| MG-132提高TNFR-Fc融合蛋白在CHO细胞中表达的研究 |
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| 引用本文： | 温家明,聂艳峰,梁翰章,黄雯茜,雷云,谢秋玲,裴运林,熊盛.MG-132提高TNFR-Fc融合蛋白在CHO细胞中表达的研究[J].中国生物工程杂志,2015,35(9):1-6. |
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| 作者姓名： | 温家明 聂艳峰 梁翰章 黄雯茜 雷云 谢秋玲 裴运林 熊盛 |
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| 作者单位： | 1 暨南大学药学院 生物医药研究院&基因药物国家工程中心 广州 510632;
2 广东丸美生物科技股份有限公司 广州 510530 |
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| 基金项目： | 国家重大新药创制科技重大专项(2012ZX09103301-033,2012ZX09202301-001),广东省战略性新兴产业核心技术攻关项目(2012A080800008),广东省重大科技专项(2012A080202014)资助项目 |
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| 摘 要： | 目的:在不影响细胞活力的前提下,通过抑制人肿瘤坏死因子受体-Fc(TNFR-Fc)融合蛋白的降解,提高其在中国仓鼠卵巢(CHO)细胞中的产量和质量。方法:通过在细胞培养过程中加入全蛋白质合成抑制剂Cycloheximide、溶酶体抑制剂Leupeptin、蛋白酶体抑制剂MG-132,验证TNFR-Fc融合蛋白在CHO细胞的降解途径;免疫印迹(Western blot)方法检测在细胞内TNFR-Fc融合蛋白的变化,酶联免疫吸附试验(ELISA)方法检测分泌表达的TNFR-Fc融合蛋白的含量。Protein A亲和层析纯化细胞培养液上清,高效液相色谱(HPLC)检测重组蛋白的纯度,并通过阻断肿瘤坏死因子α(TNFα)诱导的L929细胞毒作用来检测纯化的TNFR-Fc蛋白的活性。结果:TNFR-Fc在CHO细胞内,经泛素蛋白酶体途径降解,稳定表达TNFR-Fc的CHO细胞培养过程中添加50μmol/L MG-132,可以使TNFR-Fc融合蛋白的分泌表达量提高42.35%,纯化后,二聚体比例提高28.60%,并且纯化后目的蛋白的比活性也增加。结论:在不影响细胞活力、蛋白质生物学活性的前提下,添加蛋白酶体抑制剂MG-132提高TNFR-Fc融合蛋白在CHO细胞中的表达量,为进一步研究从抑制蛋白质降解途径来提高重组蛋白在CHO细胞中的表达量提供了现实依据。
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| 关 键 词： | MG-132 TNFR-Fc降解 CHO细胞 泛素化 提高表达 |
| 收稿时间： | 2015-03-11 |
MG-132 Improve the Production of TNFR-Fc Fusion Protein in CHO Cells |
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| WEN Jia-ming,NIE Yan-feng,LIANG Han-zhang,HUANG Wen-xi,LEI Yun,XIE Qiu-ling,PEI Yun-lin,XIONG Sheng.MG-132 Improve the Production of TNFR-Fc Fusion Protein in CHO Cells[J].China Biotechnology,2015,35(9):1-6. |
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| Authors: | WEN Jia-ming NIE Yan-feng LIANG Han-zhang HUANG Wen-xi LEI Yun XIE Qiu-ling PEI Yun-lin XIONG Sheng |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | MG-132 TNFR-Fc degradation CHO cell Ubiquitination Improve production |
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