核黄素产生菌阿舒假囊酵母(Eremothecium ashbyii)抗反馈抑制突变株的选育

在调查阿舒假囊酵母(Eremothecium ashbyii)营养要求的基础上,设计了适合该菌生长的合成培养基,在合成培养基上诱变筛选得到了数株抗嘌呤拮抗物8-AG的突变株。选择其中三株U_(95-1)、U_(95-2)和U_(95-3)进行传代和摇瓶发酵试验,U_(95-3)的核黄素发酵单位低于出发菌,未经传代的U_(95-1)、U_(95-2)比出发菌株的发酵水平分别提高15.5％和9.8％,经5～10代传接,其产核黄素的遗传性状稳定。该研究表明,从代谢控制角度通过减轻核黄素合成途径中重要调节酶的反馈抑制对提高E. ashbyii的核黄素产量和稳定性是可行的,为该菌的菌种改良提供了一条遗传育种途径。     

TurboFect介导骨形态发生蛋白2 转染CHO 细胞的研究

目的:构建真核表达载体p IRES-EGFP-BMP-2,通过Turbo Fect转染得到表达BMP-2蛋白的CHO细胞系。方法:利用逆转录PCR方法扩增获得人的BMP-2基因c DNA,克隆入p MD18-T载体,经PCR、酶切和基因测序分析等方法鉴定重组质粒;将BMP-2连入p IRES-EGFP真核表达载体中,经限制性酶切和PCR扩增鉴定重组质粒。以壳聚糖和Turbo Fect分别作为基因载体转染CHO细胞,荧光显微镜检测分析转染结果;G418筛选富集转染阳性细胞。结果:成功的克隆得到了BMP-2基因,酶切鉴定成功构建了p IRES-EGFP-BMP-2质粒。与壳聚糖组相比,Turbo Fect用量为1:1时,细胞阳性率为(31.92±1.31)%,高于壳聚糖的细胞阳性率(6.33±1.53)%。目的基因与Turbo Fect比例为1:2时转染效率为(42.90±1.10)%高于1:1的(28.59±2.38)%和1:3的(37.52±2.14)%。细胞密度调节到5×103 cells/cm2阳性细胞率可达到(44.43±3.23)%。荧光检测可见荧光阳性细胞得到稳定传代。Western Blot检测可见BMP-2蛋白表达。结论:Turbo Fect成功的介导了p IRES-EGFP-BMP-2载体转染CHO细胞,建立了稳定表达BMP-2和EGFP的CHO细胞株。     

中药掺假的危害

目前中药饮片掺假现象极为严重,例如,麝香中加入鸡蛋黄、奶渣、动物脏器;元胡里掺入水半夏;柴胡里掺入北豆根等等。中药掺假现象除影响药品本身质量外,更重要的是影响中药的疗效及配伍而产生不良后果。     

mhbR和mhbT基因移码突变对3-羟基苯甲酸代谢的影响

Klebsiella pneumoniae M5a1菌株能以3-羟基苯甲酸作为唯一碳源和能源生长,编码分解代谢3-羟基苯甲酸的基因被克隆至-8kb的DNA片段上(pBSI质粒),含有该质粒的大肠杆菌获得了以3-羟基苯甲酸作为唯一碳源和能源生长的能力。经测序并与GenBank中的已知基因产物进行氨基酸同源性比较后,发现其中的mhbR与转录调节基因和mhbT与底物转运基因具有较高同源性,推断可能具有相应的功能。含有mhbR的移码突变子或mhbT的移码突变子的大肠杆菌在底物3-羟基苯甲酸中培养时,其生长速度和代谢速度都较野生型明显缓慢。     

菱斑巧瓢虫替代饲料的研究

瓢虫成虫饥饿24h后,通过室内对菱斑巧瓢虫Oenopia conglobata (Linnaeus)成虫饲喂24种人工饲料,研究菱斑巧瓢虫的取食行为;以桃蚜(MP)作对照,选择羊肝+蔗糖(SLS)、猪肝+蔗糖(PLS)、黄粉虫蛹+蔗糖(TMPS)3种饲料研究瓢虫产卵量;以白蛾周氏啮小蜂蛹(CCP)、SLS、PLS和MP对瓢虫成虫进行交叉饲喂试验,每周期7d,研究饥饿后恢复产卵时间和产卵量的差异;最后以CCP和MP饲喂瓢虫幼虫,观察其发育历期。结果表明:在羊肝、鸡心、菜蛾幼虫、鸡肝和黄粉虫蛹组中,无论是否添加蔗糖,瓢虫取食情况较好。瓢虫成虫饲喂SLS、TMPS、PLS及MP后,MP组的14d单雌产卵量为166.25粒、SLS组为18.15粒、PLS为9.65粒和TMPS组3.90粒,瓢虫恢复产卵的时间也有差异,MP组仅需要1d,而其它组需要3d至至5d。交叉饲喂试验发现,CCP组产卵量(40.67～46.87粒/雌)明显高于常用饲料-PLS组(4.53～7.13粒/雌),但与MP组(61.80～82.07粒/雌)仍有一定差距。利用CCP饲喂瓢虫幼虫,可以完成整个发育历期,但是存活率较低,1～4龄幼虫各龄期内存活率在63.64%～87.50%之间,并且发育历期(21.23d)明显长于饲喂MP组(15.71d)。     

联苯降解细菌的分离及其降解质粒某些特性的研究

:通过选择性富集培养 ,从芳烃污染的土壤中分离得到 16株以联苯作唯一碳源生长的细菌。初步鉴定 ,3株均为假单孢菌属(Psedomonas) 。都含有大小 2个质粒。质粒不稳定 ,易丢失。经苯甲酸钠和口丫啶橙的消除实验 ,结果表明 ,随着质粒丢失 ,菌株利用Bp生长的能力也丧失。酶活性分析表明 ,菌株只有邻苯二酚 2 ,3—氧化酶活性 ,没有邻苯二酚1 ,2—氧化酶活性。菌株对联苯的降解率 :bp2 菌为 93%、bp2 3菌为 81%、bp2 4 菌为 99%。降解过程中产生λmax331nm和λmax4 34nm2种中间代谢物。     

核黄素产生菌阿舒假囊酵母(Eremothecium ashbyii)抗反馈抑制突变株的选育

在调查阿舒假囊酵母(Eremothecium ashbyii)营养要求的基础上,设计了适合该菌生长的合成培养基,在合成培养基上诱变筛选得到了数株抗嘌呤拮抗物8-AG的突变株。选择其中三株U_(95-1)、U_(95-2)和U_(95-3)进行传代和摇瓶发酵试验,U_(95-3)的核黄素发酵单位低于出发菌,未经传代的U_(95-1)、U_(95-2)比出发菌株的发酵水平分别提高15.5％和9.8％,经5～10代传接,其产核黄素的遗传性状稳定。该研究表明,从代谢控制角度通过减轻核黄素合成途径中重要调节酶的反馈抑制对提高E. ashbyii的核黄素产量和稳定性是可行的,为该菌的菌种改良提供了一条遗传育种途径。