胰腺癌潜在肿瘤标志物的探索及在胰腺癌中的应用

目的:探索胰腺癌新的潜在标志物,建立夹心法ELISA体系,并初步应用于胰腺癌患者的血清检测。方法:应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)技术对胰腺癌患者术前后血清进行分析,提纯分析差异蛋白并命名为DAP44,通过杂交瘤技术制备出抗DAP44单克隆抗体,用HRP标记法标记抗体,间接ELISA法检测抗体滴度,用制备出的抗体对胰腺癌组织和癌旁组织进行组化染色,采用夹心ELISA(DAS-ELISA)法制备抗DAP44检测试剂盒,检测胰腺癌病人和正常人血清DAP44值,比较两者差异。结果:对差异蛋白进行肽段测序和生物信息分析,并融合了3株能稳定分泌抗DAP44单克隆抗体的杂交瘤细胞(2D6H5,1E4D6,5B8H12),3株杂交瘤细胞分泌的抗体效价均在107以上,通过抗体配对筛选确定以2D6H5为包被抗体,1E4D6为酶标抗体时,DAS-ELISA法敏感性最高。两株抗体组化染色结果显示:癌组织DAP44表达量远高于癌旁。DAS-ELISA法标准曲线线性范围在0.78-25 ng/mL,检测下线为0.78 ng/mL,此方法检测到的胰腺癌病人和正常人血清DAP44平均含量分别为19.707±1.464和10.653±2.221,两者之间有统计学差异(P0.001)。结论:DAP44可能作为潜在的胰腺癌肿瘤标志物,建立的抗DAP44 DAS-ELISA法体系能够初步用于胰腺癌的临床诊断和疗效评估指标。     

肺癌转移与中医脏象理论相关性分析

目的:分析肺癌转移与中医脏象理论的相关性。方法:回顾性选择我院收治的102例晚期肺癌转移患者为研究对象,统计患者的转移灶所属部位,并参照《中医内科学》对患者的中医临床证候进行判定。分别统计各证型患者肺癌转移的单器官及首发转移器官的分布、肺癌转移各单器官及首发转移器官的证型分布情况。结果:各证型患者肺癌转移的单器官及首发转移器官分布率比较,差异具有统计学意义(P0.05)。同时,肺癌转移各单器官及首发转移器官的证型分布率比较,差异具有统计学意义(P0.05)。结论:根据肺癌患者的中医临床证候可判断其病灶转移方向,同时,根据肺癌患者的转移灶所属部位可判断其中医临床证型。     

miR-22-3p通过激活PTEN/PI3K/AKT/NF-κB信号通路加重慢性阻塞性肺疾病

摘要 目的：探索miR-22-3p对慢性阻塞性肺疾病（COPD）的影响及作用机制。方法：将7周龄（体重250~280 g）雄性SD大鼠随机分为5组（n=12）：对照组（Con组）、COPD组、COPD+NC-agomir组、COPD+miR-22-3p-agomir组、COPD+NC-antagomir组和COPD+miR-22-3p-antagomir组。Con组大鼠为正常饲养的大鼠,其他组大鼠均通过香烟烟雾（CS）和脂多糖（LPS）诱导COPD动物模型。在CS暴露当天,Con组和COPD组大鼠鼻腔内注射50 μL生理盐水,COPD+NC-agomir组、COPD+miR-22-3p-agomir组、COPD+NC-antagomir组和COPD+miR-22-3p-antagomir组大鼠分别鼻腔内注射50 μL 10 nmoL的NC-agomir、miR-22-3p-agomir、NC-antagomir和miR-22-3p-antagomir,每2周注射1次,共注射6次。CS暴露90 d后,检测各组大鼠的最大自主分钟通气量（MVV）、0.3 s用力呼气量（FEV0.3）、用力肺活量（FVC）和最大呼气峰流速（PEF）。通过ELISA法测定支气管肺泡灌洗液（BALF）中白细胞介素-1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和巨噬细胞炎性蛋白-2（MIP-2）水平。通过苏木精-伊红（HE）染色评价肺组织损伤。根据试剂盒说明检测肺组织丙二醛（MDA）和超氧化物歧化酶（SOD）水平。通过RT-PCR检测肺组织miR-22-3p、磷酸酶与张力蛋白同源物（PTEN）、诱导型一氧化氮合酶（iNOS）、CD86、CD206和精氨酸酶1（ARG1）mRNA水平。通过Western blot检测肺组织PTEN、磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）、p-PI3K、蛋白激酶B（AKT）、p-AKT、核因子-κB（NF-κB） p65和p-NF-κB p65的蛋白表达水平。结果：与COPD组和COPD+NC-antagomir组相比,COPD+miR-22-3p-antagomir组大鼠的MVV、FEV0.3/FVC和PEF均升高（P<0.05）;肺泡出血、肺泡壁断裂、肺泡间隔水肿和炎性细胞浸润等病变减轻;BALF中的IL-1β、TNF-α和MIP-2水平均降低（P<0.05）;肺组织SOD水平升高,MDA水平降低（P<0.05）;肺组织iNOS和CD86 mRNA相对表达量降低,CD206和ARG1 mRNA相对表达量升高（P<0.05）;肺组织miR-22-3p相对表达量降低,PTEN mRNA和蛋白相对表达量升高（P<0.05）;肺组织p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT和p-NF-κB p65/NF-κB p65的蛋白相对表达量降低（P<0.05）。结论：miR-22-3p在COPD大鼠肺组织中上调,可能通过激活PTEN/PI3K/AKT/NF-κB信号通路,促进肺组织炎症反应和氧化应激,加重大鼠肺功能障碍和肺组织结构损伤。