信号肽及化学通透剂对环糊精葡萄糖基转移酶胞外分泌的影响

【目的】研究不同的信号肽和化学通透剂对重组环糊精葡萄糖基转移酶(CGTase)胞外分泌的影响,提高CGTase的胞外分泌量。【方法】扩增地芽孢杆菌CHB1(Geobacillus sp.CHB1)的CGTase基因,构建带有地芽孢杆菌CHB1自身信号肽、Omp A、Pel B信号肽和不带信号肽的4种重组质粒;比较4种重组质粒对重组CGTase胞外分泌的影响,筛选最优的信号肽;考察甘氨酸、Triton X-100、SDS和Tween 80四种化学通透剂对重组CGTase胞外分泌的影响,确定最佳的化学通透剂及其浓度。【结果】Omp A信号肽介导的分泌效果最好,胞外酶活达到7.44 U/m L,分别是Pel B、CHB1信号肽的2.04倍和11.27倍,不带信号肽的重组质粒菌胞外检测不到酶活;携带Omp A信号肽的重组质粒菌发酵48 h,同时添加浓度为0.6%的甘氨酸和0.3%的Triton X-100,胞外酶活达最大到14.27 U/m L;SDS和Tween 80对该酶的胞外分泌具有明显的抑制作用。【结论】Omp A信号肽的介导效果最佳,同时添加浓度为0.6%和0.3%的甘氨酸和Triton X-100可以有效促进胞外分泌,为该重组酶的高效胞外分泌提供了一种有效的方法。     

棘托竹荪菌盖蛋白提取及分析

首次以棘托竹荪菌盖为原料,通过单因素试验和正交试验,研究菌盖蛋白最佳提取工艺;用SDS-PAGE测定所提取蛋白的分子量分布。结果表明:提取时间和pH是影响竹荪菌盖蛋白提取的主要因数,最佳提取条件为pH8.0,提取时间2.5 h,提取温度55℃,提取率达64.07%,提取的竹荪菌盖主要蛋白分子量为16 kDa和38 kDa。棘托竹荪菌盖作为蛋白提取原料是可行的,以其为原料开发蛋白相关产品具有巨大的潜力和广阔的市场前景。     

根瘤菌菌剂的研究与开发现状

根瘤菌与豆科植物共生成为豆科植物固氮的重要方式,它可以为豆科植物提供所需氮量的1/2～1/3。因此,土壤中有效根瘤菌的数量是决定豆科植物产量的重要因素,而根瘤菌菌剂的使用可以有效地提高土壤中根瘤菌数量。本文从根瘤菌菌剂制备中高效菌种的选育及匹配、高密度菌剂的制备、菌剂保存方法等方面进行综述。比较了自然选育、杂交选育和诱变选育等各类选育方法及琼脂试管配对法和水培配对法的优缺点;总结了菌剂制备的一般过程和方法;论述了菌剂保藏过程中冷冻干燥法和各种保护剂的使用对菌剂保藏效果的影响。本文阐述了根瘤菌菌剂的制备工艺和发展方向,为根瘤菌剂的研制提供重要参考。     

氮离子束注入姬松茸担孢子的生物学效应研究

氮离子束注入与紫外线辐射对姬松茸担孢子萌发的影响显著不同,表现出一定程度的马鞍型效应.不同剂量的氮离子束注入姬松茸担孢子,其产生的生物学效应不同:氮离子注入束流为200×2.6×1013N /cm2,筛选到一株箱栽生物学效率提高47.0%的姬松茸新菌株AbML11;氮离子注入束流为400×2.6×1013N /cm2,筛选到一株子实体呈现白色突变的姬松茸新菌株AbML7;氮离子注入束流为500×2.6×10"N13/cm2,筛选到一株具有AEC抗性突变的姬松茸新菌株AbML2.     

冬虫夏草粗多糖诱导小鼠腹腔巨噬细胞产生TNF-α的作用

研究了 3种冬虫夏草提取的粗多糖对小鼠腹腔巨噬细胞产生肿瘤坏死因子的作用。结果表明野生冬虫夏草、冬虫夏草菌丝体和拟青霉子实体的粗多糖在体外都能诱导小鼠腹腔巨噬细胞产生TNF α ,但野生冬虫夏草在体外诱导小鼠腹腔巨噬细胞产生TNF α的强度比冬虫夏草菌丝体和拟青霉子实体高 ,拟青霉子实体又比冬虫夏草菌丝体强     

一株耐高温细菌CHB1的分离和产酶特性研究

从土壤中分离到1株耐高温细茵CHB1,经鉴定为嗜热脂肪土芽胞杆菌(Geobacillus stearother-mophilus).通过平板透明圈法研究其产酶特性,结果表明CHB1具有蛋白酶、淀粉酶和纤维素酶活性,产酶最适温度均为60℃;最佳产酶时间因酶的种类而不同,淀粉酶为24 h,蛋白酶和纤维素酶为48 h.培养基厚度对产酶有一定的影响,以每皿20～25 mL为宜.     

嗜热脂肪土芽孢杆菌CHB1产蛋白酶特性

目的：研究嗜热脂肪土芽孢杆菌CHBl产酶特性。方法：以蛋白酶活力为主要指标,考察温度、pH、接种量、装量等条件对CHB1产蛋白酶的影响。结果：CHB1适宜的产蛋白酶条件为：装量40mLt250mL,pH8．0,接种量5％,温度58℃,转速180r／min,时间36～44h,Tween-80对CHB1产蛋白酶具有抑制作用。结论：优化后蛋白酶产量有较大提高,最高酶活力达48U／mL,是所报道多数嗜热细菌产蛋白酶量的2—12倍。CHB1蛋白酶特性的研究及产蛋白酶量的提高,有利于揭示CHB1在堆肥化中的作用机理,提高堆肥效果。     

一株芽孢杆菌产生脲酶条件及脲酶提取研究

研究了一株芽孢杆菌(Bacillus sp.)产生脲酶的条件及脲酶提取。结果表明,芽孢杆菌适宜的生长及产酶温度为35～37℃,产酶受底—尿素的诱导。静止培养有利于产酶,Ni²⁺对产酶没有影响,脲酶粗提物经硫酸铵盐析、热处理,Sephadex G-200及DEAE-纤维素柱层析提取步骤脲酶比活力提高了近70倍,回收率15.5%.     

棘托竹荪菌托抑菌物质提取、分离及活性组分北大核心CSCD

以棘托竹荪(Dictyophora echinovolvata)菌托为研究对象,提纯菌托提取物有效抑菌天然产物,分析其抑菌活性组成。选择最佳提取溶剂及指示菌,采用色谱层析法分离纯化,GC-MS检测分析活性组分。结果表明:乙酸乙酯提取物对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、蜡状芽孢杆菌、标准摩根氏菌、肠炎沙门氏菌均有较好的抑制效果;以金色葡萄球菌为指示菌,乙酸乙酯提取物的抑菌作用对温度、紫外线均有较好的稳定性;对提取物进行分离,获得2个有抑菌活性组分DEVⅠ、DEVⅡ,采用GC-MS分析DEVⅠ、DEVⅡ中的化学组分,DEVⅠ中相对含量1%以上的成分有20个;DEVⅡ中相对含量在1%以上成分6个,其中具有抑菌活性的成分为2-呋喃甲酸和肉桂酸,相对含量分别为25.6%和54.2%,推测可能为棘托竹荪菌托抑菌物质的主要组成成分。     

虎奶菇发酵液抑菌成分的理化性质及其分离鉴定

为探明虎奶菇发酵液中的抑菌成分,本文以金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)为指示菌,研究了温度、pH、紫外线、蛋白酶K对虎奶菇发酵液抑菌活性的影响;并采用硅胶柱层析及反相中压液相层析追踪分离抑菌活性物质,通过核磁共振并结合相关资料对分离到的单体化合物进行了结构鉴定。结果显示,发酵液抑菌成分对蛋白酶较为稳定,对紫外照射敏感,可在90℃以下、pH1~9的范围内较好的保持其抑菌活性;活性追踪分离得到1个抑菌物质PtrA,经鉴定为2-呋喃甲酸(2-furoic acid)。