人完全性葡萄胎中c-myc的表达及意义

目的研究c-myc基因在人完全性葡萄胎中的表达及其意义。方法取人完全性葡萄胎30例,正常早孕流产标本10例,用SABC免疫组织化学染色方法,检测c-myc基因在两种组织中的表达情况,并采用图像分析技术,对正常早孕绒毛组和完全性葡萄胎组c-myc的表达情况进行对比分析。结果与正常绒毛相比,c-myc基因在完全性葡萄胎组织中的表达量和表达的空间特异性有明显不同。结论 c-myc基因可能与完全性葡萄胎的发生密切相关。     

神经上皮干细胞的分离培养及其体外分化特性的观察

目的探讨大鼠胚胎神经管神经上皮干细胞的分离培养条件,并观察其在体外的分化特性.方法采用显微解剖、机械吹打、无血清悬浮培养方法分离培养神经上皮干细胞,采用巢蛋白(nestin)免疫细胞化学染色技术检测神经上皮干细胞,用NSE和GFAP免疫组化染色检测并计数神经细胞和神经胶质细胞.结果大鼠胚胎神经管神经上皮干细胞在无血清培养基中可形成大量呈nestin抗原阳性细胞构成的神经球,经传代有血清培养后分化为NSE阳性和GFAP阳性细胞,其中NSE阳性细胞占细胞总数的47.7%,GFAP阳性细胞占细胞总数的39.8%.结论胎鼠神经管神经上皮干细胞在无血清培养中可增殖和传代,在有血清培养中可分化为神经细胞和神经胶质细胞,两者之比为47.7∶39.8.     

葡萄糖对神经干细胞缺氧性损伤保护作用的实验研究

目的探讨葡萄糖对神经干细胞缺氧性损伤的保护作用。方法分离培养小鼠胚胎11.5d神经干细胞。将三气培养箱的氧气浓度调至5%,以制备缺氧环境。分别在缺氧前后于无血清培养基中加入不同剂量的葡萄糖,同时设常氧常糖正常对照。通过计数克隆形成率和MTT法检测干细胞的存活和增殖情况,AnnexinⅤ-FITC/PI染色、激光扫描共聚焦显微镜观察和计算其凋亡率。结果缺氧前加入30 mmol/L葡萄糖,神经干细胞的存活率和增殖率较常糖缺氧组明显增高,但仍低于常糖常氧正常对照组。缺氧后再加入葡萄糖时,其保护作用不明显。结论缺氧前给予足够浓度的葡萄糖对神经干细胞的缺氧性损伤具有一定的保护作用。     

促红细胞生成素对神经干细胞缺氧性损伤保护作用的实验研究

目的观察外源性EPO对神经干细胞缺氧性损伤的保护作用,为缺氧缺血性脑损伤的治疗提供新思路。方法从孕11.5d（E11.5d）大鼠获得神经干细胞,经无血清培养基悬浮培养并传代,对所获细胞的自我增殖、自我更新及其多分化潜能进行检测。取传3代神经干细胞中添加不同剂量的EPO,在5%O2培养箱中培养120h。通过计数干细胞克隆形成率和MTT法检测神经干细胞的增殖情况。于含血清分化培养基中加入不同剂量的EPO,用NSE和GFAP免疫细胞化学染色观察神经干细胞的分化情况。采用AnnexinⅤ-FITC/PI染色,激光扫描共聚焦显微镜观察、检测细胞凋亡率。结果加入EPO后神经干细胞的克隆形成率和MTT检测的OD值显著增高,细胞凋亡率显著下降,NSE阳性细胞的比例明显升高,其作用随剂量增加而增大,50U/ml时作用最大。结论EPO对神经干细胞缺氧性损伤具有明显的保护作用,并可促进神经干细胞向神经元方向分化。EPO的这种作用随剂量增加而增大,50U/ml时达高峰。     

局灶性脑缺血后海马齿状回神经发生及其与血管内皮生长因子关系的研究

目的研究成年大鼠局灶性脑缺血后海马齿状回（DG）神经发生的情况及其与血管内皮生长因子（VEGF）的关系,探讨脑缺血后神经发生及其调控机制。方法通过大脑中动脉阻断法（MCAO）建立大鼠局灶性脑缺血模型,以5-溴-2-脱氧尿核苷（BrdU）标记增殖的神经前体细胞（NPCs）,用免疫组化及免疫荧光双标记法动态检测脑缺血后不同时间DG神经细胞增殖及其分化,同时观察增殖细胞表达VEGF及其受体情况。结果与对照组相比,缺血侧DG的BrdU阳性细胞数在脑缺血后1d开始增加,7d达高峰,28d接近正常水平;BrdU/TuJ1、BrdU/MAP-2阳性双标细胞数在脑缺血后14d开始增加,28d达高峰;BrdU/GFAP阳性双标细胞数则无明显变化;增殖的BrdU阳性细胞同时表达VEGF及其受体FLK-1。结论大鼠局灶性脑缺血可激活DG自体NPCs原位增殖、分化,增殖的细胞同时表达VEGF及其受体可能是脑缺血后神经发生增强的调节机制之一。     

钙离子与缺氧性神经干细胞凋亡的相关性研究

目的检测钙离子浓度在缺氧性神经干细胞凋亡过程中的变化,以探讨缺氧性神经干细胞凋亡的发生机制。方法从大鼠胚胎神经管获取神经干细胞,经无血清悬浮培养技术获得神经球。对所获神经球行干细胞克隆试验、Br-dU掺入标记试验、nestin、NSE和GFAP免疫荧光染色,以确认神经干细胞的生物学特性。三气培养箱予以缺氧干预,按缺氧程度分为5%O2组、10%O2组和正常对照组(20%O2),每个实验组又依缺氧干预时间的不同,分为24h、48h、72h、96h、120h5个亚组。用激光扫描共聚焦显微镜和Fluo-3荧光探针标记技术检测神经干细胞内钙离子浓度;采用An-nexinⅤ-FITC/PI检测细胞凋亡率。结果5%O2120h组和10%O2120h组中神经干细胞凋亡率显著高于正常对照组和其他缺氧干预组,并且伴随有胞内钙超载。结论细胞内钙超载可能是缺氧性神经干细胞凋亡机制中的一个重要环节。