广义烙铁头属三种烙铁头的核型及分类地位初步探讨

报道３种烙铁头蛇的核型。其中,烙铁头２ｎ＝３６＝１６Ｍ（１４Ｖ＋２ＳＶ／Ｖ）＋２０ｍ,ＺＷ型性决定,Ｚ为Ｖ型,Ｗ为ＳＩ／ＳＶ型,Ｚ明显大于Ｗ;菜花烙铁头２居群２ｎ＝３６＝１６Ｍ（１４Ｖ＋２ＳＩ）＋２０ｍ,ＺＷ型性决定,Ｚ为Ｖ型,Ｗ为ＳＩ型,Ｚ明显大于Ｗ;云南竹叶青２ｎ＝３６＝１６Ｍ（１２Ｖ／ＳＶ＋２ＳＶ／ＳＩ＋２ＳＩ）＋２ｍ,无异型性染本,对３种的核型及烙铁头属已知核型进行了比较分析,并对云南竹叶     

单纯疱疹病毒I型扩增子系列载体的构建

我们先前已报道了构建成一种能在ＨＳＶ ｔｓＫ株辅助下进行复制和包装,并表达β－半乳糖苷酶基因ｌａｃＺ的ＨＳＶ－１扩增子质粒ｐＨＳＬ,以及它的应用。该质料中依次含有ＨＳＶ－１复制起点ｏｒｉＳ序列及ＩＥ６８启动子、ｌａｃＺ基因、ＳＶ４０ｐｏｌｙＡ、ＨＳＶ－１包装信号‘ａ’序列和大肠杆菌质粒骨架。然而,该质粒中的报告基因ｌａｃＺ无法用简单的酶切方法卸载下来,继而装入目的基因。本研究在此基础上,新构建了一     

猪伪狂犬病毒蛋白激酶基因的序列测定与分析

对伪狂犬病毒湖北株（ＰＲＶ ＨＢ株）蛋白激酶（ＰＫ）基因进行了克隆和序列测定。分析比较了该序列与ＰＲＶＮＩＡ－３株、Ｋａ株以及ＨＳＶ－１、ＶＺＶ ＰＫ基因的同源性。结果显示,在测定全长１３１２ｂｐ的ＤＮＡ序列中,包括着一个１００２核苷酸的开放读框,可编码３３４个氨基酸组成的多肽。ＰＲＶ－ＨＢ株ＰＫ与ＰＲＶ－ＮＩＡ３、ＰＲＶ－Ｋａ、ＨＳＶ－１、ＶＺＶ ＰＫ基因比较,核苷酸的同源性分别为９８．７％、９     

利用RT_PCR、DNA序列分析及原核基因表达对我国大豆花叶病毒进行分子鉴定(英文)

大豆花叶病毒（ＳＭＶ） 在大豆（ Ｇｌｙｃｉｎｅ ｍａｘ Ｌ．） 上引起严重病害。利用ＲＴ＿ＰＣＲ 扩增并克隆了ＳＭＶ＿ＺＫ（ 一个中国ＳＭＶ 分离株） 基因组中全部蛋白质编码区的ｃＤＮＡ。通过对ＨＣ＿ＰＲＯ、ＮＩｂ 和ＣＰ编码区进行序列测定与分析,发现ＳＭＶ＿ＺＫ 与ＳＭＶ＿Ｇ２ 高度同源,从而在分子水平上证明在我国大豆作物中存在ＳＭＶ＿Ｇ２ 类似株系。将ＳＭＶ＿ＺＫｃＤＮＡ克隆于细菌表达载体,获得并提纯了６ 种ｃＤＮＡ 的表达产物。这项工作将为进一步研究ＳＭＶ 基因组的功能奠定基础。     

水痘一带状疱疹病毒研究进展

水痘－带状疱疹病毒（ＶＺＶ）是致人类疾病的重要疱疹病毒之一。为预防水痘与带状疱疹,日本研制成功水痘减毒活疫苗,并出口到世界一些国家。本文就ＶＺＶ的分子生物学特性、病毒的致病机制与临床特征、病毒感染的体液免疫与细胞免疫,水痘疫苗株病毒与疫苗等的研究情况作一简要综述。     

HCV/HBV复合抗原基因的克隆、表达及免疫应答研究

为探讨ＨＣＶ／ＨＢＶ 复合疫苗的可行性,将合成的丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）复合多表位抗原基因ＰＣＸ与ＨＢｓＡｇ 基因连接成ＰＣＸＳ基因,与β－半乳糖苷酶（ＧＺ）基因融合后在大肠杆菌及减毒鼠伤寒沙门氏菌中获得表达．目的蛋白ＧＺ－ＰＣＸＳ可被抗－ＨＢｓ 及抗－ＨＣＶ 抗体所特异识别．ＧＺ－ＰＣＸＳ抗原皮下注射免疫ＩＣＲ小鼠后,诱发了较高水平的抗－ＧＺ－ＰＣＸＳＩｇＧ反应．构建的重组减毒鼠伤寒沙门氏菌ＳＬ３２６１（ｐＷＲ／ＰＣＸＳ）口服免疫小鼠后,诱发了高水平的ＣＤ８＋ Ｔ细胞增殖反应及抗ＧＺ－ＰＣＸＳＩｇＧ反应．所有免疫小鼠均未见明显的毒副作用．该研究揭示,ＨＣＶ／ＨＢＶ 复合抗原可诱发特异性体液免疫及细胞免疫应答,而活菌苗口服可能是理想的免疫途径,为ＨＣＶ／ＨＢＶ 双价疫苗研究提供了一定的理论及实验依据．     

疱疹病毒对抗病毒药物抗性的回顾

本文就单纯疱疹病毒（ＨＳＶ）、水痘带状疱疹病毒（ＶＺＶ）、人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）、ＥＢ病毒（ＥＢＶ）等疱疹病毒的抗病毒药物,产生抗性的机理和抗病毒治疗的策略等方面进行了回顾。     

棉铃虫核型多角体病毒凋亡抑制基因对p35基因失活病毒的功能拯救

野生型苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒（ＡｃＮＰＶ）能感染棉铃虫细胞,不引起细胞凋亡,用ＬａｃＺ基因使ＡｃＮＰＶ凋亡抑制基因ｐ３５插入失活,得到缺陷病毒Ａｃｐ３５Ｚ能迅速引起棉铃虫细胞凋亡,但缺陷病毒本身不能复制。用ＡｃＮＰＶ即早期基因ＩＥ１启动子带动棉铃虫杆状病毒（ＨａＮＰＶ）ｐ３５基因在棉铃虫细胞中瞬时表达,能拯救ｐ３５基因失活病毒Ａｃｐ３５Ｚ复制。通过Ｘ－ｇａｌ显色反应和ｄｏｔＥＬＩＳＡ分别检测到了半乳糖苷酶的活性和ｐ３５基因的表达,证明了所克隆的ＨａＮＰＶｐ３５基因不仅是一个凋亡抑制基因,也是一个与杆状病毒复制相关的基因,它的瞬时表达能支持Ａｃｐ３５Ｚ在棉铃虫细胞中复制。     

表达LacZ基因重组火鸡疱疹病毒（HVT）的构建

将不含任何启动子的Ｅ．ｃｏｌｉ ＬａｃＺ基因,插入火鸡疱疹平素ＦＣ－１２６株胸苷激酶编码区末尾的ＮｈｅⅠ位点,构建成转移载体质粒ｐＴＫＬａｃＺ。用此质粒和ＨＶＴ感染的细胞基因组总ＤＮＡ共感染鸡胚成纤维细胞,在Ｘ－ｇａｌ存在下,通过蓝斑筛选,分离到重组体ＨＶＴ。ｒＨＶＴ与野生型ＨＶＴ－ＦＣ－１２６株在ＣＥＦ中的生长特性完全相似,且在连续传代过程中能稳定表达ＬａｃＺ基因。     

利用RT—PCR,DNA序列分析及原核基因表达对我国大豆花叶病毒进行分 …

大豆花叶病毒（ＳＭＶ）在大豆（Ｇｋｌｙｃｉｎｅ ｍａｘ Ｌ．）上引起严重病害。利用ＲＴ－ＰＣＲ扩增并克隆了ＳＭＶ－ＺＫ（一个中国ＳＭＶ分离株）基因组中全部蛋白质编码区的ｄＤＮＡ,通过对ＨＣ－ＰＲＯ,ＮＩｂ和ＣＰ编码区进行序列测定与分析,发现ＳＭＶ－ＺＫ与ＭＳＶ－Ｇ２高度同源,从而在分子水平上证明在我国大豆作物中存在ＳＭＶ－Ｇ２类似株系。     

重组抗体—尿激酶导向溶栓剂的基因构建及表达

为了获得高效、高特异性溶栓药物,应用基因工程技术,成功的表达了由人源化抗人活化血小板单抗和单链尿酶组成的抗体导向溶栓剂（ＳＺ５１Ｈｕ－ｓｃｕＰＡ）。通过基因重组ＰＣＲ方法将ｓｃｕＰＡ全长ｃＤＮＡ的Ｎ末端连接在ＳＺ５１重链恒区ＣＨ３末端,构建了含有目的蛋白融合基因的真核表达载体αｌｙｓ３０－ＳＺ５１ＶＨ／Ｈｕ－ｓｃｕＰＡ。采用脂转染法将表达载体导入分泌ＳＺ５１ＶＫ／Ｈｕ轻链的小鼠骨髓瘤细胞中,筛选出     

增强的ＵＶ—Ｂ辐射对麦田生态系统中杂草、大型土壤动物和麦蚜种群数量动态

研究了大田栽培和自然光条件下,模拟ＵＶ－Ｂ辐射（ＵＶ－Ｂ,２８０－３１５nm)增强对麦田生态系统杂草、大型土壤动物和麦蚜种群数量动态的影响,在ＵＶ－Ｂ辐射下,杂草和大型土壤动物的种类和数量降低,种物多样性改变,杂草总生物量也降低。ＵＶ－Ｂ辐射降低牙复合种群数量,并与麦叶粗纤维、可溶性蛋白、可溶性糖、Ｍg和Ｚn含量有显著的相关性。ＵＶ－Ｂ辐射还导致麦蚜与麦叶Ｍg、Fe和Ｚn含量均显著增加。     

鼻咽癌中Epetein－Barr病毒基因结构特点

鼻咽癌中感染的ＥＢＶ以潜伏态存在,只有少数基因得到表达。我们从分子生物学水平研究其潜伏机制。已知ＢＺＬＦｌ基因和ＢａｍＨＩＥＺ片段内部分基因对ＥＢＶ的复制激活起关键作用。我们用体外基因扩增（ＰＣＲ）法扩增ＢＺＬＦｌ基因外显子－１序列,并用序列分析法研究了该基因结构特点。此外,检测了ＢａｍＨＩＥＺ片段内缺失,结果发现２１例鼻咽癌（ＮＰＣ）组织中,ｌｌ例有ＢａｍＨＩＥＺ片段内缺失,长２．９９ｋｂ,与潜伏态存在的ＲａｊｉＥＢＶ类似。提示鼻咽癌小的ＥＢＶ以潜伏态存在,与ＮＰＣ发病有关。     

家蚕核型多角体病毒egt基因的结构和功能分析

以苜宿银纹夜蛾核型多角体病毒（ＡｃＭＮＰＶ）的ｅｇｔ基因作探针,从家蚕核型多角体病毒镇江株（ＢｍＮＰＶ ＺＪ－８）基因组中克隆了ｅｇｔ基因及其旁侧序列,作了该片段的酶切图谱;测定了ＢｍＮＰＶ ＺＪ－８ｅｇｔ基因序列。与ＡｃＭＮＰＶ的ｅｇｔ基因相比同源性为９５％;基因大小都为１５１８ｂｐ。利用ｅｇｔ基因旁侧序列构建了转移载体ｐＵＤｅｇｔ,以绿色荧色光蛋白基因（ＥＧＦＰ）作报告基因取代ｅｇｔ基因,构建     

PARP酶抑制剂未引起整合的外源LacZ基因的丢失

使用聚ＡＤＰ核糖聚合酶（ＰＡＲＰ）ＮＡＤ位点抑制剂苯甲酰胺（ＢＡ）研究了降低ＰＡＲＰ酶活性对外源ＬａｃＺ基因整合稳定性的影响,利用ＤＮＡ体外重组技术将ＬａｃＺ基因全序列插入到真核表达载体载体ＰＳＶ２ｎｅｏ的ＨｉｎｄⅢ位点,构建了一个具有真核细胞ｎｅｏ基因筛选标记和ＬａｃＺ基因的真核表达重组体ＰＳＶ２ｎｅｏ－ｂｅｔａ－ｇａｌ将该重组体导入ＨｅＬａ细胞,经Ｇ４１８筛选获得了能稳定表达β－半乳糖苷酶的Ｈ     

鼻咽癌中Epstein—Barr病毒基因结构特点

鼻咽癌中感染的ＥＢＶ以潜伏态存在,只有少数基因得到表达。我们从分子生物学水平研究其潜伏机制。已知ＲＺＬＦ１基因和ＢａｍＨＩＥＺ片段内部分基因对ＥＢＶ的复制激活起关键作用。我们用体外基因扩增（ＰＣＲ）法扩增ＢＺＬＦ１基因外显子－１序列,并用序列分析法研究了该基因结构特点。此外,检测了ＢａｍＨＩＥＺ片段内的基因缺失,结果发现２１例鼻咽癌（ＮＰＣ）组织中,１１例有ＢａｍＨＩＥＺ片段内缺失,长达２．９９ｋ     

成年白腰文鸟端脑新生神经元的光镜和电镜研究

应用光镜和电镜放射自显影方法,对成年雄性鸣禽白腰文鸟脑中新生神经元的起源和分布进行研究,结果发现,（１）端脑室带区（ＶＺ）中存在不均匀分布的（＾３Ｈ）标记细胞,大量标记细胞分布在端脑尾侧新纹状体水平（Ｌ１－Ｌ１４）的ＶＺ,形成标记细胞的“热点”区１（２）标记细胞经两次有丝分裂后,大约在肌肉注射（＾３））的第６天后开始从ＶＺ向外迁移,在３０天左以达目的脑区分化成为成熟神经元,这些神经元不均匀分布在端     

单纯疱疹病毒Ⅰ型扩增子质粒载体的构建及LacZ基因的表达

从单纯疱疹病毒Ⅰ型ＨＳＶ－１基因组中分离出其包装信号序列,与含ＨＳＶ－１复制起点及ＩＥ－６８基因启动子的ＤＮＡ序列、β半乳糖苷酶基因和大肠杆菌质粒骨架,构建了一种ＨＳＶ－１扩增子质粒载体ｐＨＳＬ,其中ＬａｃＺ基因置于ＩＥ－６８基因启动子控制下。将此质粒转染已感染了ＨＳＶ－１温度敏感株ｔｓＫ株的Ｖｅｒｏ细胞,ｐＨＳＬ可在ＨＳＶ－１ｔｓＫ的辅助下包装成假病毒颗粒,这样就可得到同时含有假病毒和ＨＳＶ－１ｔｓＫ的混合毒株ｄｖＨＳＬ。将此混合毒株感染传代细胞和神经细胞,可在其中表达ＬａｃＺ基因,而在生理温度（３７℃）下,混合毒株的复制受到抑制。提示这种缺陷型疱疹病毒载体有用于向神经系统基因转移的可能性。     

痘苗病毒天坛株非必需区TA25R…TA36L的两步重组表达载体的构建

针对痘苗病毒天坛株非必需区ＴＡ２５Ｒ－ＴＡ３６Ｌ,构建了可去除ＴＡ２６Ｒ至ＴＡ３５Ｌ的１０个ＯＲＦｓ,并同时表达ＬａｃＺ的两步重组表达载体ｐＡ２４２７ＬａｃＺ。通过两种方法（一步重组和两步重组）获得了在该区域表达ＬａｃＺ基因的重组痘苗病毒ＲＶＡ２４２７Ｌdisplay status     

抗人活化血小板单抗SZ一51嵌合抗体的构建及表达

ＳＺ－５１是一种抗人活化血小板单克隆抗体,并显示了很好的导向血栓显像与导向溶栓性能。为了减少该单抗的免疫原性以及能获得高效表达的ＳＺ－５１“人源化”单抗,我们构建了真核表达载体ａ－Ｌｙｓ１７－５１ＶＫ／Ｈｕ．ａ－Ｌｙｓ３０－５１ＶＨ／Ｈｕ。应用Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ方法分别将重、轻链表达载体导入骨髓瘤细胞ＳＰ２／０中,并在相应的选择性培养基中进行耐药克隆筛选,经过体外长期传代培养和二次单克隆化,获得了一株高效表达重组ＳＺ－５１嵌合抗体的细胞株。培养上清中抗体蛋白的表达量为５ｍｇ／Ｌ,经Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ证实重组嵌合抗体具有与亲本鼠源单抗相同的ＧＭＰ－１４０结合特性,而且能与鼠源ＳＺ－５１单抗竞争结合活化血小板。本研究结果表明,基因工程“人源化”ＳＺ－５１单抗可以作为导向载体进行导向显像与导向溶栓,并为今后进一步应用于临床展示了良好的前景。