SPR生物传感器研究缺乏3′→5′核酸外切酶活性的DNA聚合酶对DNA的分子识别功能

Taq聚合酶 (Taq pol)、失去核酸酶结构域的鼠白血病逆转录酶 (MMLV RT－) 和人源的聚合酶β(pol β) 缺少3′→5′外切核酸酶活性. 利用表面等离子激元共振 (SPR) 生物传感器,研究了Taq pol与引物末端完全匹配和含有1、2、3个错配碱基的DNA 模板-引物 (T-P) 的结合动力学,并分析比较了在“正确”或“错误”dNMP环境中Taq pol和引物末端完全匹配的DNA T-P的结合. 实验结果表明,随着引物末端错配碱基逐个增加,Taq pol和DNA的结合亲和力呈下降趋势,说明增强和引物末端完全匹配的DNA T-P的亲和力是Taq pol选择正确配对碱基的途径之一. 在 “错误”的dNMP环境中, Taq pol与DNA T-P的结合动力学能够用简单的1∶1 Langmuir模型进行拟合,但是MMLV RT－与DNA T-P的结合动力学可能存在构象变化. 而在“正确”的dNMP环境中,Taq pol或MMLV RT－与DNA T-P的结合符合构象变化模型,而且亲和力常数分别是无dNMP时的20倍和64倍,说明“正确”的dNMP诱导酶 (Taq pol或MMLV RT－) - DNA复合物发生构象变化,大大增强了酶-DNA复合物结合的紧密程度. 在存在大量dNMP的环境中, pol β与DNA T-P的结合动力学明显与缺乏dNMP时相异, pol β和DNA的亲和力显著增强.     

家兔骨骼染色透明标本制作法的介绍

1．1 材料的选择 可取用未足月或足月胎兔、幼免标本,亦可取用成兔标本。但使用幼兔标本最理想。     

深圳地区结核分枝杆菌耐利福平株rpoB基因突变分布

目的:调查深圳地区结核分枝杆菌耐利福平(RFP)株rpoB基因突变的分布情况,建立结核分枝杆菌耐药基因快速检测的方法.方法:对55株结核分枝杆菌临床分离株的rpoB基因280个碱基(包括其核心区75个碱基)应用PCR-直接测序法(PCR-DS)测定序列,其中耐利福平株51株,敏感株4株.结果:4株敏感株无突变,92.2%(47/51)耐利福平临床分离株存在rpoB基因突变.基因突变导致531位氨基酸突变率为41.2%(21/51);导致526位氨基酸突变率为29.4%(15/51);导致516位氨基酸突变率为13.7%(7/51).联合突变发生率为2.0%(1/51).未检测到发生缺失或插入碱基突变的菌株.结论:深圳地区结核分枝杆菌耐利福平株发生rpoB基因突变最常见的是531位丝氨酸、526位组氨酸和516位天冬氨酸的基因突变,三者突变率之和为84.3%(43/51).PCR-DS方法可快速测定结核分枝杆菌RFP耐药基因突变.     

一种葡聚糖芯片的再生方法、表征及其应用*

表面等离子体共振（surface plasmon resonance, SPR）生物传感器,作为一种适时快捷,无需标记的生物分子相互作用研究工具,已广泛应用于生物化学分析与研究。羧甲基化葡聚糖修饰的CM5传感芯片是Biacore 系列仪器应用最为普遍的核心部件,目前CM5芯片主要从法玛西亚公司购买,价格昂贵,且一旦共价交联的受体分子失活,就不能重复利用。阐述了一种简便、低成本、用于SPR生物传感器的葡聚糖修饰金膜芯片的再生方法及其表征和应用。用此方法再生的芯片能被循环伏安法和原子力显微镜很好地表征,并成功地用于抗前列腺特异性抗原(prostate-specific antigen,PSA)固定和PSA检测, 同时测定了PSA与其抗体之间的动力学和亲和常数。