人胚肝去组蛋白染色质抗原、甲胎蛋白及白蛋白在人肝癌和癌周组织中的定位关系

人胚肝去组蛋白染色质抗原(DHCAg)具有癌胚特异性,本文用免疫酶标法在肝癌连续切片上比较了DHCAg、甲胎蛋白(AFP)和白蛋白(ALB)彼此间的定位分布,得到的初步结果如下: 1.在肝癌标本中DHCAg和AFP无论在肝癌细胞、癌周细胞或幸存肝细胞中的分布有某种关系。提示DHCAg和AFP基因表达之间可能存在着某种联系。2.在DHCAg阳性的幸存肝细胞和癌周细胞中AFP和ALB通常同时表达,表明这二种细胞很可能是癌前期细胞。3.在DHCAg阳性的肝癌细胞中AFP阳性情况下ALB的合成明显下降,这就提示DHCAg和癌变后的某些特征相关。     

固相探针DNA圆点滤膜杂交法对大鼠肝和卵黄囊中甲胎蛋白及白蛋白基因表达的定性定量测定

甲胎蛋白和白蛋白是二个分子大小相近的血清蛋白,两者除在氨基酸及核苷酸顺序上有很高的同源性(分别为34％和50％)外,二级结构也很相似,表明它们在进化上有密切的关系.目前普遍认为它们来源于一个共同的祖先基因,并组成一个基因家族.但在发育过程中,它们的表达却很不相同.在哺乳动物的正常发育中,甲胎蛋白首先由卵黄囊,随后由胚肝合成.它的含量在胎儿血清中很高,临近出生时开始降低,出生后急剧下降,很快即达很低水平.成年动物的肝脏细胞仅合成很微量的甲胎     

人胚肝甲胎蛋白多聚核糖体的免疫沉淀分离法

作者用超离心法分离人胚肝的总polysome。通过免疫电镜的观察表明,总polysome 中不仅含有合成人AFP 的polysome,而且在AFP polysome 的新生肽链上已具有AFP 的免疫决定簇。用~(125)I 体外标记的总polysome,按Shapiro 法,Innis 法和Schütz 法进行免疫沉淀,来分离AFP polysome,所得产物的纯度约在30～40%之间。在进行免疫沉淀反应时,控制抗人AFP 抗体的用量是很重要的。使用较低量的抗体不仅可以提高产物的纯度,而且AFPpolysome 也沉淀得比较完全。     

人胚肝细胞核的体外转录系统和地塞米松对其转录的抑制作用

作者用改良的Schtz 法纯化了人胚肝细胞核,并测定了它们的内源转录活力的最适条件。使用去核糖核酸酶的正常兔γ-G 可使细胞核在3小时内稳定地利用内源酶转录RNA 而增加参入。在上述条件下,鹅膏蕈碱可抑制40～50%左右核的内源转录活力,表明上述系统可适用于mRNA 转录调控的研究。经地塞米松预处理后,人胚肝细胞核总的转录活力比对照低10～20%其中mRNA 被抑制了8.2～12.4%。作者讨论了地塞米松在调节“AFP 基因连锁群”中的作用。     

人体甲胎蛋白在麦胚无细胞系统中的生物合成

人及动物体内有些蛋白质,在胚胎中存在,而在成年期含量极低,当发生肿瘤时又大量产生。甲胎蛋白是这类蛋白之一种。正常人体血清中甲胎蛋白的含量极低,当体内产生原发性肝癌时,甲胎蛋白的水平可升高近百倍,甚至千倍以上。因此血清甲胎蛋白含量的测定,对原发性肝癌的早期发现和早期诊断具有重要的意义。我们和Ruoslahti比较了胚胎及肝癌来源的甲胎蛋白的物化性质,都证明二者相似。Gitlin用放射自显影技术证明人体甲胎蛋白是由印黄囊及肝细胞合成。原发性肝癌发生过程中肝癌细胞是重要的合成部位。但是甲胎蛋白的大量合成与肝癌发病机制的关系至今还很不清楚。深入研究其合成过程的调节控制机制,显然有其特殊的意义。而用体外无细胞系统深入研究蛋白质的合成过程比用整体或完整细胞更便于认识和分析。真核细胞的无细胞翻译系统过去较多利用     

免疫吸附亲和层析法提纯抗原、抗体——甲种胎儿蛋白的純化

亲和层析法是利用生物高分子化合物特有的功能专一性,使可逆地与其相对应的固相配基结合,而将生物高分子从其它杂质中分离出来的一种方法。目前已应用于蛋白质、酶、核酸、病毒、抗原和抗体等的提纯。把抗原或抗体用共价键联结到固相载体上,用以分离和纯化相应的抗体或抗原的方法称为免疫吸附法。例如,血清甲种胎儿蛋白(AFP)与白蛋白     

大鼠肝细胞核纯化、染色质分部及染色质非组蛋白双向凝胶电泳分析

本文使用改良的超离心法制备了大鼠肝细胞核,通过相差显微镜、电镜、转录活力及三种酶活力的测定,证实了所得细胞核较纯,其产率约为5％。使用羟基磷灰石(HAP)柱层析对染色质分部,并测定了各分部的紫外光谱。同时测定了核、染色质、染色质疏松结合非组蛋白(UP)、去up—染色质(UC)和HAP柱各分部的化学组成。对up和酚抽提法制得染色质紧密结合非组蛋白(NP)分别进行了双向凝胶电泳图谱分析。     

人胚肝细胞核的体外转录系统和地塞米松对其转录的抑制作用

作者用改良的Schütz法纯化了人胚肝细胞核,并测定了它们的内源转录活力的最适条件。使用去核糖核酸酶的正常兔γ-G可使细胞核在3小时内稳定地利用内源酶转录RNA而增加参入。在上述条件下,鹅膏蕈碱可抑制40～50%左右核的内源转录活力,表明上述系统可适用于mRNA转录调控的研究。经地塞米松预处理后,人胚肝细胞核总的转录活力比对照低10～20%其中mRNA被抑制了8.2～12.4%。作者讨论了地塞米松在调节“AFP基因连锁群”中的作用。     

人胚肝甲胎蛋白多聚核糖体的免疫沉淀分离法

作者用超离心法分离人胚肝的总polysome。通过免疫电镜的观察表明,总polysome中不仅含有合成人AFP的polysome,而且在AFP polysome的新生肽链上已具有AFP的免疫决定簇。用~(125)I体外标记的总polysome,按Shapiro法,Innis法和Schutz法进行免疫沉淀,来分离AFP polysome,所得产物的纯度约在30～40%之间。在进行免疫沉淀反应时,控制抗人AFP抗体的用量是很重要的。使用较低量的抗体不仅可以提高产物的纯度,而且AFPpolysome也沉淀得比较完全。