RNAi靶向VP2基因抑制中蜂囊状幼虫病毒在中华蜜蜂幼虫体内复制研究

中蜂囊状幼虫病(Chinese sacbrood disease,CSBD)是造成中华蜜蜂患病死亡的主要原因之一,目前尚无有效的治疗方法。为了研究靶向中蜂囊状幼虫病毒(Chinese sacbrood virus,CSBV)结构蛋白VP2基因的siRNA介导的RNA干扰(RNA interference,RNAi)作用和其对CSBV在中华蜜蜂幼虫体内复制的影响,设计合成针对CSBV VP2基因的特异性siRNA,以100 nM的浓度与pEGFPN1-VP2-CSBV融合表达载体共同转染至293T细胞中,通过荧光显微镜和流式细胞仪观察和分析siRNA在体外对CSBV VP2基因表达的干扰效果。同时,将siRNA(1μg/μL)和1×10~7拷贝数的CSBV共同饲喂2日龄中华蜜蜂幼虫,检测幼虫体内CSBV拷贝数和幼虫存活率,研究siR-NA对中华蜜蜂幼虫体内CSBV复制的影响。荧光结果显示,在293T细胞中siRNA能抑制CSBV VP2蛋白的表达,并且通过流式细胞仪检测分析发现干扰效果接近40%。幼虫饲喂实验表明,饲喂siRNA组在各时间点幼虫体内CSBV拷贝数均低于CSBV对照组,且在摄入siRNA后感染CSBV的幼虫存活率明显上升,与CSBV组差异极显著(P<0.01)。通过本研究,证明了针对CSBV结构蛋白VP2基因的特异性siRNA能够介导产生RNAi,影响CSBV在中蜂体内的复制,为深入研究CSBV VP2基因的功能和研发抗CSBV生物制剂提供了理论基础。     

生物炭影响作物生长及其与化肥混施的增效机制研究进展

利用秸秆型生物炭进行还田改土不仅具有提升作物产量的潜力,而且能够产生明显的环境效益,现已成为当今国内外农业领域的研究热点.本文综述了近年来国内外有关生物炭添加影响作物生长的分子调控机制研究,尤其关注了生物炭与作物根系的互作效应;介绍了生物炭与化肥混施的生物学效应及可能的增效机制;展望了今后的研究方向,以期促进我国相关领域的研究.国内外的最新研究表明:生物炭土壤添加改善植物生长的关键是生长素相关信号转导分子,通过促进植物细胞扩增、细胞壁松弛、水及营养的转运等相关基因的表达,有利于植物的新陈代谢及生长.生物炭及其与根系的相互作用能够直接或间接地影响土壤物理、化学、生物因子,从而在炭、肥互作增效过程中起主导调控作用.     

Er,Cr:YSGG激光照射对牙周病牙根面的影响

目的:观察不同能量输出的Er,C r:YSGG激光照射对牙周病牙根面的影响,探讨Er,C r:YSGG激光用于牙周治疗的可行性和有效性。方法:选择因牙周病松动Ⅲo而拔除牙12颗,随机分3组,每组4颗。分别以1.5 W、2.0 W、2.5 W激光照射。扫描电镜(SEM)观察各组牙根表面和纵剖面。结果:低倍镜下各组根面改变无明显差异,表面干净,粗糙程度均匀,未见明显弹坑状痕迹;高倍镜下1.5 W激光照射组显示根面粗糙程度更均匀一致,无弹坑状改变,无熔融、炭化迹象,未见牙本质小管暴露。结论:Er,C r:YSGG激光能有效去除牙周病牙根面玷污层及病变牙骨质,根面无熔融、炭化等改变。1.5 W激光照射组优于2.0 W组和2.5 W组。     

中华蜜蜂热休克蛋白70的克隆、表达及中蜂囊状幼虫病毒感染后表达差异分析

[目的]本研究旨在明确中华蜜蜂Apis cerana cerana热休克蛋白70 (Heat shock protein 70,HSP70)与中蜂囊状幼虫病毒(Chinese sacbrood virus,CSBV)的关系.[方法]首先根据NCBI上已公布的中华蜜蜂HSP70的全基因(NO.MH122655.1)序列,设计特异性引物,提取3日龄中华蜜蜂幼虫总RNA,通过RT-PCR方法获得HSP70基因,并通过生物信息学软件进行分析;其次将其克隆到原核表达载体pET-32a中,转化入大肠杆菌BL21(DE3)进行蛋白表达,并制备重组蛋白,将纯化的重组蛋白免疫小鼠制备多克隆抗体;最后利用制备多克隆抗体作为一抗,通过Western-blot方法检测CSBV感染中华蜜蜂前后HSP70在幼虫体内的变化.[结果]成功获取中华蜜蜂HSP70蛋白的全基因,其核苷酸序列全长为1833 bp,生物信息学分析后,发现其编码蛋白存在7个抗原表位.利用原核表达系统,成功获得大小约87 ku的重组蛋白HSP70,免疫小鼠后获得多克隆抗体,经Western-blot分析能与标签蛋白发生特异性反应;对感染CSBV前后蜜蜂体内HSP70蛋白检测发现感染后HSP70表达水平显著提高.[结论]通过原核表达系统,成功表达中华蜜蜂HSP70基因和HSP70多克隆抗体,并证实CSBV感染后影响中华蜜蜂体内HSP70蛋白表达量的改变,为深入研究HSP70功能提供了帮助.     

去甲基万古霉素菌种低温冷冻、冷干保藏条件优化及10 年菌种保藏效果

【目的】针对去甲基万古霉素产生菌不耐保藏的问题,改进菌种保藏方法,对超低温液氮保藏、-80°C低温冷冻保藏、冷干保藏方法跟踪考察10年保藏稳定性,评价不同保藏方法对去甲基万古霉素产生菌的保藏适用性。【方法】采用甘油作基础保护剂进行超低温液氮保藏和-80°C低温冷冻保藏,采用脱脂牛奶作基础保护剂进行冷干保藏,针对超低温液氮保藏进行降温速率考察,研究非渗透性冷冻保护剂海藻糖、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)等对3种保藏方法的冻存影响,对优选出的保藏方法进行10年跟踪考察。【结果】3种保藏方法冻后菌种存活率依次为:-80°C低温冷冻保藏超低温液氮保藏冷干保藏。液氮保藏最适降温速率为快速冷冻。优选出最佳保护剂配方:超低温液氮保藏为甘油8.0%,海藻糖3.5%;-80°C低温冷冻保藏为甘油6.0%,PVP 5.0%;冷干保藏为脱脂牛奶,6.0%海藻糖。采用优化保藏条件,液氮保藏10年存活率稳定在70.6%,菌种发酵水平为入藏水平的92.9%。【结论】在优化条件下,尤以超低温液氮保藏适合于去甲基万古霉素产生菌长期保藏。     

拟南芥钙调素结合蛋白参与胁迫响应的研究

采用实时荧光定量RT-PCR和Northern blotting技术检测了野生型拟南芥中CBP60g基因对丁香假单胞菌和非生物胁迫的响应,并对丁香假单胞菌接种后,野生型拟南芥、cbp60g-1突变体和CBP60g过表达转基因植物中抗逆相关基因的表达变化进行检测。结果显示:(1)在野生型拟南芥中CBP60g基因的表达能被丁香假单胞菌、高盐、冷和机械损伤所诱导。(2)经丁香假单胞菌诱导后病程相关基因PR5和AIG1的表达在过表达转基因植物中明显高于野生型。(3)受干旱和ABA诱导的AtMYB2基因的表达在过表达转基因植物中也高于野生型。研究表明,CBP60g同时参与了拟南芥对生物和非生物胁迫响应。     

酱驴肉辐照贮藏技术研究

目的：分析探讨γ 射线辐照处理对酱驴肉的贮藏效果，建立适宜的辐照加工工艺参数。方法：采用不同剂量的60Coγ 射线对铝箔袋真空包装酱驴肉进行辐照处理，分析测定室温贮藏过程中，样品菌落总数、挥发性盐基氮等品质指标的变化。结果：2.0k～10.0kGy的不同辐射剂量处理能够有效杀死肉品表面污染微生物，抑制贮藏过程中菌落总数的增加，剂量越大杀菌效果越好，同时减缓了样品pH值上升和挥发性盐基氮含量的增加，但是对样品的色泽指标（L*值、a*值、b*值）和质构指标硬度、粘聚性的影响作用不明显。     

曲美他嗪与稳心颗粒联合治疗不稳定性心绞痛疗效观察

目的:探讨曲美他嗪与稳心颗粒联合治疗不稳定性心绞痛临床疗效。方法:选取我院2011年6月-2012年6月不稳定性心绞痛患者150例,随机分为治疗组和对照组。对照组仅给予曲美他嗪治疗;治疗组给予曲美他嗪与稳心颗粒联合治疗。观察两组临床疗效、治疗前后心绞痛持续时间及发作次数、心电图改善情况及不良反应。结果:治疗组总有效率为86.8%,对照组总有效率为49.3%,两组疗效比较,差异具有统计学意义(P0.05);治疗组心电图总有效率为89.33%,对照组总有效率为72.00%,两组疗效比较,差异具有统计学意义(P0.05);治疗组心绞痛发作次数、持续时间、血液流变学指标较治疗前有显著下降(P0.05),较对照组有明显差异(P0.05)。两组患者治疗期间尿常规、血常规、肾功能、肝功能及电解质均未见明显变化,且两组患者不良反应差异无统计学意义(P0.05)。结论:曲美他嗪与稳心颗粒联合治疗不稳定性心绞痛临床疗效确切,具有很大临床意义。