幽门螺杆菌感染与胃癌相关基因的筛选及预后分析

目的通过分析幽门螺杆菌感染胃黏膜组织和胃癌细胞系后的差异基因变化,并在癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)数据库和肿瘤基因芯片(Oncomine)数据库进行验证,探究幽门螺杆菌导致胃癌发生、发展的分子机制。方法分析基因表达汇编(Gene Expression Omnibus,GEO)数据库幽门螺杆菌感染相关芯片集GSE5081与GSE70394,绘制维恩图查找幽门螺杆菌感染后共同上调的差异基因。对共同上调的差异基因进行功能富集分析。通过TCGA和Oncomine数据库验证差异基因在胃癌中的表达。利用Kaplan-Meier Plotter数据库和GEPIA数据库分析差异基因表达高低与胃癌患者预后是否存在相关性。结果通过差异基因筛选和维恩分析,两个芯片集共有21个共同上调差异基因。GO分析发现共同上调差异基因主要富集在对细菌来源分子的反应、趋化因子CXCR受体结合、中性粒细胞趋化作用等相关的基因功能上;KEGG通路主要富集在癌症通路、TNF信号通路、趋化因子信号通路等。STRING以及PPI数据库分析发现21个基因中PRDM1、IL10、NRP1、BIRC3、GNG13、CXCL1、CXCL2、CXCL3、CXCL8基因存在有网络关系,属于关键枢纽基因。通过TCGA和Oncomine数据库筛选及验证,发现在胃癌组织中NRP1、CXCL1、CXCL8基因明显上调,结果差异有统计学意义(TCGA数据库中,三者P值均小于0.05,Oncomine数据库中,NRP1:t=4.607,P0.01;CXCL1:t=5.854,P0.01;CXCL8:t=5.316,P0.01)。在Kaplan-Meier Plotter数据库(210615-at芯片:P0.01;210510-s-at芯片:P0.01;212298-at芯片:P0.01)以及GEPIA数据库(P0.01)两个数据库中,NRP1的高表达均与胃癌的预后负相关。结论不同的数据库均显示NRP1、CXCL1、CXCL8三个基因与幽门螺杆菌感染相关,同时在胃癌中高表达,并且NRP1的高表达与胃癌的不良预后相关,这些结果为进一步探究幽门螺杆菌导致胃癌发生、发展的分子机制提供了重要基础。     

降脂益生菌对非酒精性脂肪性肝病小鼠胆汁酸代谢及转运的影响和机制初探

目的探讨降脂益生菌(鼠李糖乳杆菌DM9054和植物乳杆菌86066联合制剂)对非酒精性脂肪性肝病(nonalcoholic fatty liver disease, NAFLD)小鼠胆汁酸代谢及转运的影响和可能机制。方法 18只雄性FXR~(-/-)小鼠随机分为3组(n=6):正常饮食组、高脂饮食组和高脂饮食+降脂益生菌组。其中正常饮食组给予普通饮食和生理盐水灌胃,高脂饮食组给予高脂饮食和生理盐水灌胃,高脂饮食+降脂益生菌组给予高脂饮食和降脂益生菌灌胃。所有小鼠干预12周,处死小鼠1周前行胰岛素耐量试验和腹腔注射葡萄糖耐量试验。小鼠处死后自动生化分析仪检测血脂、胆汁酸及肝功能指标;RT-PCR检测肝脏和回肠组织炎症因子相对表达量;HE染色评估肝脏和回肠组织病理情况;Western blot检测法尼醇受体(Farnesoid X receptor, FXR)通路中的成纤维细胞生长因子15(fibroblast growth factor 15,FGF15)、成纤维细胞生长因子受体4(fibroblast growth factor receptor 4,FGFR4)和小分子异源二聚体(short heterodimer partner, SHP)、胆汁酸合成限速酶胆固醇7α-羟化酶(cholesterol 7α-hydroxylase, CYP7A1)及胆汁酸转运相关的胆盐输出泵(bile salt export pump, BSEP)的蛋白表达。结果和高脂饮食组相比,高脂饮食+降脂益生菌组小鼠血清中胆汁酸含量明显下降(P=0.000 1),FGF15、FGFR4和BSEP蛋白表达水平升高(P=0.009 7、0.024 2、0.000 1),CYP7A1的蛋白表达水平降低(P=0.006 9)。此外,通过降脂益生菌干预还明显改善了高脂饮食FXR~(-/-)小鼠的糖脂代谢紊乱(P=0.002 4)、肝脏脂肪变性、肝脏和回肠组织炎症(P=0.013 8、0.000 1、0.000 1)以及肠黏膜屏障功能(P=0.014 2)。结论降脂益生菌具有类似选择性肠道FXR激动剂的作用,能够通过调控肠道FXR-FGF15通路改善胆汁酸的代谢及转运,进而缓解高脂饮食FXR~(-/-)小鼠的NAFLD。     

花粉管通道法介导的真菌耐盐基因转化拟南芥

橡胶树内生真菌ITBB2-1具有很强的抗盐性,在培养基中添加2倍海水盐度的NaCl能显著促进菌落的生长.采用两种方法研究利用花粉管通道法将ITBB2-1耐盐基因导入拟南芥.多数耐盐转基因植株畸形,生长发育不正常.通过对一千两百余株转基因植株的筛选,获得了耐盐性显著提高、生长发育正常的转基因植株3个.对主要农艺性状统计分析发现,转基因植株叶片的长度、宽度和面积均比野生型植株小,差异达极显著水平.转基因植株SR3的角果长度仅为野生型的64.5%,SR1和SR2的角果长度与野生型无显著差异.本研究表明,在真菌耐盐机制尚未得到研究和耐盐基因尚毒克隆的情况下,可以采用花粉管通道法将其耐盐特性导入高等植物中.     

纳米炭黑颗粒复合寒冷暴露对小鼠肺部氧化应激反应的影响

目的：研究纳米炭黑颗粒复合寒冷暴露对小鼠肺部组织结构及其氧化应激反应的影响。方法：将72只健康雄性C57BL/6小鼠随机分为6组：对照（Ctrl）组、单纯冷暴露（C）组、低剂量染毒（L）组、低剂量染毒复合冷暴露（LC）组、高剂量染毒（H）组、高剂量染毒复合冷暴露（HC）组。采用吸入式气管滴注染毒方式,一次性滴注纳米炭墨颗粒染毒液40 μl,浓度分别为0.45 mg/ml （L）和4.05 mg/ml （H）。冷暴露方式为4℃暴露,4 h/d,连续20 d。暴露结束24 h后称重、取样,进行相关指标测定。采用试剂盒法测定小鼠肺组织匀浆中超氧化物歧化酶（SOD）活力、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活力和丙二醛（MDA）含量;肺组织块HE染色,观察肺组织病理组织结构改变。结果：所有冷暴露处理组小鼠的体重均显著低于所有非冷暴露组（P<0.05）,对照组及单纯染毒组小鼠体重均在实验开始14 d后明显升高（P<0.05）,单纯冷暴露组与纳米炭黑颗粒染毒复合冷暴露组小鼠体重均在14 d后趋于稳定。HE检测结果表明,单纯纳米炭黑颗粒染毒组及染毒复合冷暴露组小鼠肺泡腔内均有黑色颗粒沉积,高剂量染毒复合冷暴露组可见肺泡结构破环,排列凌乱,有大量炎细胞浸润。与对照组相比,其余各组SOD活力均显著降低（P<0.05）;高剂量染毒组及高剂量染毒复合冷暴露组GSH-Px活力明显低于对照组（P<0.01）;与对照组相比,高剂量染毒组、低剂量染毒与高剂量染毒复合冷暴露组MDA含量显著升高（P<0.01）。两因素方差分析提示,随着染毒剂量的增加,SOD活力及GSH-Px活力显著降低（P<0.05）;随着温度的降低,肺组织MDA含量显著升高（P<0.05）,4℃间歇性冷暴露与纳米颗粒物暴露对肺组织SOD、GSH-Px活力及MDA含量的影响均无交互作用。结论：纳米炭黑颗粒复合寒冷暴露可导致小鼠肺部炎症反应加重,氧化应激水平升高。     

鄱阳湖湿地水位变化的景观响应

根据《湿地公约》和《全国湿地资源调查技术规程(试行)》关于湿地内涵和界定条件,利用现代遥感技术和地理信息技术,提取鄱阳湖湿地面积为3886km²。在此基础上,利用多时段遥感影像,分析了湿地在相似水位条件和不同水位条件下的景观变化。结果表明,在相似水位条件下,鄱阳湖湿地景观变化主要表现为居民地和裸地面积增加,水域面积变化不明显;在不同水位条件下,鄱阳湖湿地景观变化比较显著。景观变化驱动力分析表明,湿地水位变化是湿地景观变化的主要因素。     

双硫仑抗癌作用研究进展

双硫仑作为一种治疗慢性酒精中毒的药物在临床中广泛使用。近几十年研究发现它除了戒酒作用还在治疗癌症中具有巨大潜力,针对它在体外和体内模型的研究结论已有部分在临床治疗中得到证实。双硫仑通过其代谢产物抑制乙醛脱氢酶活性导致体内乙醛含量积累,增加细胞毒性从而抑制肿瘤干细胞增殖分化;提高细胞内活性氧的浓度诱导细胞凋亡;抑制蛋白酶体活性,积累大量废弃蛋白质诱导细胞凋亡;通过抑制NF-κB下调来抑制上皮间质转化等。此外双硫仑与抗癌药物联合使用可提升抗癌药物药效。由于具有低毒、低成本且对肿瘤组织有趋向性等特点,双硫仑重新应用于临床作为抗癌药物具有广阔前景。简要回顾了双硫仑最新研究中阐明的双硫仑抗癌作用分子机制,展望了未来双硫仑用作新临床抗癌药物的前景,以期为双硫仑在抗癌药物中的应用研究提供参考。     

武汉市65个园林树种的生态功能研究

园林树种是建设生态园林城市的主体,其生态功能的定量研究是园林植物筛选、配置和管理的重要依据.本研究通过测量武汉市65个常见园林树种的光合、蒸腾日变化及冠幅、叶面积指数等指标,发现树种间、乔木与灌木、常绿与落叶植物之间的水分利用、固碳释氧、蒸腾降温及滞尘能力均有显著差异.根据分层聚类分析,可将它们划分为5大功能类群.其中低固碳低滞尘型26种;高固碳高降温型8种(分别为垂柳Salix babylonica、火棘Pyracantha fortuneana、栾树Koelreuteria paniculata、木芙蓉Hibiscus mutabilis、枇杷Eriobotrya japonica、西府海棠Malus micromalus、银木Cinnamomum septentrionale和重阳木Bischofia javanica);高滞尘低降温型9种(分别为枫杨Pterocarya stenoptera、桂花Osmanthus fragrans、夹竹桃Nerium indicum、马褂木Liriodendron chinense、石楠Photinia serrulata、悬铃木Platanus hispanica、雪松Cedrus deodara、银杏Ginkgo biloba和樟树Cinnamomum camphora);低水分利用高蒸腾型11种;高水分利用型11种.     

副干酪乳杆菌N1115对肝硬化患者肠黏膜屏障功能的研究

目的研究不同剂量副干酪乳杆菌对肝硬化患者肠黏膜屏障的影响。方法选择我院肝硬化失代偿期患者42例,随机分为对照组和副干酪乳杆菌4g、8g、16g组。各组均给予常规对症治疗。在此基础上,除对照组外,其余各组按相应剂量每日口服补充副干酪乳杆菌,连续2周。所有患者均于治疗前后测血清二胺氧化酶、脂多糖。结果给予不同剂量副干酪乳杆菌治疗后,各组患者的二胺氧化酶和脂多糖均有所下降,但只有给予16g副干酪乳杆菌治疗的患者二胺氧化酶和脂多糖与对照组相比差异有统计学意义(t=9.517、10.836,P0.05),同时该组患者疗前后相比差异亦有统计学意义(t=9.445、7.701,P0.05)。结论补充16g/d副干酪乳杆菌能帮助改善肝硬化患者肠黏膜屏障功能。     

幽门螺杆菌感染新型原代人胃上皮细胞模型的建立

目的培养三维(3D)人胃黏膜上皮类器官,转为二维(2D)原代胃黏膜细胞培养,并建成人2D原代胃上皮细胞的幽门螺杆菌感染模型。方法 (1)从正常人胃上皮组织中分离胃腺,在含有多种生长调节和凋亡抑制等混合因子的培养基中,依附于基质胶而培养成3D类器官;(2)利用免疫荧光技术鉴定胃上皮类器官的相关分子标记;(3)研究正常原代胃上皮细胞被幽门螺杆菌感染后的形态学变化,利用免疫印迹技术鉴定幽门螺杆菌感染相关蛋白的表达水平。结果成功培养出可长期传代的人胃上皮3D类器官,具有典型的人胃黏膜上皮分子标记。而且3D类器官转为2D平面培养的原代胃上皮细胞,可作为幽门螺杆菌的体外原代细胞感染模型。结论 3D胃上皮类器官,可作为2D原代胃上皮细胞的持久来源,为研究幽门螺杆菌感染人体胃上皮的分子机制带来个体化的新模型。     

幽门螺杆菌对胃癌前期阶段 胃上皮DNA同源重组修复关键蛋白的影响

目的通过检测胃癌前期阶段幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)阳性和阴性患者胃黏膜组织中DNA损伤标志物γH2AX及同源重组(homologous recombination,HR)修复关键蛋白MRE11、Rad51、CtIP表达水平,评价H.pylori感染在胃癌前期阶段对HR精确修复的影响。方法选择2017年3月至9月行胃镜及病理检测的165例H.pylori阳性和阴性患者,取胃黏膜上皮组织,石蜡包埋切片,行HE染色,根据世界卫生组织标准和更新的悉尼标准,划分病理类型。然后应用免疫组织化学染色方法检测H.pylori和DNA损伤标记蛋白及HR修复关键蛋白表达水平,并行统计学分析。结果胃黏膜上皮细胞中γH2AX的表达,在CSG、CAG和IM阶段,H.pylori阳性组表达高于阴性组(Mann-Whitney U=1116.5,P=0.001;Mann-Whitney U=185.0,P=0.018;Mann-Whitney U=214.5,P=0.041),在Dys阶段,H.pylori阳性组和阴性组差异无统计学意义(Mann-Whitney U=35.5,P=0.964);MRE11的表达,在CSG、CAG阶段,H.pylori阳性组表达高于阴性组(MannWhitney U=1117.0,P=0.001;Mann-Whitney U=201.0,P=0.002),在IM、Dys阶段,H.pylori阳性组和阴性组差异无统计学意义(Mann-Whitney U=171.0,P=0.568;Mann-Whitney U=41.5,P=0.616);Rad51的表达,在CSG、IM阶段,H.pylori阳性组表达低于阴性组(Mann-Whitney U=490.0,P=0.002;Mann-Whitney U=73.0,P=0.007),在CAG、Dys阶段,H.pylori阳性组和阴性组差异无统计学意义(Mann-Whitney U=101.0,P=0.404;Mann-Whitney U=24.0,P=0.291);CtIP的表达,在CSG、IM阶段,H.pylori阳性组表达低于阴性组(Mann-Whitney U=593.0,P=0.044;Mann-Whitney U=58.5,P=0.001),在CAG、Dys阶段,H.pylori阳性组和阴性组差异无统计学意义(Mann-Whitney U=84.0,P=0.136;Mann-Whitney U=18.5,P=0.102)。结论在胃癌前期发展阶段,H.pylori感染导致人体胃上皮细胞DNA损伤,却抑制部分HR修复通道关键蛋白表达,从而可能抑制精确的HR修复,增加细胞恶变几率。