缺血后处理对肺缺血／再灌注损伤的保护作用及其机制

目的：探讨缺血后处理（聃）是否通过抑制P38丝裂原活化蛋白激酶（P38MAPK）活化来减轻再灌注损伤肺细胞的凋亡。方法：雄性SD大鼠40只,随机分成5组（n=8）,即对照组（C组）、肺缺血／再灌注组（I／R组）、肺缺血／再灌注＋缺血后处理组（IPO组）、缺血后处理＋溶剂对照组（D组）、缺血后处理＋SB203580组（SB组）。各组分别于再灌注2h留取左肺组织,检测肺组织湿／干重比（W／D）和总肺含水量（TLW）;光镜观察肺组织形态学结构改变并进行肺组织损伤定量评估（IQA）;原住末端标记法（TUNEL）检测肺细胞凋亡情况并计算凋亡指数（AI）;RT-PCR和免疫组化法测定Bax、Bcl-2基因和蛋白的表达。结果：与C组相比,I／R组W／D、TLW、IQA和AI均显著升高（P〈0．05,P〈0．01）,肺组织结构发生明显损伤;Bcl-2、Bcl-2／Bax基因及蛋白表达明显降低,Bax基因及蛋白表达明显升高（P〈0．05,P〈0．01）;IPO组、D组、SB组与I／R组相比,w／D、TLW、IQA和AI均显著降低（P〈0．05,P〈0．01）,肺组织结构损伤情况有所改善;Bcl-2、Bcl-2／Bax基因及蛋白表达明显升高,Bax基因及蛋白表达明显降低（P〈0．05,P〈0．01）;D组与IPO组比较各项指标均无明显差异（均P〉0．05）;SB组与IPO组相比,肺组织W／D、TLW、IQA和AI均显著降低（P〈0．05,P〈0．01）,肺组织结构未见明显损伤;Bcl-2、Bcl-2／Bax基因及蛋白表达明显升高,Bax基因及蛋白表达明显降低（P〈0．05,P〈0．01）。结论：I／R通过激活P38MAPK导致大鼠肺泡结构严重破坏,肺内细胞大量凋亡;IPO可能是通过抑制P38MAPK通路的激活而减轻L／R损伤。     

血必净注射液对缺氧／复氧大鼠心肌TLR4-NF-KB-IL-1β通路的影响

目的：探讨血必净注射液（XBJI）对缺氧／复氧大鼠心肌TLR4-NF-KB-IL-1β通路的抑制作用。方法：健康雄性sD大鼠36只,体重（280±30）g,随机分为6组（n=6）：正常组（N组）、平衡灌注组（BP组）、模型组（M组）、小剂量xBⅡ组（xBJII组）、中剂量XBJI组（XBJIM组）、大剂量XBJI组（XBJIH组）。通过langendorff离体心脏灌流装置,建立缺氧／复氧大鼠心肌炎性反应模型。用ELISA方法检测心肌组织中白介素113（IL-1β）的浓度;Westernblot检测心肌组织中核因子一xt3p65（NF-xB065）蛋白、T0Ⅱ样受体4（1184）蛋白的表达;RT-PCR检测心肌组织中NF-td3p65mR—NA及TLR4mRNA的表达;光镜观察其心肌光学显微结构的改变。结果：与M组比较,XBJII．组、XBJIM组、XBJIn组心肌IL-113的浓度、NF-KB-065及TLR4蛋白、NF_出p65及TLR4mRNA表达量有不同程度的下降,均以XBJIM组下降最为明显（P〈0．05,P〈0．01）;M组心肌结构损伤严重,XBJI处理后上述变化均得到改善,以XBJIM最为明显。结论：不同剂量XBJI可通过抑制TLR4-NF-KB-IL-1β信号转导通路减轻缺氧／复氧大鼠心肌的炎性反应,以4ml／100rnl的XBJI疗效最佳。     

p38MAPK在低氧高二氧化碳肺动脉平滑肌中的表达及三七皂苷单体Rb_1的干预

该实验旨在探讨三七皂苷单体Rb1对低氧高二氧化碳性肺动脉收缩的作用及其与p38MAPK信号通路的关系。原代培养雄性SD大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs),取第2~5代细胞,随机分为五组:常氧组(N组)、低氧高二氧化碳(1%O2,6%CO2)组(H组)、低氧高二氧化碳+8 mg/m LRb1组(RbL组)、低氧高二氧化碳+40 mg/m L Rb1组(RbM组)、低氧高二氧化碳+100 mg/m L Rb1组(RbH组)。孵育24 h后收集细胞,分别采用免疫印迹法测定p38MAPK磷酸化蛋白的表达水平,半定量逆转录–聚合酶链反应技术检测p38MAPK基因的表达水平。p-p38MAPK蛋白在N组表达弱阳性;较之H组,Rb1干预组(RbL、RbM、RbH组)表达均不同程度减弱,以RbM组最为显著,差异有统计学意义(P0.01);p38MAPK m RNA在N组表达较弱;与H组相比,RbL、RbM和RbH组中p38MAPK m RNA表达均不同程度下降,以RbM组最为显著(P0.01)。上述结果表明,p38MAPK信号通路可能介导大鼠低氧高二氧化碳性肺动脉收缩;三七皂苷单体Rb1可能通过抑制p38MAPK信号通路的表达而减轻低氧高二氧化碳性肺动脉收缩。     

ERK1/2通路在低氧上调大鼠PASMCs钙激活性氯离子通道表达的作用

目的：探讨钙激活性氯离子通道（CLCA2）在大鼠低氧性肺动脉平滑肌细胞（PASMCs）中mRNA和蛋白表达的变化及其与ERK1/2信号通路的关系。方法：PASMCs随机分为：常氧组（N组）,低氧组（H组）,DMSO对照组（D组）,U0126干预组（U组）,Staurosporine aglycone干预组（SA组）,采用免疫印迹法检测CLCA2蛋白的表达;选用半定量逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）技术测定CLCA2 mRNA水平的表达。结果：PASMCs中CLCA2 mRNA和蛋白的表达量,H组较N组明显上调（P<0.01）;U组较D组明显上调（P<0.01）;SA组较D组mRNA的表达显著下调（P<0.01）,蛋白的表达轻微下调。结论：低氧可上调CLCA2中mRNA和蛋白在PASMCs的表达;ERK1/2通路激活剂-Staurosporine aglycone能下调CLCA2在PASMCs中mRNA和蛋白的表达量;ERK1/2通路抑制剂-U0126可上调CLCA2在PASMCs中mRNA和蛋白的表达量。     

尼氟灭酸在大鼠低氧高二氧化碳性肺血管收缩中的作用

目的：探讨氯离子通道阻断剂一尼氟灭酸（NFA）在大鼠低氧高二氧化碳性肺血管收缩（HHPV）中的作用。方法：采用大鼠HHPV模型,二、三级动脉环分别随机分4组（n=8）：常氧组（N组）、低氧高二氧化碳组（H组）、DMSO组（HD组）、尼氟灭酸组（NFA组）。在急性低氧高二氧化碳介质中,采用NFA分别孵育肺二、三级肺动脉环,按照低氧高二氧化碳反应性测定的方法测定其二、三级肺动脉血管环张力的变化,并观察NFA对HHPV的影响。结果：①H组二、三级肺动脉均呈现双向性收缩变化（I期快速收缩、快速舒张;II期持续性收缩）与N组相比有显著性差异（P〈0．05,P〈0．01）;②NFA组二、三级肺动脉环的低氧高二氧化碳性血管收缩作用明显减弱,尤其是Ⅱ期的持续收缩,与HD组相比有显著性差异（P〈0．05,P〈0．01）。结论：氯离子通道阻断剂一尼氟灭酸可减轻大鼠二、三级肺动脉环的张力变化率（尤其是Ⅱ期的持续性收缩）,从而发挥拮抗HHPV的作用。     

格列苯脲调节大鼠低氧高二氧化碳性肺血管收缩时ERK1/2信号的作用

目的：探究ATP敏感性钾离子通道在低氧高二氧化碳性肺血管收缩（HHPV）中的作用及与细胞外信号调节激酶1/2（ERl（1/2）信号通路的关系。方法：制备正常SD大鼠离体三级肺动脉环,建立大鼠离体肺动脉环灌流的模型,用格列本脲（Cly）、ely＋U0126（ERK1/2抑制剂）联合孵育三级肺动脉环,按照低氧高二氧化碳反应性测定方法测定所有血管环的张力值。结果：①常氧状态下,三级肺动脉环的张力值无明显变化;②急性低氧高二氧化碳条件下,三级肺动脉环呈现双向性的收缩（与常氧状态下值相比,P〈0．05,P〈0．01）;③经Gly孵育的三级肺动脉环,其Ⅱ期收缩幅度增强（与低氧高二氧化碳状态下值相比,P〈0．05,P〈0．01）;④急性低氧高二氧化碳条件下,U0126能使Gly所致的三级肺动脉环Ⅱ期持续收缩幅度显著降低（与低氧高二氧化碳状态下值相比,P〈0．05,P〈0．01）,I期收缩和I期舒张均没有明显变化（P均〉0．05）。结论：ATP敏感性钾离子通道（KAlP）阻断剂-Gly可能通过活化ERK1/2信号通路介导了大鼠HHPV的发生。     

MAPK信号通路对大鼠低氧性PASMCs增殖、凋亡的调控

目的：研究低氧性大鼠肺动脉平滑肌细胞（PASMC）的增殖、凋亡与丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）关系。方法：用组织酶消化法获取肺动脉平滑肌细胞（PASMCs）,进行原代培养;采用普通光学显微镜和免疫荧光染色法,分别鉴定PASMCs;选择处于对数生长期的4~6代PASMCs,随机分为7组进行造模：常氧对照组（N）、低氧组（H）、DM-SO组（D）、U0126组（U）、SB203580组（S）、Anisomycin组（A）、Staurosporine Aglycone组（SA）;N组加入10%培养基后置于常氧培养箱中,其它各组分别加入含相应药物的10%培养基后置于低氧培养箱（3% O₂,5% CO₂,37℃）中,造模时间均为48 h。CCK-8法检测各组PASMCs增殖情况;TUNEL法测定各组PASMCs凋亡情况。结果：与N组相比,H组PASMCs的OD值显著上调（0.990 ±0.041 vs 1.143 ±0.033,P < 0.01）,凋亡指数没有明显变化（4.913 ±0.451 vs 5.452 ±0.557,P > 0.05）;与H组相比,D组PASMCs的OD值和凋亡指数均无显著变化（1.143 ±0.033 vs 1.142 ±0.049,5.452 ±0.557 vs 5.402 ±0.651,均P > 0.05）;U组PASMCs的OD值下降,凋亡指数升高（1.143 ±0.033 vs 0.985 ±0.078,5.452 ±0.557 vs 10.145 ±2.545,均P < 0.01）;S组PASMCs OD值上调,凋亡指数明显下调（1.143 ±0.033 vs 1.295 ±0.039,5.452 ±0.557 vs 3.093 ±0.409,均P < 0.01）;A组PASMCs的OD值下降,凋亡指数升高（1.143 ±0.033 vs 0.347 ±0.067,5.452 ±0.557 vs 25.753 ±1.262,均P < 0.01）;SA组PASMCs OD值上调,凋亡指数下调（1.143 ±0.033 vs 1.685 ±0.100,5.452 ±0.557 vs 1.700 ±0.095,均P < 0.01）。结论：低氧对PASMCs增殖和凋亡的调控与MAPK信号通路有关。     

川芎嗪注射液对慢性阻塞性肺疾病患者肺动脉高压的作用及其机制

目的：观察川芎嗪注射液对慢性阻塞性肺疾病（COPD）患者肺动脉高压的临床作用并探讨其可能机制。方法：将采集的确诊为COPD的22例患者随机分为2组（n=11）： 常规治疗组和川芎嗪治疗组,并随机抽取门诊体检正常者11例作为正常对照组。常规治疗组予以卧床休息、低流量吸氧、支气管舒张剂、糖皮质激素及抗生素等治疗,川芎嗪治疗组在常规治疗基础上加用川芎嗪注射液（60 mg/d静脉点滴）,正常对照组不予任何治疗措施,治疗2周后检测3组的肺功能、动脉血气分析及肺动脉压,用敏感硫电极法检测血浆硫化氢（H₂S）的浓度。结果：①经过2周治疗后,常规治疗组和川芎嗪治疗组肺功能、动脉血气分析、肺动脉压等各项指标均比治疗前有明显改善,但川芎嗪治疗组优于常规治疗组（P<0.05）;②川芎嗪组综合治疗后血浆H₂S浓度明显高于治疗前和常规治疗组 （P<0.01）。结论：川芎嗪注射液可能通过升高体内H₂S浓度,有效地改善COPD患者肺功能状态。