FAM92A1-289基因的真核表达载体构建和亚细胞定位

利用PCR方法扩增FAM92A1-289全长,经BamH I和Xho I酶切后连接入pEGFP-N1真核表达载体,构建pEGFP-N1-FAM92A1-289重组表达质粒,转染Hela细胞,利用荧光显微镜观察FAM92A1-289在细胞中的定位。经双酶切和核酸序列分析证实重组质粒包含有正确编码的FAM92A1-289读码框。荧光显微镜观察到空质粒pEGFP-N1转染后,整个细胞内弥散绿色荧光,而转染pEGFP-N1-FAM92A1-289重组载体后,可见绿色荧光分布于Hela细胞核中,显示FAM92A1-289定位于细胞核。成功构建人FAM92A1-289真核表达载体,FAM92A1-289定位于哺乳细胞的细胞核中。     

不同剂量的He—Ne激光对Raji细胞膜脂流动性的影响

本文采用荧光偏振法检测了不同剂量的Ｈｅ－Ｎｅ激光照射法对Ｒａｊｉ细胞膜流动性的影响,发现了０．０１Ｊ／ｃｍ＾２和０．５１Ｊ／ｃｍ＾２两剂量可使膜脂微粘度降低（Ｐ〈０．０５）。即其膜脂流动性升高;１．０Ｊ／ｃｍ＾２和２．０Ｊ／ｃｍ＾２的剂量脂微粘度无明显影响,即其膜流动性无明显化（Ｐ〉０．０５）,而６．０２Ｊ／ｃｍ＾２的剂量可使膜微粘度明显上升（Ｐ〈０．０５）。即其膜流动性明显下降。     

不同剂量的He—Ne激光对Raji细胞表面电荷的影响

本文以离体培养的Ｒａｊｉ细胞为材料,采用细胞电泳技术检测了不同剂量的Ｈｅ－Ｎｅ激光对Ｒａｊｉ细胞表面电荷的影响,发现低于或者等于０．５Ｊ／ｃｍ＾２的Ｈｅ－Ｎｅ激光能量对膜表面电荷无明显影响（Ｐ〉０．０５）;大于此剂量的Ｈｅ－Ｎｅ激光可使膜表面电荷（绝对值）下降,即负电荷数减小,ＥＰＭ下降（Ｐ〈０．０５）。     

人FAM92A1基因诱饵表达质粒的构建与鉴定

目的 构建人FAM92A1基因（hFAM92A1）的诱饵表达质粒pGBKT7-hFAM92A1并检测其蛋白表达、毒性和自激活作用.方法 PCR扩增hFAM92A1的基因编码序列并克隆入诱饵表达载体pGBKT7中,酶切和测序鉴定后,转化到酵母AHl09细胞中,Western印迹检测诱饵蛋白表达情况,同时检测诱饵蛋白的毒性和自激活作用.结果 成功构建FAM92A1基因的诱饵表达质粒pGBKT7-hFAM92A1,测序结果正确.Western印迹实验证实酵母细胞高表达诱饵蛋白hFAM92A1,诱饵蛋白没有自激活作用.结论 构建的诱饵表达质粒pGBKT7-hFAM92A1可用于下一步酵母双杂交系统实验,为进一步研究hFAM92A1功能奠定了基础.     

骨髓基质干细胞的分离纯化及培养

目的 建立骨髓基质干细胞(MSCs)良好的分离纯化和培养方法。方法 将小鼠骨髓基质干细胞自殷骨中分离,应用贴壁选择法结合细胞克隆挑选法进行分离纯化,应用细胞生长因子(EGF和PDGF-BB)刺激法进行MSCs的体外培养和传代,倒置显微镜下观察分离培养的细胞并照像记录。结果,培养获得了纯化的呈梭形成纤雏样细胞的骨髓基质干细胞。在生长因子EGF和PDGF-BB的共同作用下,传代MSCs生长旺盛,形态均一。结论 该方法是简便高效的骨髓基质干细胞的分离纯化和培养方法。