| 中华蜜蜂热休克蛋白70的克隆、表达及中蜂囊状幼虫病毒感染后表达差异分析 |
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| 引用本文： | 岳金金,马跃宇,王琛,张溪研,费东亮,马鸣潇.中华蜜蜂热休克蛋白70的克隆、表达及中蜂囊状幼虫病毒感染后表达差异分析[J].应用昆虫学报,2021,58(5):1057-1064. |
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| 作者姓名： | 岳金金 马跃宇 王琛 张溪研 费东亮 马鸣潇 |
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| 作者单位： | 锦州医科大学,锦州121000 |
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| 摘 要： | 目的]本研究旨在明确中华蜜蜂Apis cerana cerana热休克蛋白70 (Heat shock protein 70,HSP70)与中蜂囊状幼虫病毒(Chinese sacbrood virus,CSBV)的关系.方法]首先根据NCBI上已公布的中华蜜蜂HSP70的全基因(NO.MH122655.1)序列,设计特异性引物,提取3日龄中华蜜蜂幼虫总RNA,通过RT-PCR方法获得HSP70基因,并通过生物信息学软件进行分析;其次将其克隆到原核表达载体pET-32a中,转化入大肠杆菌BL21(DE3)进行蛋白表达,并制备重组蛋白,将纯化的重组蛋白免疫小鼠制备多克隆抗体;最后利用制备多克隆抗体作为一抗,通过Western-blot方法检测CSBV感染中华蜜蜂前后HSP70在幼虫体内的变化.结果]成功获取中华蜜蜂HSP70蛋白的全基因,其核苷酸序列全长为1833 bp,生物信息学分析后,发现其编码蛋白存在7个抗原表位.利用原核表达系统,成功获得大小约87 ku的重组蛋白HSP70,免疫小鼠后获得多克隆抗体,经Western-blot分析能与标签蛋白发生特异性反应;对感染CSBV前后蜜蜂体内HSP70蛋白检测发现感染后HSP70表达水平显著提高.结论]通过原核表达系统,成功表达中华蜜蜂HSP70基因和HSP70多克隆抗体,并证实CSBV感染后影响中华蜜蜂体内HSP70蛋白表达量的改变,为深入研究HSP70功能提供了帮助.
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| 关 键 词： | 中华蜜蜂 热休克蛋白70 多克隆抗体 蛋白纯化 中蜂囊状幼虫病毒 |
Cloning and expression of hot shock protein 70 in Apis cerana cerana after infection with Chinese sacbrood virus |
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| YUE Jin-Jin,MA Yue-Yu,WANG Chen,ZHANG Xi-Yan,FEI Dong-Liang,MA Ming-Xiao.Cloning and expression of hot shock protein 70 in Apis cerana cerana after infection with Chinese sacbrood virus[J].Entomological Knowledge,2021,58(5):1057-1064. |
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| Authors: | YUE Jin-Jin MA Yue-Yu WANG Chen ZHANG Xi-Yan FEI Dong-Liang MA Ming-Xiao |
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