红花水提取液对小鼠系统性硬皮病的防治作用及其机制*

目的:研究红花水提取液对系统性硬皮病(SSc)模型小鼠的防治作用及相关机制研究。方法:60只 BALB /C小鼠随机分为对照组、模型组、强的松组、红花低、中、高剂量组,每组10只。对照组背部注射生理盐水,其余5组均背部皮下注射100 μl浓度为 200 μg /ml的注射用盐酸博来霉素,每天1次,连续注射28 d,制备SSc模型;造模同时对照组和模型组给予生理盐水10 ml/kg灌胃,强的松组给予强的松溶液4.5 mg/kg (10 ml/kg)灌胃,红花低、中、高剂量组分别给予红花1.5、3、6 g/kg (10 ml/kg)灌胃,各组均连续灌胃28 d。给药28 d后,取各组小鼠背部注射博来霉素区皮肤组织切片测量真皮厚度,采用水解法检测皮肤组织羟脯氨酸(HYP)含量;采用ELISA法检测皮肤组织结缔组织生长因子(CTGF)、转化生长因子-β(TGF-β)含量及血清白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-17(IL-17)水平。结果:与对照组比较,模型组皮肤真皮厚度,皮肤组织CTGF、TGF-β、HYP含量及血清 IL-6、IL-17 水平明显升高(P＜0.05);与模型组比较,强的松组、红花低、中、高剂量组皮肤真皮厚度,皮肤组织 CTGF、TGF-β、HYP含量及血清 IL-6、IL-17水平明显降低(P＜0.05)。结论:红花水提取液可改善SSc小鼠皮肤状况(或真皮厚度),其作用机制可能与减轻免疫炎症反应有关。     

血必净注射液对缺氧/复氧大鼠心肌功能与结构的影响

目的：探讨不同剂量的血必净注射液对缺氧/复氧大鼠心肌功能的保护作用。方法：采用Langendorff方法制备大鼠离体心脏缺氧/复氧模型。130只雄性SD大鼠随机分为对照组（sham组）,缺氧/复氧组（H/R组）,低、中、高剂量血必净组（XBJ_L、XBJ_M、XBJ_H组）,除对照组外,其他四组按复氧不同时相（复氧0.5 h、1 h、2 h）又分别分为3个亚组（n=10）。对照组在平衡灌注20 min时纪录左室发展压（LVDP）、左心室发展压最大上升/下降速率（±dp/dt_max）、左心室内压（LVP）、心率（HR）的值, ELISA检测心肌中肌酸激酶同工酶（CK-MB）的浓度,光镜下观察心肌组织结构的改变;其余各组平衡灌注20 min后,灌注ThomasⅡ停搏液使心脏完全停搏30 min之后复灌K-H液使其心脏复跳,连续记录LVDP、±dp/dt_max、LVP、HR在复氧不同时间点的动态变化,ELISA检测各组复氧不同时间点心肌中CK-MB的浓度,光镜下观察各组复氧不同时间点心肌组织结构的改变。结果：与sham组相比,其余各组LVDP、±dp/dt_max、LVP值均降低（P<0.05）,心肌中CK-MB浓度上升（P<0.05）,心肌组织结构发生异常改变,随着复氧时间延长,以上指标异常变化逐渐加剧;在复氧0.5 h、1 h、2 h,各剂量血必净组LVDP、±dp/dt_max、LVP的值均高于H/R组对应时间点的值（P<0.05）,心肌中CK-MB浓度均低于H/R组,心肌组织结构异常变化减轻,以中剂量改善效果最佳（P<0.05）。结论：血必净注射液能够有效改善缺氧/复氧大鼠心肌的功能及形态学结构,以中剂量血必净（4 ml/100 ml）效果最佳。     

右美托咪定对大鼠I/R损伤肺组织TLR4表达及保护作用的影响

目的：探讨右美托嘧啶对大鼠再灌注损伤肺组织Toll样受体素4（TLR4）表达的调控,并分析其对肺保护作用机制。方法：采用大鼠在体左侧肺缺血/再灌注（I/R）模型,50只健康雄性成年SD大鼠随机分为5组（n=10）：对照组（Sham组）、缺血/再灌注组（I/R组）、右美托咪定组（Dex组）、阿替美唑组（Atip组）、右美托咪定+阿替美唑组（Dex+Atip组）,实验结束后处死大鼠,留取左肺,检测肺湿干重比（W/D）和总肺水含量（TLW）;光镜下观察肺组织形态结构变化;PCR检测肺组织TLR4 mRNA表达;Western blot检测肺组织TLR4的蛋白表达。结果：与Sham组相比,其余各组W/D和TLW明显升高（P<0.05,P<0.01）,TLR4 mRNA和蛋白表达量上升（P<0.01）,光镜显示肺组织结构出现明显损伤性变化;与I/R组相比,Dex组W/D和TLW下降（P<0.05,P<0.01）,TLR4 mRNA和蛋白表达量降低（P<0.01）,光镜下肺组织损伤减轻;与Dex组比较,Dex+Atip组W/D和TLW明显升高（P<0.05,P<0.01）,TLR4 mRNA和蛋白表达量上升（P<0.01）,光镜肺组织结构损伤严重;I/R组、Atip组、Dex+Atip组两两比较,以上各指标均无统计学差异（P > 0.05）。结论：I/R可引起大鼠肺组织TLR4表达上调和肺组织损伤;右美托咪啶可减轻肺I/R损伤,抑制TLR4表达,这种作用与α2-肾上腺素能受体有关。     

p38MAPK在低氧高二氧化碳肺动脉平滑肌中的表达及三七皂苷单体Rb_1的干预

该实验旨在探讨三七皂苷单体Rb1对低氧高二氧化碳性肺动脉收缩的作用及其与p38MAPK信号通路的关系。原代培养雄性SD大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs),取第2~5代细胞,随机分为五组:常氧组(N组)、低氧高二氧化碳(1%O2,6%CO2)组(H组)、低氧高二氧化碳+8 mg/m LRb1组(RbL组)、低氧高二氧化碳+40 mg/m L Rb1组(RbM组)、低氧高二氧化碳+100 mg/m L Rb1组(RbH组)。孵育24 h后收集细胞,分别采用免疫印迹法测定p38MAPK磷酸化蛋白的表达水平,半定量逆转录–聚合酶链反应技术检测p38MAPK基因的表达水平。p-p38MAPK蛋白在N组表达弱阳性;较之H组,Rb1干预组(RbL、RbM、RbH组)表达均不同程度减弱,以RbM组最为显著,差异有统计学意义(P0.01);p38MAPK m RNA在N组表达较弱;与H组相比,RbL、RbM和RbH组中p38MAPK m RNA表达均不同程度下降,以RbM组最为显著(P0.01)。上述结果表明,p38MAPK信号通路可能介导大鼠低氧高二氧化碳性肺动脉收缩;三七皂苷单体Rb1可能通过抑制p38MAPK信号通路的表达而减轻低氧高二氧化碳性肺动脉收缩。     

促红细胞生成素通过JNK通路对再灌注损伤肺细胞凋亡的影响

目的：探讨促红细胞生成素（EPO）后处理是否通过抑制C-Jun氨基末端激酶（JNK）活化来减轻再灌注损伤肺细胞的凋亡。方法：雄性SD大鼠40只,随机分成5组（n=8）：对照组（C组）、肺缺血/再灌注组（I/R组）、促红细胞生成素干预组（EPO组）、促红细胞生成素+溶剂对照组（P组）、促红细胞生成素+SP600125组（SP组）。各组分别于再灌注2 h留取左肺组织,电镜检测超微结构损伤;免疫组化法测定Bax、Bcl-2蛋白的表达。结果：与C组相比,I/R组肺组织超微结构损伤明显,Bcl-2蛋白表达、Bcl-2/Bax比值明显降低,Bax蛋白表达明显升高（P<0.01）;EPO组、P组、SP组与I/R组相比,组织损伤有所减轻,Bcl-2蛋白表达、Bcl-2/Bax比值明显升高,Bax蛋白表达明显降低（P<0.01）;SP组与EPO组相比,组织损伤明显减轻,Bcl-2蛋白表达、Bcl-2/Bax比值明显升高,Bax蛋白表达明显降低（P<0.01）。结论：I/R通过激活JNK导致大鼠肺泡结构严重破坏,肺内细胞大量凋亡;EPO可通过抑制JNK的激活而减轻I/R损伤。     

右美托咪定对肺缺血/再灌注损伤小鼠内质网应激相关分子Caspase-12表达的影响

目的：探讨右美托咪定（DEX）对肺缺血/再灌注（I/R）损伤小鼠内质网应激（ERS）相关分子天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-12（Caspase-12）表达的影响。方法：选用C57BL/6J小鼠复制在体左肺原位I/R损伤模型。随机将40只小鼠分为4组（n=10）：假手术组（sham组）,I/R损伤组（I/R组）,生理盐水对照组（NS组）,右美托咪定干预缺血/再灌注组（DEX组）。DEX组在夹闭小鼠左肺门30 min前经腹腔注射DEX 25 μg/kg,NS组为用同DEX组等体积的生理盐水替代DEX,其余操作同DEX组。3 h肺再灌注结束后,留取左肺。测定肺组织湿/干重比（W/D）及总肺含水量（TLW）,光镜观察肺组织形态学改变,对肺组织进行损伤评估（IQA）。原位末端标记（TUNEL）法检测组织细胞凋亡指数（AI）,蛋白免疫印迹法（Western blot）和逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）分别检测Caspase-12、葡萄糖调节蛋白78（grp78）蛋白和mRNA表达水平。结果：与sham组比,I/R组和NS组肺W/D、TLW、IQA、AI均明显升高（P<0.01）,肺组织形态结构破坏明显,Caspase-12、grp78蛋白和mRNA表达量增加（P<0.01）;I/R组与NS组相比,两组Caspase-12、grp78蛋白和mRNA表达量无明显差异（P>0.05）。DEX组与I/R组比,W/D、TLW、IQA和AI均有下降（P<0.01或P<0.05）,肺组织形态学改变明显减轻,Caspase-12和grp78蛋白和mRNA表达量下降（P<0.01）。结论：DEX可有效缓解小鼠肺缺血/再灌注性损伤,其机制可能与其对抗ERS中Caspase-12引起的细胞凋亡有关。     

siRNA沉默过度内质网应激下DⅨ基因在缺血／再灌注肺损伤中的作用

目的：探讨siRNA沉默过度内质网应激（ERS）下C．Jun氨基末端激酶（州K）通路在缺血／再灌注肺凋亡中的作用。方法：采用C57BIM6J小鼠左侧肺原位缺血／再灌注（IVR）损伤模型。实验随机分为7组（／7,=10）,包括假手术组（Sham组）,缺．tk／再灌注组（I／R组）,PBS＋Lipofectamine2000TM转染试剂组（VR＋PBS＋Lipo组）,阴性对照组（VR＋SCR组）,JNK-siRNA~g（VR＋siRNAJNl（1组、I／R＋siRNAJ眦组、I／R＋si时忱JNl。组）。各组实验结束后处死小鼠,留取左肺,分别检测肺湿干重比（W／D）和总肺水含量（TLW）;光镜观察肺组织形态结构变化,并进行肺组织损伤评估（IQA）;RT-PCR、检测JNK和葡萄糖调节蛋白78（GRP78）的基因表达;Westernblot检测磷酸化JNK（p-JNK）和GRP78的蛋白表达;原位缺口末端标记法（TUNEL法）检测肺细胞凋亡指数（AU。结果：与Sham组相比,I／R＋PBS＋Lipo组和SCR组各组W／D、’ILw、IQA、JNK与GRP78mRNA和p-JNK、GRP78蛋白质表达量及AJ均明显升高（P〈0．01）,光镜显示肺组织结构出现明显损伤性变化,且各组两两比较,上述各指标均无统计学差异;与I／R＋PBS＋Lipo组和SCR组相比,JNK-siRNA各组GRP78表达水平无明显变化,余各指标均降低（P〈0．05,P〈0．01）且肺组织损伤减轻。结论：I／R引起肺组织细胞发生过度的ERS,并通过JNK通路引起细胞凋亡,损伤肺组织。     

益气活血通络解毒方对小鼠肺缺血/再灌注损伤的作用及其机制

目的：探讨益气活血通络解毒方（YHTJF）对小鼠的肺部缺血/再灌注（I/R）损伤,及对I/R引起的氧化应激反应的作用。方法：成年雄性10~12周龄C57BL/6J小鼠70只,体重（21~25） g,采用在体左肺门夹闭法复制缺血/再灌注损伤模型。随机分为7组：正常对照组（C）,羧甲基纤维素钠carboxyl methyl cellulose-Na（CMC-Na）+正常对照组（CC）,羧甲基纤维素钠+假手术组（CS）,羧甲基纤维素钠+I/R模型组（CIR）,羧甲基纤维素钠+YHTJF低、中、高浓度干预组（CYL、CYM、CYH）。CN、CS、CIR组术前连续7 d腹腔注射CMC溶液,CYL、CYM、CYH组术前连续7d腹腔注射低、中、高浓度的YHTJF溶液。术毕,取左肺测定肺组织干湿比（W/D）及总肺含水量（TLW）,行肺组织损伤评估（IQA）,光镜观察肺组织形态学结构改变。TUNEL测组织细胞凋亡指数（AI）。检测血清超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、髓过氧化物酶（MPO）。结果：相比C组,CC组和CS组所有检测指标均无明显差异,CIR组的W/D、TLW、IQA、AI明显升高（P < 0.01）,肺组织形态学破坏显著;MDA含量、MPO活力明显升高,SOD活性显著降低。与CIR组比较,CYL组、CYM组、CYH组W/D、TLW、IQA、AI的表达均明显下降（P < 0.01）,组织损伤明显减轻,CYM组各项指标数值改善最明显,组织损伤最轻;3个用药组的MDA含量、MPO活力明显下降,SOD活性显著升高,其中中剂量用药组氧化应激指标变化最突出。结论：YHTJF可有效减轻小鼠缺血/再灌注性肺损伤,以中剂量效果为最佳,其机制可能与其抑制体内氧化应激反应、减轻肺组织细胞凋亡有关。