鼠随机分为5组（n=12）：对照组（Con组）、COPD组、COPD+NC-agomir组、COPD+miR-22-3p-agomir组、COPD+NC-antagomir组和COPD+miR-22-3p-antagomir组。Con组大鼠为正常饲养的大鼠,其他组大鼠均通过香烟烟雾（CS）和脂多糖（LPS）诱导COPD动物模型。在CS暴露当天,Con组和COPD组大鼠鼻腔内注射50 μL生理盐水,COPD+NC-agomir组、COPD+miR-22-3p-agomir组、COPD+NC-antagomir组和COPD+miR-22-3p-antagomir组大鼠分别鼻腔内注射50 μL 10 nmoL的NC-agomir、miR-22-3p-agomir、NC-antagomir和miR-22-3p-antagomir,每2周注射1次,共注射6次。CS暴露90 d后,检测各组大鼠的最大自主分钟通气量（MVV）、0.3 s用力呼气量（FEV0.3）、用力肺活量（FVC）和最大呼气峰流速（PEF）。通过ELISA法测定支气管肺泡灌洗液（BALF）中白细胞介素-1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和巨噬细胞炎性蛋白-2（MIP-2）水平。通过苏木精-伊红（HE）染色评价肺组织损伤。根据试剂盒说明检测肺组织丙二醛（MDA）和超氧化物歧化酶（SOD）水平。通过RT-PCR检测肺组织miR-22-3p、磷酸酶与张力蛋白同源物（PTEN）、诱导型一氧化氮合酶（iNOS）、CD86、CD206和精氨酸酶1（ARG1）mRNA水平。通过Western blot检测肺组织PTEN、磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）、p-PI3K、蛋白激酶B（AKT）、p-AKT、核因子-κB（NF-κB） p65和p-NF-κB p65的蛋白表达水平。结果：与COPD组和COPD+NC-antagomir组相比,COPD+miR-22-3p-antagomir组大鼠的MVV、FEV0.3/FVC和PEF均升高（P<0.05）;肺泡出血、肺泡壁断裂、肺泡间隔水肿和炎性细胞浸润等病变减轻;BALF中的IL-1β、TNF-α和MIP-2水平均降低（P<0.05）;肺组织SOD水平升高,MDA水平降低（P<0.05）;肺组织iNOS和CD86 mRNA相对表达量降低,CD206和ARG1 mRNA相对表达量升高（P<0.05）;肺组织miR-22-3p相对表达量降低,PTEN mRNA和蛋白相对表达量升高（P<0.05）;肺组织p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT和p-NF-κB p65/NF-κB p65的蛋白相对表达量降低（P<0.05）。结论：miR-22-3p在COPD大鼠肺组织中上调,可能通过激活PTEN/PI3K/AKT/NF-κB信号通路,促进肺组织炎症反应和氧化应激,加重大鼠肺功能障碍和肺组织结构损伤。     

运动介导腺苷酸活化蛋白激酶防治慢性阻塞性肺疾病的作用机制

慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease, COPD)是一种以持续存在的呼吸道症状和气流受限为主要特征的、常见的、可预防和治疗的慢性气道疾病。目前，我国COPD的患病率仍呈不断增长的趋势，已成为仅次于高血压、糖尿病的中国第三大常见慢性病，给患者家庭和国家卫生系统带来巨大的负担。研究证实，肺部炎症、肺细胞衰老、肺线粒体功能障碍和肺代谢失调是COPD发生与发展的主要病理原因，腺苷酸活化蛋白激酶(AMP-activated protein kinase, AMPK)可以改善肺部炎症反应、延缓肺细胞衰老、纠正肺线粒体功能障碍及调节肺细胞代谢紊乱。但就目前而言，通过运动手段上调AMPK的表达防治COPD的潜在机制仍不清楚。因此，通过中国知网(CNKI)、PubMed、Web of Science、WHO等官网与数据库，检索并梳理相关文献资料，综述COPD的发病机制、运动对AMPK表达的影响及运动介导AMPK防治COPD的可能机制，以期为COPD提供新的治疗靶点。     

胰腺癌细胞株和胰腺癌组织中miRNAs的表达检测

目的:探明miRNAs在胰腺癌细胞株及组织中的表达情况,证实miRNAs的差异表达与胰腺癌的发生有相关性.方法:对胰腺癌细胞株和胰腺癌组织进行总RNA的提取,通过Real-time PCR方法检测17种miRNAs(miR-16、miR-20a、miR-21、miR-26a、miR-142-3p、miR-155、miR-210、miR-181a、miR-181b、miR-196a、miR-939、miR-223、miR-1202、miR-1207-5p、miR-1825、miR-1228、miR-1915)在胰腺癌细胞株及胰腺癌组织中的表达,分析miRNAs的表达与胰腺癌患者临床表现之间有无相关性.结果:胰腺癌细胞株和胰腺癌组织中miRNAs的表达明显较正常胰腺组织高.癌组织及癌旁组织中miRNAs表达量在不同性别的胰腺癌患者中差异不大(P＞0.05),并且miRNAs的表达与患者年龄及其血清CA19-9关系不大.结论:经筛选的miRNAs可以作为胰腺癌的诊断标志.胰腺癌组织中的miRNAs表达并不是一成不变的,而是随着肿瘤的生长而不断发生变化.     

miR-133b可能通过调控foxO1的表达影响小鼠B细胞发育

microRNAs(miRNAs)是一类具有转录后调控作用的非编码RNA,在发育、细胞增殖、凋亡及肿瘤发生等多种生理和病理过程中发挥重要作用.为全面了解小鼠B细胞中miRNAs的表达模式,利用流式细胞仪(FACS)分选处于不同发育时期的B细胞,采用TaqMan誖低密度芯片对其进行检测,筛选到pre-B阶段9个miRNAs表达量显著上调.将筛选出的miRNAs进行靶基因预测,并对预测靶基因进行功能聚类和通路分析,发现约4%的基因参与免疫系统过程,包括Bcl2、Kit等.选取foxO1与miR-19b、miR-142-3p、miR-106b、miR-182及miR-133b进行初步功能验证,双荧光素酶报告系统及Westernblot检测结果均显示,miR-133b可直接作用于foxO1 3′UTR从而降低foxO1的表达.结合人类和小鼠B细胞中foxO1的表达情况分析,其表达模式同miR-133b表达模式呈负相关,说明miR-133b可能参与了B细胞发育过程中foxO1的表达调控过程.     

miR-20b-5p在肿瘤及其他疾病中的生物学功能

miRNAs是一类非编码的小RNA分子,在多种疾病的发病和治疗中发挥重要作用,可调控细胞增殖、细胞周期、凋亡和迁移等过程中关键基因的表达。miR-20b-5p属于miR-17家族,在多种肿瘤中和非肿瘤性疾病中存在异常表达。在肿瘤中,miR-20b-5p扮演着癌基因或抑癌基因的角色,可通过调控相应靶分子的表达影响肿瘤细胞的增殖、凋亡、侵袭与迁移等生物学行为,进而促进或抑制肿瘤的发生发展。该文对miR-20b-5p在肿瘤和非肿瘤性疾病中的生物学功能和机制进行简要综述。相信随着对miR-20b-5p的功能和机制的深入阐明,miR-20b-5p有望作为多种疾病的诊治靶点。     

miR-17-92基因簇microRNAs对哺乳动物器官发育及肿瘤发生的调控

microRNAs(miRNAs)是近年发现的一种高度保守的非编码小RNA, 它们通过抑制靶基因mRNA的翻译或将其降解, 在转录后水平调控基因的表达, 参与调控哺乳动物多个器官的发育过程和人类疾病的发生。miR-17-92基因簇是一个高度保守的基因簇, 编码miR-17-5p、miR-17-3p、miR-18a、miR-19a、miR-20a、miR-19b-1和miR-92-1等7个miRNAs。大量证据表明, miR-17-92基因簇miRNAs参与了心、肺、免疫系统的发育、血管生长及前脂肪细胞的分化等过程。此外, miR-17-92基因簇miRNAs在多种肿瘤中高表达, 能作为致癌基因诱发淋巴瘤和血管化肿瘤的发生, 但它也可以作为抑癌基因抑制乳腺癌细胞的增殖。文章对miR-17-92基因簇miRNAs在哺乳动物器官发育及肿瘤发生中的作用进行综述     

miR-34b调控肠道病毒71型在人横纹肌肉瘤细胞中的复制及机制

【背景】研究发现microRNAs(miRNAs)可以参与调控病毒在宿主细胞内感染和复制的过程。【目的】研究miR-34b对肠道病毒71型(Enterovirus71,EV71)在宿主细胞内的复制及其可能机制。【方法】在人横纹肌肉瘤(Rhabdomyosarcoma,RD)细胞中转染miR-34b mimics和Inhibitor,通过Western blot和Real-time PCR实验检验EV71病毒的复制和表达情况。随后利用双荧光素酶报告系统验证miR-34b与潜在靶点eIF4E的相互作用,并检测miR-34b对RD细胞中eIF4E mRNA表达水平的影响。【结果】miR-34b可以促进病毒在RD细胞中的复制和表达,而miR-34b抑制剂有抑制病毒复制的作用,细胞内miR-34b可以通过作用于靶基因eIF4E调控EV71在宿主细胞中的复制过程。【结论】揭示了miR-34b在EV71病毒复制过程中的调控作用及机制,研究EV71病毒与宿主miRNAs的相互作用机制为进一步阐明EV71病毒感染与复制机理奠定了基础。     

miRNAs与脂蛋白酯酶

miRNAs是一类具有调控基因功能的非编码RNAs,它在细胞核中合成,可转运至细胞质,调控脂质代谢相关性疾病的发生发展。脂蛋白酯酶(lipoprotein lipase,LPL)作为甘油三酯水解的限速酶,由心肌、脂肪、骨骼肌、乳腺及巨噬细胞等实质细胞合成和分泌,在脂蛋白转运和脂质代谢过程中发挥重要作用。近期研究证实多种miRNAs,包括miR-29、miR-467b、miR-590、miR-27、miR-134和miR-186,可通过调控脂蛋白酯酶LPL的表达,进而影响脂质代谢。为了深入探讨miRNAs对LPL的影响,本文以miRNAs对LPL的调控作用进行综述,期望以miRNAs为靶点,为脂质代谢相关性疾病的防治提供治疗方案。     

白介素-18在被动吸烟诱导的慢性阻塞性肺疾病大鼠中的表达

目的 研究白介紊-18(Interleukin-18,IL-18)在被动吸烟诱导的慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)大鼠中的表达变化.方法 将20只大鼠随机分为2组,即正常对照组和COPD模型组.应用单纯被动吸烟法建立大鼠COPD模型,香烟烟雾暴露时间为6个月.利用酶联免疫吸附法测定2组大鼠血清和支气管肺泡灌洗液(bronchoal veolar lavage fluid,BALF)中的IL-18浓度,用实时定量RT-PCR法测定BALF中IL-18 mRNA的表达水平,用HE染色法观察肺组织形态学改变,用免疫组织化学染色法检测IL-18在肺组织中的表达.结果 1.COPD模型组血清和BALF中的IL-18浓度较正常对照组显著增加(P＜0.01);2.COPD模型组BALF中IL-18 mRNA的表达水平较正常对照组显著增高(P＜0.01);3.COPD模型组肺组织中IL-18的表达较正常对照组显著增加(P＜0.01).结论 被动吸烟诱导的COPD大鼠外周血和肺部均高表达IL-18,提示IL-18在吸烟所致的COPD发病机制中可能起重要作用.     

MiR-711的表达和功能研究进展

microRNAs是近年来的研究热点之一,芯片技术的运用,使得大量microRNAs作为潜在的疾病干预靶点被筛选出来。miR-711便是其中之一。研究结果显示,miR-711在心血管系统疾病、多种肿瘤以及肿瘤细胞外泌体、急性肝脑脏器损伤、炎症和内分泌疾病中表达水平发生显著改变,参与了包括细胞凋亡,肿瘤增殖,心肌纤维化和炎症反应等功能。但其中机制尚不完全清楚。本文对miR-711的表达特点和调控途径进行总结,对其在多个系统、多种疾病中的研究进展进行综述,为进一步深入研究miR-711的功能和作用机制提供线索。     

COPD大鼠模型在不同时期细胞转录因子NF-kB变化及意义(英文)

目的:建立分别由吸烟以及气管内滴注脂多糖导致慢性阻塞性肺病小鼠模型,并研究核因子-κB在(COPD)的作用。方法:我们将50只wistar鼠随机分成2组,1组为正常对照组,2组为COPD进展组。COPD进展组又进一步分为暴露香烟烟雾及气管内滴注脂多糖1周、2周、3周、4周、5周。预备好的小鼠被解剖观察,肉眼观察小鼠外形及肺组织标本,显微镜下观察肺脏的病理改变。分析PH、氧分压、二氧化碳分压,NF-kB的活性被测量。结果:COPD小鼠模型肺组织的病理改变如同COPD患者,不同暴露组的实验小鼠细胞总数结果表明,实验小鼠COPD肺组织的病理改变和人类COPD的病理改变是一致的。动脉血气分析结果显示暴露与烟雾及气管内滴注脂多糖4周的小鼠与正常对照组比较血PH、氧分压是降低的,而二氧化碳分压是升高的。结论:NF-kB在促进肺部炎症反应中起着重要的作用,通过活化肿瘤坏死因子及肺泡巨噬细胞。     

COPD大鼠模型在不同时期细胞转录因子NF-κB变化及意义

目的：建立分别由吸烟以及气管内滴注脂多糖导致慢性阻塞性肺病小鼠模型,并研究核因子-κB在（COPD）的作用。方法：我们将50只wistar鼠随机分成2组,1组为正常对照组,2组为COPD进展组。COPD进展组又进一步分为暴露香烟烟雾及气管内滴注脂多糖1周、2周、3周、4周、5周。预备好的小鼠被解剖观察,肉眼观察小鼠外形及肺组织标本,显微镜下观察肺脏的病理改变。分析PH、氧分压、二氧化碳分压,NF-κB的活性被测量。结果：COPD小鼠模型肺组织的病理改变如同COPD患者,不同暴露组的实验小鼠细胞总数结果表明,实验小鼠COPD肺组织的病理改变和人类COPD的病理改变是一致的。动脉血气分析结果显示暴露与烟雾及气管内滴注脂多糖4周的小鼠与正常对照组比较血PH、氧分压是降低的,而二氧化碳分压是升高的。结论：NF-κB在促进肺部炎症反应中起着重要的作用,通过活化肿瘤坏死因子及肺泡巨噬细胞。