豚鹿MHC-DOA基因克隆及其外显子2遗传多样性研究

主要组织相容性复合物(MHC)在脊椎动物的免疫系统中起着重要的作用,MHC-DOA基因是MHCⅡ类的非经典基因,其外显子2多态性丰富。豚鹿Axis porcinus是我国极度濒危的动物。本研究以成都动物园圈养的38头豚鹿为研究对象,提取豚鹿血液总RNA,反转录合成cDNA为模板,利用PCR方法克隆到豚鹿MHC-DOA序列;同时利用PCR方法扩增38头豚鹿的MHC-DOA基因外显子2基因并测序,再进行多态性分析。结果显示:豚鹿MHC-DOA基因开放阅读框长753 bp,编码250个氨基酸残基;蛋白质同源性分析表明,豚鹿MHC-DOA基因与东欧马鹿Cervus elaphus hippelaphus的同源性最高(98.4%);38头豚鹿的MHC-DOA外显子2共有10种单倍型,整体遗传多样性水平中等;MHC-DOA外显子2部分序列中发生了核苷酸的缺失和插入,进而引起DOA蛋白序列发生改变。豚鹿MHC-DOA多态性的研究对豚鹿种群遗传结构调查、遗传资源的保护具有重要意义。     

自然哺乳长颈鹿的幼仔行为研究

对成都动物园2005年和2008年出生长颈鹿幼仔在母兽哺乳情况下的1月龄内幼仔行为进行了观察和分析.发现幼长颈鹿的主要行为有卧、走、站、吃奶、跑等,其中卧和站的行为分别占全天时间的61.7%和32.3%;幼长颈鹿在10 d左右开始学习采食青草,4周龄时明显能吃到一些青草.     

凹甲陆龟沙门氏菌的分离鉴定及毒力因子基因的PCR检测

从成都动物园因腹泻死亡的凹甲陆龟体内分离到一株病源菌,经选择性分离培养、生化试验、血清型鉴定等,确定该病源菌为D群肠炎沙门氏菌,其抗原结构式为1,9,12∶ g,m∶ -.该菌株对小鼠有较强的致病性,能引起人工感染小鼠大量死亡,且从其体内分离到相同特性的菌株;药物敏感性试验证实该分离菌对头孢曲松、氧氟沙星、卡拉霉素、多粘菌素、复方新诺明、呋喃唑酮等敏感,对链霉素、四环素、氯霉素等耐药;同时根据GenBank中已报道的沙门氏菌毒力因子ivnA和ivnE的基因序列,设计两对特异性引物对该菌进行PCR检测,结果在该菌中成功扩增并检测出ivnA和ivnE基因.本试验尝试了沙门氏菌的PCR检测方法,为该分子诊断技术的全面推广奠定了良好基础,也为今后该疾病的预防、诊断和治疗提供了科学的实验数据.     

圈养山魈行为的初步观察

2001年1-9月,在成都动物园对人工饲养状态下14(8♀♀6♂♂)只山魈(andrillus sphinx)的行为时间分配进行了研究。用时间取样法记录每10分钟内目标取样法所见动物的各种行为及其频次,通过1806小时的研究表明,山魈主要的日行为是取食、休息、运动三种个体行为,它们分别占日活动时间的22．91％、33．79％、和33．14％;其次为梳理行为,占山魈日活动时间的4．09％;嬉戏行为仅发生在非成年个体间。山魈活动行为(除去休息以外的所有行为)的高峰出现在8：00-10：00、16：00-18：00左右的两个时段。日活动时间集中在7：00-19：00,但在13：00-14：00活动强度明显减弱,有一休息峰出现。     

基于微卫星位点的人工圈养豚鹿亲子关系鉴定

豚鹿属我国国家I级重点保护动物,目前国内野生种群已经灭绝,人工圈养数量少,已极度濒危。成都动物园是国内最大的豚鹿饲养单位,对该园内豚鹿进行亲子鉴定及遗传谱系建立是我国豚鹿拯救工程中一重要环节。本文利用7个微卫星标记对成都动物园27只豚鹿个体进行了基因分型,在母本已知情况下成功鉴定了13对父子关系,其中排除法鉴定8对,似然法鉴定5对且置信度达95%。将亲子鉴定的结果辅以动物园豚鹿圈养的历史记录,我们构建了该园豚鹿的遗传谱系图。本文的研究成果将为后续人工繁殖中亲本雌雄配对的个体选择以及种群的遗传管理提供参考。     

豚鹿血液细胞和血液化学指标测定

应用Sysmex F-820血球计数仪和Olympus AU400全自动生化分析仪,对成都动物园圈养的16只豚鹿的46个血液样本进行血液细胞及血液化学43项指标检测,并对成体、亚成体及幼体进行统计分析,建立了一个参考指标.这对豚鹿的疾病诊断和繁育研究具有重要的意义.     

圈养山魈行为的初步观察

2001年1～9月,在成都动物园对人工饲养状态下14(8♀♀6♂♂)只山魈(Mandrillus sphinx)的行为时间分配进行了研究.用时间取样法记录每10分钟内目标取样法所见动物的各种行为及其频次,通过1806小时的研究表明,山魈主要的日行为是取食、休息、运动三种个体行为,它们分别占日活动时间的22.91%、33.79%、和33.14%;其次为梳理行为,占山魈日活动时间的4.09%;嬉戏行为仅发生在非成年个体间.山魈活动行为(除去休息以外的所有行为)的高峰出现在800～1000、1600～1800左右的两个时段.日活动时间集中在700～1900,但在1300～1400活动强度明显减弱,有一休息峰出现.     

林麝血液生理生化指标研究

以健康雄麝、健康雌麝和患化脓病林麝各10头为研究对象,比较它们之间的血液生理生化指标差异。结果表明:(1)健康雄麝和健康雌麝的甘油三酯、极低密度脂蛋白存在显著差异(P<0.05)。雄麝的甘油三酯为0.32mmol/L,极低密度脂蛋白为0.14mmol/L;雌麝的为0.47mmol/L,0.21mmol/L;其他生理生化指标无显著差异。(2)健康林麝与患化脓病林麝的白细胞、淋巴细胞百分比、嗜中性粒细胞百分比存在极显著差异(P<0.01);健康林麝的白细胞数量为29.08×109个/L、淋巴细胞百分比为62.01%、嗜中性粒细胞百分比为34.05%;患化脓病林麝的为104.67×109个/L、50.87%、45.37%。健康林麝与患化脓病林麝之间白蛋白、球蛋白、天门冬氨酸氨基转移酶、乳酸脱氢酶、总胆固醇、肌酐、血糖存在显著差异(P<0.05),健康林麝的白蛋白为44.44g/L、球蛋白为33.6g/L、天门冬氨酸氨基转移酶为316.43U/L、乳酸脱氢酶为700.68U/L、总胆固醇为2.14mmol/L、肌酐为108.47μmol/L、血糖为7.29mmol/L;患化脓病林麝的为37.23g/L、47.45g/L、478U/L、840.75U/L、1.16mmol/L、85.52μmmol/L、5.04mmol/L。这些结果为养殖林麝化脓病的诊断提供了参考数据。     

圈养山魈繁殖行为的观察

2001 年1～9 月, 在成都动物园用所有事件取样法对人工饲养状态下7 只(5 ♀♀, 2 ♂♂) 山魈的繁殖行为进行了观察。结果表明, 山魈的繁殖没有明显的季节性, 一年四季均发情繁殖, 月经周期为30.55 ±0.77 d (N = 11) , 行经期2.38 ±0.13 d (N = 16) ; 交配行为均发生在白天, 交配持续时间为14.90 ±0.34 s (N = 246) , 具有明显的交配模式, 其中碟牙、爬跨、插入和抽动4 种行为在每次交配中都出现, 交配姿势仅有背腹式一种; 孕期为171.13 ±4.19 d (N = 8) , 产前不废食; 分娩都在夜间进行, 产程2～3 h ; 育幼期哺乳时间随幼仔长大逐渐减少。     

圈养长颈鹿线虫抗药性的初步检测

用体外虫卵孵化试验对成都动物园长颈鹿的消化道线虫抗药性进行了检测.检测药物包括丙硫咪唑、左旋咪唑和芬苯达唑3种药物,测得其虫卵孵化半数抑制量ED50分别为0.1303 μg/mL、0.3244 μg/mL、0.1488 μg/mL.测定结果表明长颈鹿消化道线虫对上述3种药物均有不同程度的抗药性.