意蜂和中蜂四种同工酶的研究

用聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦电泳分析了意蜂和中蜂的酯酶(Est)、异柠檬酸脱氢酶(Idh)、苹果酸酶(Me)和苹果酸脱氢酶(Mdh)同工酶.两个蜂种的四种同工酶谱有不同程度的差别、意蜂酯酶Ⅳ和苹果酸脱氢酶Ⅲ是多态性的;中蜂的四种同工酶没有多态现象.     

雌雄文昌鱼同工酶的表型差异

本文应用聚丙烯酰胺凝胶电泳结合生化染色方法分析了雌雄文昌鱼中苹果酸酶、苹果酸脱氢酶、酸性磷酸酶和酯酶四种同工酶的酶谱。首次发现苹果酸酶、苹果酸脱氢酶和酸性磷酸酶表型在文昌鱼雌性和雄性个体之间存在差异 ,而在同一性别不同个体之间无差异。酯酶表型较复杂 ,不但在不同性别个体之间而且在同一性别不同个体之间都出现一定差异     

产丁二酸工程菌的构建及其厌氧发酵

为了考察过量表达苹果酸酶对于E.coli NZN111(ldhA::Kan pfl::Cam)厌氧发酵产丁二酸的影响, 将连接有苹果酸酶基因sfcA的表达载体pTrc99a-sfcA转化进NZN111中, 构建了重组NZN111(pTrc99a-sfcA)。0.5 mmol/L IPTG诱导8 h后, 测定的苹果酸酶比酶活为30.67 u/mg, 比受体菌提高了140倍。采用两阶段发酵模式, 结果表明: 过量表达的苹果酸酶在NZN111体内催化了从丙酮酸到苹果酸的逆向反应, 丁二酸是发酵过程中积累的主要有机酸, 且当加入0.7 mmol/L IPTG诱导, 初始葡萄糖糖浓度为18.5 g/L时, 选择对数生长期后期的菌种以10%的接种量转入厌氧发酵, 发酵结束时发酵液中丁二酸的浓度为12.84 g/L, 对葡萄糖的收率为69.43%, 乙酸为0.58 g/L, 二者浓度比为22:1, 没有检测到甲酸和乳酸。构建的菌种具有高产丁二酸和副产物极少的优点, 在同类菌种中处于先进水平。     

山杏苹果酸酶基因的克隆与生物信息学分析

三羧酸转运体系(柠檬酸,苹果酸和丙酮酸)可为脂肪酸生物合成提供原料乙酰辅酶A与还原力NADPH;而苹果酸酶可催化苹果酸发生氧化脱羧而产生NADPH,是调控脂肪酸代谢的重要酶。山杏种子脂肪酸含量丰富、产油率高,是研究植物油脂代谢的良好材料。本研究以山杏为试材,采用RACE克隆和电子拼接相结合的方法,首次从山杏种子中克隆得到苹果酸酶基因(命名为SaME,GenBank上登记号为JX262381),该基因的cDNA编码区全长1923bp、编码640个氨基酸,预测其编码蛋白分子量为70.15kD、等电点为6.38;同时,运用生物信息学方法对SaME基因编码蛋白的理化特性、结构域和亚细胞定位等方面进行预测分析,结果显示,该蛋白定位在细胞的质体膜上,具有苹果酸酶活性,属于NADP-ME超家族。本文对山杏SaME基因的克隆与分析,为进一步探究苹果酸酶对油脂代谢的调控机制奠定了基础。     

大麦初生叶中质外体的蛋白、酯酶和苹果酸脱氢酶同工酶(英文)

把6天株龄的大麦(Hordeum vylgare L.)初生叶的下表皮剥去后,以含pH6.5的200mmol/L NaCl缓冲液真空渗洗叶片36min,获得的细胞间隙洗液含有水溶性或弱离子结合态的质外体蛋白质和酶。渗洗过的叶片用缓冲液磨成匀浆和离心后,上清液含原质体蛋白质和酶。用1mmol/L NaCl可溶解离子结合态的质外体蛋白质和酶,两条(25和31kD)和7条(22,28,30,51,55,60和71kD)蛋白质带只分别在含有200mmol/L和1mmol/L NaGl的质外体提取液中测得。机械创伤诱导两条(32和33kD)可溶于200mmol/L NaCl的质外体蛋白带,在质外体还测到3条可溶于200mmol/L NaCl和4条可溶于1mmol/L NaCl的苹果酸脱氢酶同工酶。在质外体和共质体两部分均发现有酯酶Ⅰ同工酶,但移向阴极的酯酶同工酶Ⅰ只见于溶在200mmol/L NaCl的质外体中。移向阳极的酯酶Ⅱ同工酶仅见于共质体中。     

微粒体膜苹果酸酶活性与γ-亚麻酸含量的关系

用能生产不同GLA含量的油脂的被孢霉为试验材料,研究菌体所产油脂的GLA含量与菌体的微粒体膜结合的苹果酸酶活性之间的关系。结果表明,微粒体膜的苹果酸酶活性与菌体油脂的GLA含量存在显著的正相关关系,由苹果酸酶原位产生的NADPH是微粒体膜磷脂上脂酰基完成会饱和作用的关键所在,胞基质中的NADPH在脂肪酸的延长和去饱和中不能发挥作用。     

兼性CAM植物NAD—苹果酸酶的行为研究

以土三七（Ｓｅｄｕｍ ａｉｚｏｏｎ）和露花（Ｍｅｓｅｍ ｂｒｙａｎｔｈｅｍ ｕｍ ｃｏｒｄｉｆｏｌｉｕｍ ）为材料,对兼性景天酸代谢（ＣＡＭ）植物的ＮＡＤ－苹果酸酶作了初步研究。当有５ ｍ ｍ ｏｌ／ＬＭｎＣｌ２、６ ｍ ｍ ｏｌ／ＬＭａｌ和５０ μｍ ｏｌ／ＬＣｏＡ 存在时,其最适ｐＨ 为７,且在低ｐＨ（７ 以下）范围内活性较高,而在高ｐＨ（７以上）范围内活性较低。该酶活性有季节性的变化,在７ 月份酶活性达最高峰,这与羧化系统的磷酸烯醇式丙酮酸（ＰＥＰＣ）活性变化趋势基本一致。同时,其活性也有昼夜变化,白天活性高,夜间活性低。经水分胁迫诱导出ＣＡＭ 后,ＮＡＤ－ＭＥ活性增加了２—３ 倍。我们认为,ＣＡＭ的调节是由羧化系统的ＰＥＰＣ和脱羧系统的ＮＡＤ－ＭＥ协调作用的结果     

转高粱C4型NADP-ME基因水稻植株的光合生理特征

NADP-苹果酸酶(NADP-ME)是C4型植物C4光合途径的一个分离得到了编码高梁(Sorghum vuklgare L.)C4型NADP-ME的全长cDNA.该cDNA全长为2 139 bp,其开放可读框为1 911bp,共编码636个氨基酸和一个终止密码子(GenBank登录号为AY274836).利用农杆菌介导的转化系统将其转入水稻品种"农垦58".经Southern杂交、Northern杂交和酶活性检测表明,高粱C4型NADP-ME可以在水稻中有效表达,酶活性可被提高1～7倍.对转基因水稻进行光合生理检测表明,转NADP-ME基因水稻CO2交换特征没有明显改变,但是在中午强光条件下光抑制加剧.     

盐胁迫对库拉索芦荟叶片中NADP-苹果酸酶基因的诱导表达

为弄清景天酸代谢植物 库拉索芦荟中NADP 苹果酸酶 (NADP ME)基因的表达与其耐盐间的关系 ,根据已知NADP 苹果酸酶序列设计引物 ,从库拉索芦荟的 2个月幼苗中扩增克隆了NADP 苹果酸酶 4 96bp的cDNA片段 ,并对其进行了序列测定 ;选用敏感品种皂质芦荟和耐盐品种库拉索芦荟做材料 ,分别检测高盐胁迫条件下NADP ME的表达和NADP ME的活性。结果表明 ,两者在不同品种的芦荟中均被诱导 ,但诱导的强度与芦荟的耐盐程度相关。Northern杂交分析表明 ,高盐、干旱、外源ABA均能强烈诱导苹果酸酶的表达 ,但寒冷对其影响不大 ,这与库拉索芦荟的生物学特性相符合 ;此外 ,为了检测库拉索芦荟中NADP 苹果酸酶受盐诱导情况 ,利用Western印迹对样品进行了分析 ,结果显示高盐条件不仅明显诱导NADP ME的合成 ,而且随着处理时间的延长其合成量也在增多。