N-乙酰氨基葡萄糖转移酶（OGT）研究进展

O-GlcNAc是一种广泛存在于蛋白质丝/苏氨酸残基上的动态、可逆的蛋白翻译后修饰,它广泛分布在细胞浆和细胞核中,参与调节多种细胞途径。研究表明蛋白的O-GlcNAc糖基化与神经退行性疾病、糖尿病和癌症等疾病相关。在体内,O-GlcNAc动态修饰由N-乙酰氨基葡萄糖转移酶（OGT）和N-乙酰氨基葡萄糖苷酶（OGA）协同完成。近年来,OGT逐渐成为糖生物学领域的研究热点,在其结构、作用机制及晶体学方面取得了快速发展。     

妊娠期肝内胆汁淤积症256例临床分析

目的:探讨改善妊娠期肝内胆汁淤积症患者围生结局及围生儿预后的方法。方法:对2006年3月-2011年3月在我院住院分娩的256例ICP患者及从我院住院无并发症正常分娩的10112个患者中随机抽取的256例患者的产检情况、分娩方式、围生儿结局进行回顾性分析。结果:ICP组与对照组在分娩方式、产后出血、早产、新生儿窒息、羊水粪染、围产儿死亡等方面比较差异均具有统计学意义(P<0.05);产检组与未检组在产后出血、早产、新生儿窒息、羊水粪染、围产儿死亡等方面比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:妊娠期肝内胆汁淤积症可增加早产、胎儿宫内窘迫、新生儿窒息、产后出血发生率,重视产前检查和孕期保健,对ICP患者做到早发现、早诊断、早治疗,选择适当分娩方式、适时终止妊娠,对改善围生结局及围生儿预后有积极的意义。     

幽门螺杆菌感染与胃癌相关基因的筛选及预后分析

目的通过分析幽门螺杆菌感染胃黏膜组织和胃癌细胞系后的差异基因变化,并在癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)数据库和肿瘤基因芯片(Oncomine)数据库进行验证,探究幽门螺杆菌导致胃癌发生、发展的分子机制。方法分析基因表达汇编(Gene Expression Omnibus,GEO)数据库幽门螺杆菌感染相关芯片集GSE5081与GSE70394,绘制维恩图查找幽门螺杆菌感染后共同上调的差异基因。对共同上调的差异基因进行功能富集分析。通过TCGA和Oncomine数据库验证差异基因在胃癌中的表达。利用Kaplan-Meier Plotter数据库和GEPIA数据库分析差异基因表达高低与胃癌患者预后是否存在相关性。结果通过差异基因筛选和维恩分析,两个芯片集共有21个共同上调差异基因。GO分析发现共同上调差异基因主要富集在对细菌来源分子的反应、趋化因子CXCR受体结合、中性粒细胞趋化作用等相关的基因功能上;KEGG通路主要富集在癌症通路、TNF信号通路、趋化因子信号通路等。STRING以及PPI数据库分析发现21个基因中PRDM1、IL10、NRP1、BIRC3、GNG13、CXCL1、CXCL2、CXCL3、CXCL8基因存在有网络关系,属于关键枢纽基因。通过TCGA和Oncomine数据库筛选及验证,发现在胃癌组织中NRP1、CXCL1、CXCL8基因明显上调,结果差异有统计学意义(TCGA数据库中,三者P值均小于0.05,Oncomine数据库中,NRP1:t=4.607,P0.01;CXCL1:t=5.854,P0.01;CXCL8:t=5.316,P0.01)。在Kaplan-Meier Plotter数据库(210615-at芯片:P0.01;210510-s-at芯片:P0.01;212298-at芯片:P0.01)以及GEPIA数据库(P0.01)两个数据库中,NRP1的高表达均与胃癌的预后负相关。结论不同的数据库均显示NRP1、CXCL1、CXCL8三个基因与幽门螺杆菌感染相关,同时在胃癌中高表达,并且NRP1的高表达与胃癌的不良预后相关,这些结果为进一步探究幽门螺杆菌导致胃癌发生、发展的分子机制提供了重要基础。     

FISH检测宫颈脱落细胞与宫颈组织中hTERC基因制片方法的研究

目的:探讨FISH实验中用直接涂片法、盐水制片法、TCT制片法、低渗滴片法制片法和宫颈切片组织取材方法对于FISH成功率的影响.方法:收集2008年3月至2009年3月青岛大学医学院附属医院妇科162例宫颈脱落细胞标本及2008年5月至2009年3月手术切除或活检的宫颈组织63例,用荧光原位杂交(FISH)方法检测hTERC基因.结果:直接涂片法、盐水制片法、生理盐水法、TCT制片法和石蜡包埋组织切片法hTERC基因杂交成功率分别为58.3%,65%,55%,87.1%,85.7%,TCT制片高于其它四组;低渗滴片法背景干净度、细胞形态、裸核数量满意度最高;TCT制片法细胞数量满意率最高;石蜡包埋组织切片法荧光信号满意率最高.结论:在检测hTERC基因的宫颈癌筛查中,TCT制片法明显优于其他方法,而在指导宫颈病变及宫颈癌的治疗中,石蜡包埋组织切片法的染色体破坏最小,实际意义更大.     

小鼠萎缩性胃炎模型的构建及与血清胃泌素 17、白介素 8的关系

目的建立小鼠慢性萎缩性胃炎(CAG)模型;用此模型探讨胃泌素-17(gastrin-17,G-17)及白介素-8(IL-8)在CAG诊断和病程进展中的应用价值。方法选取SPF级、体质量22～24 g、5～7周龄雄性C57BL/6小鼠40只,随机分为阴性对照组(A组,超纯水)、高盐组(B组,1.8%NaCl溶液)、H.pylori组(C组,H.pylori悉尼菌株SS1)和高盐+H.pylori组(D组,1.8%NaCl溶液+SS1菌株)4组,每组10只,分别对各组小鼠进行灌胃处理。于第16周和第24周每组分别处死5只小鼠,通过免疫组化观察H.pylori情况、胃黏膜病理组织学变化,酶联免疫吸附法(ELISA)检测小鼠血清G-17和IL-8的表达水平。结果灌胃处理16周可观察到B、D两组小鼠CAG造模成功,G-17表达水平差异无统计学意义(χ~2=6.591,P0.05);C、D两组小鼠IL-8表达水平较A、B两组明显升高(F=25.241,P0.05)。24周后可观察到B、C、D三个实验组均CAG造模成功:B、D组小鼠G-17表达水平较A组明显降低(χ~2=15.006,P0.05),C组G-17水平与A组差异无统计学意义(Z=-1.681,P0.05);H.pylori处理组(C、D)小鼠的IL-8水平明显升高(F=31.941,P0.05)。结论高盐饮食和胃黏膜H.pylori定植均可成功构建C57BL/6小鼠CAG模型,且高盐饮食可加快该模型的建立;血清G-17表达水平与CAG病情严重程度呈负相关,而IL-8的表达水平与是否H.pylori感染有关。     

幽门螺杆菌感染新型原代人胃上皮细胞模型的建立

目的培养三维(3D)人胃黏膜上皮类器官,转为二维(2D)原代胃黏膜细胞培养,并建成人2D原代胃上皮细胞的幽门螺杆菌感染模型。方法 (1)从正常人胃上皮组织中分离胃腺,在含有多种生长调节和凋亡抑制等混合因子的培养基中,依附于基质胶而培养成3D类器官;(2)利用免疫荧光技术鉴定胃上皮类器官的相关分子标记;(3)研究正常原代胃上皮细胞被幽门螺杆菌感染后的形态学变化,利用免疫印迹技术鉴定幽门螺杆菌感染相关蛋白的表达水平。结果成功培养出可长期传代的人胃上皮3D类器官,具有典型的人胃黏膜上皮分子标记。而且3D类器官转为2D平面培养的原代胃上皮细胞,可作为幽门螺杆菌的体外原代细胞感染模型。结论 3D胃上皮类器官,可作为2D原代胃上皮细胞的持久来源,为研究幽门螺杆菌感染人体胃上皮的分子机制带来个体化的新模型。     

基于数据挖掘分析ONECUT2基因在胃癌的表达及与幽门螺杆菌感染的相关性

目的分析ONECUT2基因在胃癌中的表达及其与幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)感染的相关性。方法 (1)利用Oncomine数据库、TCGA数据库分析ONECUT2基因在胃癌中的表达,R软件包进行基因的共聚类微阵列数据分析。(2)利用Kaplan-Meier Plotter数据库和GEPIA数据库分析ONECUT2差异表达与胃癌患者预后的关系。(3)利用生物信息学功能注释数据平台DAVID对胃癌中与ONECUT2基因表达正相关的前200个基因进行功能富集分析。(4)利用GEO数据库中的数据分析H.pylori感染与ONECUT2表达的相关性。结果 (1)Oncomine数据库中的数据在胃癌、膀胱癌等8种肿瘤中共有14项研究显示ONECUT2基因在肿瘤组织中的高表达;其中胃癌相关的有两项(t=6.064,P0.000 1;t=4.335,P0.000 1);TCGA数据库的数据也证实胃癌中ONECUT2高表达(t=6.680,P0.001)。(2)胃癌中ONECUT2与EHF、FUT6、TNFRSF11A、RSAEF、EPCAM等20个基因有较高的共表达。(3)GO分析发现胃癌中ONECUT2富集在分子结构活性等相关的基因功能上;而KEGG富集分析发现ONECUT2富集于紧密连接功能等6个通路。(4)Kaplan-Meier Plotter数据库中207676-at芯片结果显示ONECUT2高表达组患者远期生存率下降(P0.001);GEPIA数据库中的分析结果同样显示ONECUT2高表达组患者其总体生存率(P0.05)和无病生存率(P0.01)下降。GEO数据库中GSE74577(P=0.005)、GSE70394(P=0.034)和GSE25146(P=0.036)三个数据集均显示H.pylori感染AGS和GES-1细胞系后ONECUT2表达上调。结论 ONECUT2在胃癌中高表达,且与胃癌一类致癌原H.pylori感染相关。ONECUT2高表达组患者远期生存率下降,表明其与胃癌发生发展密切相关,可能成为胃癌治疗的新靶点。     

LHPP在人胃腺癌组织中的表达及意义

目的通过检测LHPP(phospholysine phosphohistidine inorganic pyrophosphate phosphatase)在人胃腺癌组织和胃腺癌细胞系,以及幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)感染正常胃上皮细胞系后的表达水平,评估LHPP表达及LHPP与胃腺癌的关系。方法 (1)使用TCGA(The Cancer Genome Atlas)数据库和GEO(Gene Expression Omnibus)数据库中的胃腺癌基因表达数据,分析LHPP在胃腺癌组织和正常胃黏膜组织中的表达差异。(2)选取2017年3月至2018年5月行胃部分切除术或全胃切除术的41例胃腺癌患者,取胃癌组织及匹配的正常胃黏膜上皮组织,应用免疫组化检测LHPP在胃腺癌组织和正常胃黏膜组织中的表达差异。(3)取常规传代培养的第三代正常胃黏膜上皮细胞系GES-1和胃腺癌细胞系AGS,qRT-PCR检测两组LHPP基因表达差异。(4)应用H.pylori P12标准菌株以感染复数(multiplicity of infection,MOI)50感染GES-1细胞系6、12、18和24 h后,Western blot检测各个时间点LHPP和H.pylori毒力蛋白CagA表达量。结果 TCGA数据库中的LHPP表达数据表明LHPP在胃腺癌中表达下调(t=7.064,P0.0001),来自GEO数据库中GSE65801表达数据的芯片测序结果得到相同的结论(P=0.001)。免疫组化证实LHPP在低分化胃腺癌中低表达,且表达与分化程度相关(χ~2=5.559,P=0.018),而与性别(χ~2=2.304,P=0.129)、年龄(χ~2=0.001,P=0.986)、浸润深度(χ~2=1.007,P=0.316)、淋巴结转移(χ~2=0.693,P=0.405)及肿瘤分期(χ~2=0.003,P=0.953)不相关。LHPP在胃腺癌细胞系AGS中表达低于正常胃上皮细胞系GES-1(t=10.38,P=0.005)。H.pylori感染GES-1细胞后LHPP表达随着感染时间延长总体有升高趋势。结论 LHPP在胃腺癌中低表达并与腺癌分化程度相关,有望成为胃腺癌诊断治疗的新靶点。     

妊娠期肝内胆汁淤积症256例临床分析

目的：探讨改善妊娠期肝内胆汁淤积症患者围生结局及围生儿预后的方法。方法：对2006年3月．2011年3月在我院住院分娩的256例ICP患者及从我院住院无并发症正常分娩的10112个患者中随机抽取的256例患者的产检情况、分娩方式、围生儿结局进行回顾性分析。结果：ICP组与对照组在分娩方式、产后出血、早产、新生儿窒息、羊水粪染、圉产儿死亡等方面比较差异均具有统计学意义（P〈0．05）;产检组与未检组在产后出血、早产、新生儿窒息、羊水粪染、围产儿死亡等方面比较差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：妊娠期肝内胆汁淤积症可增加早产、胎儿宫内窘迫、新生儿窒息、产后出血发生率,重视产前检查和孕期保健,对ICP患者做到早发现、早诊断、早治疗,选择适当分娩方式、适时终止妊娠,对改善围生结局及围生儿预后有积极的意义。