SPR生物传感器研究缺乏3′→5′核酸外切酶活性的DNA聚合酶对DNA的分子识别功能

Taq聚合酶 (Taq pol)、失去核酸酶结构域的鼠白血病逆转录酶 (MMLV RT－) 和人源的聚合酶β(pol β) 缺少3′→5′外切核酸酶活性. 利用表面等离子激元共振 (SPR) 生物传感器,研究了Taq pol与引物末端完全匹配和含有1、2、3个错配碱基的DNA 模板-引物 (T-P) 的结合动力学,并分析比较了在“正确”或“错误”dNMP环境中Taq pol和引物末端完全匹配的DNA T-P的结合. 实验结果表明,随着引物末端错配碱基逐个增加,Taq pol和DNA的结合亲和力呈下降趋势,说明增强和引物末端完全匹配的DNA T-P的亲和力是Taq pol选择正确配对碱基的途径之一. 在 “错误”的dNMP环境中, Taq pol与DNA T-P的结合动力学能够用简单的1∶1 Langmuir模型进行拟合,但是MMLV RT－与DNA T-P的结合动力学可能存在构象变化. 而在“正确”的dNMP环境中,Taq pol或MMLV RT－与DNA T-P的结合符合构象变化模型,而且亲和力常数分别是无dNMP时的20倍和64倍,说明“正确”的dNMP诱导酶 (Taq pol或MMLV RT－) - DNA复合物发生构象变化,大大增强了酶-DNA复合物结合的紧密程度. 在存在大量dNMP的环境中, pol β与DNA T-P的结合动力学明显与缺乏dNMP时相异, pol β和DNA的亲和力显著增强.     

毛茛科升麻族植物药用亲缘学初探

本文总结和归纳了在北美、欧洲以及亚洲广泛应用的毛茛科Ranunculaceae升麻族Cimicifugeae药用植物的系统分类、传统药用价值、现代药理以及化学成分研究结果,并在此基础上初步探讨了该族植物的药用亲缘学关系.升麻族药用植物主要含有9,19-阿尔廷烷三萜皂苷以及肉桂酸衍生物两大类化合物.升麻族植物在传统药用中被用来镇痛、解毒、抗炎,在北美很早就被印第安人用来治疗妇科疾病.现代药理研究发现升麻族植物还具有抗骨质疏松、抗病毒、抗肿瘤、抗过敏、类雌激素样作用等.通过对升麻族植物药用亲缘学的初步研究,我们发现由于类叶升麻属Actaea和升麻属Cimicifuga的疗效和化学成分相近,因此两属的亲缘关系也近.考虑它们果实的形态差异,以及细胞学特征不同,认为这两属为升麻族植物的一个分支,且以类叶升麻属较升麻属更为进化.从化学分类学的角度来看,铁破锣属Beesia含有特殊铁破锣皂苷可以成为一个独立的分支,而黄三七属Souliea既和铁破锣属一样含有五环三萜和铁破锣型环阿尔廷烷三萜类化合物,又和升麻属、类叶升麻属一样含有吲哚生物碱,因此可以认为它是铁破锣属和升麻属、类叶升麻属之间的一个过渡类型.升麻族植物特有的清热解毒功效与其特殊的阿尔廷烷三萜皂苷化学成分密切相关,因此我们认为阿尔廷烷三萜皂苷可以作为抗肿瘤、抗病毒的新药源进一步深入研究.     

一种葡聚糖芯片的再生方法、表征及其应用*

表面等离子体共振（surface plasmon resonance, SPR）生物传感器,作为一种适时快捷,无需标记的生物分子相互作用研究工具,已广泛应用于生物化学分析与研究。羧甲基化葡聚糖修饰的CM5传感芯片是Biacore 系列仪器应用最为普遍的核心部件,目前CM5芯片主要从法玛西亚公司购买,价格昂贵,且一旦共价交联的受体分子失活,就不能重复利用。阐述了一种简便、低成本、用于SPR生物传感器的葡聚糖修饰金膜芯片的再生方法及其表征和应用。用此方法再生的芯片能被循环伏安法和原子力显微镜很好地表征,并成功地用于抗前列腺特异性抗原(prostate-specific antigen,PSA)固定和PSA检测, 同时测定了PSA与其抗体之间的动力学和亲和常数。