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| SPR生物传感器研究缺乏3′→5′核酸外切酶活性的DNA聚合酶对DNA的分子识别功能 | |
| 引用本文： | 吴 蕾,黄明辉,赵建龙,杨梦苏.SPR生物传感器研究缺乏3′→5′核酸外切酶活性的DNA聚合酶对DNA的分子识别功能[J].生物化学与生物物理进展,2005,32(12):1130-1140. |
| 作者姓名： | 吴 蕾 黄明辉 赵建龙 杨梦苏 |
| 作者单位： | 1. 中国科学院上海微系统与信息技术研究所,上海,200050;香港城市大学深圳研究院,深圳,518057 2. 香港城市大学深圳研究院,深圳,518057 3. 中国科学院上海微系统与信息技术研究所,上海,200050 |
| 基金项目： | 上海重点基础研究资助项目(04JC14081) |
| 摘 要： | Taq聚合酶 (Taq pol)、失去核酸酶结构域的鼠白血病逆转录酶 (MMLV RT－) 和人源的聚合酶β(pol β) 缺少3′→5′外切核酸酶活性. 利用表面等离子激元共振 (SPR) 生物传感器，研究了Taq pol与引物末端完全匹配和含有1、2、3个错配碱基的DNA 模板-引物 (T-P) 的结合动力学，并分析比较了在“正确”或“错误”dNMP环境中Taq pol和引物末端完全匹配的DNA T-P的结合. 实验结果表明，随着引物末端错配碱基逐个增加，Taq pol和DNA的结合亲和力呈下降趋势，说明增强和引物末端完全匹配的DNA T-P的亲和力是Taq pol选择正确配对碱基的途径之一. 在 “错误”的dNMP环境中， Taq pol与DNA T-P的结合动力学能够用简单的1∶1 Langmuir模型进行拟合，但是MMLV RT－与DNA T-P的结合动力学可能存在构象变化. 而在“正确”的dNMP环境中，Taq pol或MMLV RT－与DNA T-P的结合符合构象变化模型，而且亲和力常数分别是无dNMP时的20倍和64倍，说明“正确”的dNMP诱导酶 (Taq pol或MMLV RT－) - DNA复合物发生构象变化，大大增强了酶-DNA复合物结合的紧密程度. 在存在大量dNMP的环境中， pol β与DNA T-P的结合动力学明显与缺乏dNMP时相异， pol β和DNA的亲和力显著增强. |
| 关 键 词： | SPR生物传感器，DNA 聚合酶 动力学，1∶1 Langmuir模型，构象变化模型 |
| 收稿时间： | 05 31 2005 12:00AM |
| 修稿时间： | 2005-05-312005-07-31 |
SPR Biosensor Study of The Molecular Recognition Between The DNA Polymerase Without 3′→5′ Exonuclease Activity With DNA |
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| WU Lei,HUANG Ming-Hui,ZHAO Jian-Long and YANG Meng-Su.SPR Biosensor Study of The Molecular Recognition Between The DNA Polymerase Without 3′→5′ Exonuclease Activity With DNA[J].Progress In Biochemistry and Biophysics,2005,32(12):1130-1140. | |
| Authors: | WU Lei HUANG Ming-Hui ZHAO Jian-Long and YANG Meng-Su |
| Institution: | Shanghai Institute of Microsystem and Information Technology, The Chinese Academy of Sciences, Shanghai 200050, China; Shenzhen Institute of City University of Hong Kong, Shenzhen 518057, China;Shanghai Institute of Microsystem and Information Technology, The Chinese Academy of Sciences, Shanghai 200050, China; Shenzhen Institute of City University of Hong Kong, Shenzhen 518057, China |
| Abstract: | |
| Keywords: | |
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