低氧诱导大鼠内脏脂肪组织炎症状态对SePP1的影响

目的：既往研究显示SePP1具有一定的抗氧化作用,而随着年龄的增加机体逐步出现一个慢性低氧、炎症状态,我们通过4％O2浓度体外培养大鼠脂肪前体细胞模拟其体内的低氧状态,进而观察常氧（21％O2）及低氧（4％02）状态下大鼠脂肪前体细胞中炎症因子（IL-6,MCP-1,SePP1）水平的变化及不同状态下硒蛋白SePP1水平的变化。方法：取6—8周SD大鼠肾周脂肪前体细胞,分别于常氧（21％O2）及低氧（4％O2）状态下进行体外培养,诱导分化后采用油红0染色进行鉴定,至第三代后,分别采用PCR及Westem Blot技术检测两种状态下脂肪前体细胞中1L-6,MCP-1,SePPl基因及蛋白表达的不同变化,同时观察不同氧浓度对脂肪前体细胞增殖的影响。结果：4％氧浓度状态下培养的脂肪前体细胞中IL-6,MCP-1的基因及蛋白表达均明显高于正常氧浓度下的脂肪前体细胞,而SePP1的基因及蛋白表达均下降,且低氧状态下脂肪前体细胞增殖较常氧状态下加快。结论：低氧培养可进一步使机体内脏脂肪组织堆积加重,造成脂肪前体细胞的炎症状态,并且可导致SePP1的表达下降,而SePP1具有一定的抗氧化作用,与机体动脉粥样硬化等心血管疾病的发生、发展有一定的关联,本实验结论为通过干预体内SePP1的水平为靶点治疗动脉粥样硬化提供了一定的实验依据,为进一步研究SePP1在低氧状态下对动脉粥样硬化的影响及作用机制提供了一定的试验基础。     

硬脂酸修饰超氧化物歧化酶的制备及其性质研究

报道了一种修饰ＳＯＤ的方法。所得硬脂酸修饰ＳＯＤ比活力为每毫克蛋白１００００单位,经鉴定已达均一程度。测得其分子量为３５０００．修饰ＳＯＤ和天然ＳＯＤ在紫外光区的最大吸收均在２６５ｎｍ。修饰ＳＯＤ对温度、ｐＨ、蛋白酶水解的稳定性比天然ＳＯＤ增强,且免疫原性消除。在低浓度的某些有机介质中活性比在水中高。     

α-SMA在培养生长板软骨细胞中的表达

目的探讨α-SMA在原代培养生长板软骨细胞中的表达及传代培养对其表达的影响。方法分离、培养大鼠肋生长板软骨细胞(rat costochondral growth plate chondrocyte,RGC),免疫细胞化学(ICC)和Western blot分别对1-5代RGC中α-SMA的表达进行定性和半定量分析。结果原代培养的RGC不表达α-SMA,随着传代次数的增加,α-SMA阳性染色的细胞比例从原代的0增加到第5代的24.2±4.3%(n=3),Western blot结果与ICC结果一致。结论本研究首次发现原代培养的RGC并不表达α-SMA,随着RGC传代次数的增加,表达α-SMA的细胞比例和表达量不断升高。     

六种微藻的抗MRSA活性筛选

本文以琼脂扩散法为体外抗菌活性测定方法,研究了六种微藻(两种绿藻,三种硅藻和一种蓝藻)的不同溶剂提取物对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的抑制活性.结果表明,每种微藻的提取物对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌具有不同程度的抑制活性.其中,蓝隐藻、牟氏角毛藻和青岛大扁藻的提取物具有良好的抗菌活性.结论:微藻是一种新的开发抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌物质的潜在资源.     

南方红豆杉细胞悬浮培养条件优化研究

针对红豆杉细胞生长相对缓慢和培养褐化问题,本文通过正交实验和均匀实验方法并采用人工神经网络技术对南方红豆杉细胞悬浮培养条件进行优化,使细胞的生长速率和比生长速率有较大提高,并考察了细胞活性随时间的动态变化.     

甘薯若干性状遗传力的分析

本文比较了甘薯不同性状的遗传力,具有不同特征群体的遗传力,和不同重复次数条件下的遗传力;分析了参试品系的遗传变异系数和群体的环境变异系数对遗传力的影响;据此提出改进甘薯杂交育种选择过程的参考意见。     

LAG-3分子的研究进展

淋巴细胞活化基因-3(lymphocyte activation gene-3,LAG-3,CD223)是免疫球蛋白超家族的成员之一,是对淋巴细胞具有抑制作用的分子。LAG-3定位于人12号染色体,与CD4具有密切关系。研究发现猪LAG-3分子的结构和表达模式在哺乳动物物种中是共有的,并且可溶性的猪LAG-3对控制人-猪异种T细胞免疫反应有作用。LAG-3分子主要表达于活化的NK细胞、T淋巴细胞表面,与HLA-II高亲和力结合。Tr细胞是具有调节调节功能的T细胞亚群,发现Tr细胞表面标志CD49b和LAG-3可在人和小鼠Tr1细胞表面表达。CD49b和LAG-3的发现,使得在体内对Tr细胞进行跟踪具有可行性,纯化Tr1细胞作为一种细胞治疗方法具有可行性。LAG-3通过对胰腺中抗原特异性T细胞增殖的选择性抑制,可以使用LAG-3作为1型糖尿病病情进展的一种新的替代标记,检测LAG-3分子可能成为T细胞定向免疫治疗效果评估的一种方法。肿瘤浸润的CD8+T细胞表面LAG-3表达上调,LAG-3的抑制作用在HCC的细胞免疫应答中发挥着重要的作用,可见阻断LAG-3分子的表达有可能成为治疗肿瘤的新方法。慢性病毒感染性疾病时常常发生T细胞衰竭,T细胞通过LAG-3分子的限制作用和MHCⅡ类信号分子的表达其抑制功能,这有利于慢性病毒感染性疾病的治疗。疟原虫感染增加了抑制性受体LAG-3的表达,疟原虫感染引起的特异性T细胞功能衰竭可通过抑制性疗法来治疗。LAG-3的表达可能有利于黑色素瘤的增殖,阻断LAG-3-MHCⅡ类分子相互作用的化合物可用于黑色素瘤的治疗。此外,使用LAG-3毒性抗体选择性的靶向激活T细胞可阻碍T细胞参与的迟发型超敏反应。     

水稻早衰突变体LS-es1的基因定位及候选基因分析

衰老是植物发育末期自主发生且不可逆的适应性反应, 叶片早衰相关分子机制研究对水稻(Oryza sativa)遗传改良以及抗衰老品种培育有重要意义。LS-es1是通过EMS诱变粳稻品种TP309获得的稳定遗传的早衰突变体。对LS-es1及其野生型的表型观察和生理生化分析表明, LS-es1叶片中积累了大量活性氧且细胞死亡更多, 同时LS-es1与产量相关的农艺性状均显著下降, 这也验证了LS-es1早衰的特征。对LS-es1及其野生型幼苗进行外源激素处理, 结果表明LS-es1对水杨酸(SA)、脱落酸(ABA)和茉莉酸甲酯(MeJA)更敏感。用图位克隆方法将LS-es1基因定位在水稻第7号染色体长臂46.2 kb区间内, 该区间共包括8个开放阅读框(ORF)。对该区间内的基因进行生物信息学分析, 结果发现Os07g0275300和Os07g0276000两个候选功能基因与早衰途径相关, 并且这2个基因的表达量在野生型和突变体中差异较大。研究结果为进一步克隆LS-es1基因并深入研究其生物学功能奠定了基础。     

桦褐孔菌膜二肽酶在巴斯德毕赤酵母中的分泌表达

本研究利用巴斯德毕赤酵母Pichia pastoris蛋白表达体系表达了药用担子菌桦褐孔菌的一个二肽酶基因。该二肽酶基因编码区全长1814bp,包含6个内含子,编码465个氨基酸。生物信息学分析发现,二肽酶基因编码的蛋白中不含信号肽序列,但在第55–77位氨基酸之间存在一个跨膜结构。将含跨膜结构和去跨膜结构蛋白的cDNA序列分别克隆到酵母分泌型表达载体pPICZαA上,电转化至巴斯德毕赤酵母X-33中,用1%(V/V)甲醇诱导重组菌株表达目标蛋白,采用SDS-PAGE和Western-blot检测表达蛋白。结果显示,巴斯德毕赤酵母可表达含跨膜结构的完整基因,但目标蛋白不能分泌到胞外,存在于破碎细胞的沉淀中,且没有催化活性;而去跨膜结构的蛋白则可分泌表达到胞外,并具有催化活性。Ni-NTA纯化去跨膜结构的桦褐孔菌二肽酶浓度可达0.12mg/mL,并发现其在pH 7.3、反应温度50℃、反应时间2h的条件下,以Gly-Gly为底物时,其比活为433U/mg。同时检测到其对Ile-Leu、Trp-Trp和Phe-Phe具有较高的水解活性。     

半乳糖 -3-O-磺酰基转移酶-2 与肿瘤转移关系的研究

半乳糖 -3-O- 磺酰基转移酶 -2 (GP3ST) 是一个新近克隆的磺酰基转移酶,其生物学功能还不明确 . GP3ST 在肿瘤细胞和肿瘤组织中差异性表达,以及催化所形成的磺酰化糖链与肿瘤转移潜能密切相关,是首次研究报道 . 在高转移潜能的肿瘤细胞中, GP3ST 及其产物的表达明显高于低转移潜能的细胞,在伴有淋巴结转移的喉癌组织中, GP3ST 的高表达率也明显高于无淋巴结转移的喉癌组织 (P < 0.05) ,而且在喉癌组织中的表达也明显高于相对应的癌周组织 . 利用 RNAi 技术下调肝癌细胞 SMMC7721 中 GP3ST 的表达,观察到稳定转染 RNAi/GP3ST 的细胞形态发生明显的改变,由多边形转变为近似梭形,与 TNF-α刺激后的 HUVEC 和 sL- 选凝蛋白的黏附能力下降 . 进一步研究表明, GP3ST 表达的下降能抑制细胞中的整合蛋白αV 亚基的表达,而β3 亚基表达无改变,同时在高转移细胞株中αV 的表达也明显高于低转移细胞株,与 GP3ST 表达的差异性相一致 . 上述结果充分说明 GP3ST 催化合成的糖链可通过调节肿瘤细胞的黏附性和影响整合蛋白αV 亚基的表达参与肿瘤转移 .