MAPK转导通路在白念珠菌菌体抗氧化应激中的作用

目的探讨MAPK通路在念珠菌抗氧化应激中的作用。方法采用不同浓度过氧化氢刺激白念珠菌,通过流式细胞仪检测念珠菌的凋亡率,并计算其增殖指数;通过实时荧光定量PCR检测MAPK通路中8种基因的表达水平。结果随着过氧化氢的刺激浓度增高,白念珠菌的凋亡率逐渐升高,而其增殖指数下降。在不同的过氧化氢浓度刺激下,MAPK通路中各基因表达水平基本一致,即在较低的过氧化氢浓度刺激下,各基因表达水平均有一定的上升,而随着浓度增高,在高浓度的过氧化氢刺激下,各基因表达水平趋于稳定。结论在低浓度的过氧化氢刺激下,白念珠菌的凋亡率虽有所上升,但其相应的增殖指数也有所上升,即生长加快。这可能与其MAPK通路中各基因表达增强有一定的关系。     

白念珠菌H310D突变型14α-去甲基化酶的克隆、表达及活性的初步研究

利用错配内部引物,采用重组PCR方法获得H310D突变型白念珠菌14α去甲基化酶（CYP51）,构建H310D突变型CYP51蛋白的表达载体pYCYP51M,转化进入酵母菌INVSC-1中,半乳糖诱导蛋白的表达,微量液基稀释法测定表达野生型及突变型CYP51蛋白的宿主酵母菌对氟康唑的MIC。表达的CYP51蛋白占微粒体蛋白酶系的15%;表达突变蛋白的酵母菌MIC值是表达野生蛋白的酵母菌MIC值的2倍。CYP51蛋白H310D的突变导致表达突变蛋白的酵母菌对氟康唑MIC的升高,证明H310残基对CYP51蛋白与氟康唑的结合有一定作用,为研究新型抗真菌前导化合物寻找新的靶点。