非水介质中辣根过氧化物酶（HRP）荧光活性测定法

建立了一种分析ＨＲＰ催化活力的新方法。该方法基于单体（底物）、聚合物（产物）的荧光发射光谱不重叠,使用荧光光谱仪,通过测量底物荧光淬灭来检测ＨＲＰ在非水介质中（二氧六环－水、乙醇－水、丙酮－水体系）催化酚类、芳香胺类物质聚合的活力。此方法迅速、简便,结果是定量并可重复的,并能定量地计算底物转化率。     

高分子量和低分子量尿激酶的分离纯化及动力学性质研究

人尿激酶粗品经苯甲脒亲和柱纯化和Protein-PahSP柱分离后,得到两种分子量的尿激酶（UK）,即高分子量尿激酶（HUK）和低分子量尿激酶（LUK）．采用考马斯亮蓝法测定蛋白质浓度,纤维蛋白平板法测定活力,测得HUK比活为2.9×105IU／mg蛋白,LUK为3.5×105IU／mg蛋白,活力回收为70％以上．经SDS-PAGE鉴定,HUK和LUK均是单一条带,分子量分别为54kD和33kD．HUK和LUK水解显色底物S2444的动力学常数,分别测得HUK的Km为64μmol/L,Kcat为15s-1,LUK的Km为49μmol／L,kcat为13s-1,LUK的催化效率（Kcat／Km）稍高于HUK．     

高分子量和低分子量尿激酶的分离纯化及动力学性质研究

人尿激酶粗品经苯甲脒亲和柱纯化和Ｐｒｏｔｅｉｎ－ＰａｋＳＰ柱分离后,得到两种分子量的尿激酶（ＵＫ）,即高分子量尿激酶（ＨＵＫ）和低分子量尿激酶（ＬＵＫ）,采用民斯亮蓝法测定蛋白质浓度,纤维蛋白板法测定活力,测得ＨＵＫ比活为２．９×１０＾５ＩＵ／ｍｇ蛋白,ＬＵＫ为３．５１０＾５ＩＵ／ｍｇ蛋白,活力回收为７０％以上,经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ鉴定,ＨＵＫ和ＬＵＫ均呈单一条带,分子量分别为５４ｋＤ和３３ｋＤ,Ｈ     

u—PA／t—PA嵌合型纤溶酶原激活剂（ut—PA）的构建,表达,纯化和性…

将尿激酶原ｃＤＮＡ和组织型纤溶酶原激活剂Ａ链ｃＤＮＡ克隆到Ｍ１３ｍｐ１８中,经过二次寡核苷酸诱导的大片段定点删除了一次寡核苷酸诱导的多位点突变,得到了ｊ－ＰＡ／ｔ－ＰＡ融合基因。     

溶栓剂的蛋白质工程

溶栓剂的蛋白质工程孙天霄,徐长法（北京大学生命科学院北京１００８７１）一、前言溶栓剂是治疗急性心肌梗塞（ＡｃｕｔｅＭｙ－ｏｃａｒｄｉａｌＩｎｆａｒｃｔｉｏｎ,ＡＭＩ）最有效的药物。目前ＡＭＩ的治疗方法有三种：第一,外科手术,这种方法要求条件复杂,费用高;第二,保守疗法,即只给患者长期服用阿斯匹林等抗凝药物;第三,溶栓疗法,即注射链激酶（ｓｔｒｅｐｔｏｋｉｎａｓｅ,ＳＫ）、尿激酶（ｕｒｏｋｉnase,UK)或组织型纤溶酶原激活剂(tissue-typeplasminogenactivator,t-PA)一等溶栓剂使血管再通。     

u-PA/t-PA嵌合型纤溶酶原激活剂(ut-PA)的构建、表达、纯化和性质研究

将尿激酶原（ｐｒｏ－ＵＫ）ｃＤＮＡ和组织型纤溶酶原激活剂（ｔ－ＰＡ）Ａ链ｃＤＮＡ克隆到Ｍ１３ｍｐ１８中,经过二次寡核甘酸诱导的大片段定点删除和一次寡核苷酸诱导的多位点突变,得到ｕ－ＰＡ（Ｌｅｕ１４４－Ｇｌｙ４０８）／ｔ－ＰＡ（Ｓｅｒ１－Ｔｈｒ２６３）（ｕｔ－ＰＡ）融合基因．将ｕｔ－ＰＡ融合基因克隆到表达载体ｐＣＭ－βｎｅｏ中,与ｐＣＭ－ｄｈｆｒ共转染ＣＨＯ／ＤＨＦＲ－细胞,筛选稳定表达株．收集无血清表达上清,经苯甲脒柱纯化得到ｕｔ－ＰＡ纯品,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和纤维蛋白自显影显示ｕｔ－ＰＡ有两种分子量形式,分子量分别为６８ｋＤ和６１ｋＤ．纤维蛋白亲和性试验表明,ＬＵＫ（低分子量尿激酶）对纤维蛋白没有亲和性,而含有ＬＵＫ的ｕｔ－ＰＡ则对纤维蛋白表现出很强的亲和性,但ｕｔ－ＰＡ的亲和性略低于亲本ｔ－ＰＡ．