一株芽孢杆菌产生脲酶条件及脲酶提取研究

研究了一株芽孢杆菌(Bacillus sp.)产生脲酶的条件及脲酶提取。结果表明,芽孢杆菌适宜的生长及产酶温度为35～37℃,产酶受底—尿素的诱导。静止培养有利于产酶,Ni²⁺对产酶没有影响,脲酶粗提物经硫酸铵盐析、热处理,Sephadex G-200及DEAE-纤维素柱层析提取步骤脲酶比活力提高了近70倍,回收率15.5%.     

脲酶抑制剂产生菌筛选和抑制剂的提取

建立了筛选脲酶抑制剂产生菌的模式,获得三个菌株,其中代号为I36的菌株,经鉴定为赭曲霉。该菌株产生脲酶抑制剂适宜的培养条件：培养基为2％葡萄糖,10％马铃薯,pH值自然,28～30℃,液体静置培养12d。测定液体培养液（含粗制粉2.0mg）对灰泥田和黄泥田土壤酶活性的抑制率4d分别为13.5％和100％。从赭曲霉代谢产物提取到的其中一种抑酶物质,经硅胶薄层层析和高效液相色谱鉴定达到均一。     

赭曲霉产生的脲酶抑制剂的提纯与动力学

对赭曲霉(Aspergillus ochraoeus)产生的脲酶抑制剂进行了纯化,经硅胶薄层层析和高效液相色谱鉴定达到均一,晶体呈白色针状。质谱及元素分析表明,该物质含C、H,O三元索,分子量为184,分子式是C_9H_(12)O_4,溶点105～110℃,其抑制作用随抑制剂浓度而增强,抑制类型为非竞争性。K为1.3×10~(-3)mol/L。抑制剂未改变酶的Hill系数,n=1。