猪流行性腹泻抗原基因在乳酸菌中的表达及优化

目的：优化猪流行性腹泻抗原基因COE在乳酸乳球菌中的表达。方法：将表达猪流行性腹泻抗原基因COE的重组乳酸菌活化,酶切鉴定其稳定性,然后设计实验分别从pH值、温度、Nisin浓度、诱导时间、菌体密度等条件对COE表达进行优化,SDS-PAGE检测表达效果。结果：COE在乳酸乳球菌中的最佳表达条件为pH 7.0、T（温度）=30℃、Nisin=2ng/mLt、（诱导时间）=4h和OD600=0.5,在以上条件下相对表达量分别达到了15.48%、15.05%、15.82%、14.72%和20.47%。在最佳表达条件下得到SOE的相对表达含量达到21%。结论：COE重组质粒稳定,其在乳酸菌中经优化表达后可为今后研制猪流行性腹泻乳酸菌疫苗提供数据。     

动物趋同表型分子遗传和演化机制的研究进展

远缘物种间相似性状的发生,称为趋同进化,在自然界中是比较常见的.这些趋同表型的发生被广泛认为是通过提高适合度促进了远缘物种对所处相同或相似环境的适应性.越来越多的研究表明,相似或相同的遗传变异对趋同表型的起源和演化起了关键性作用.随着基因组数据的不断增加,一些研究者从基因组范围系统性分析了趋同表型与趋同的分子变异之间的关系,全面解析了趋同表型的分子演化机制,鉴定出了许多与趋同表型密切相关的经历趋同演化的基因.尽管如此,从严格意义上检测分子水平上的趋同变异是否受到达尔文自然选择的作用还是非常困难的.除了需要满足趋同位点能够导致基因功能的趋同变化以外,更为关键的是需要证明这些分子层面的趋同确实能够导致趋同表型的产生,并显著增加经历趋同演化物种的适合度.     

端粒酶抑制剂6-硫代-2’-脱氧鸟苷诱导肿瘤细胞免疫原性死亡

该文主要探讨端粒酶抑制剂6-硫代-2’-脱氧鸟苷(6-Thio-2’-deoxyguanosine, 6-Thio-dG)是否诱导肿瘤细胞免疫原性死亡(immunogenic cell death, ICD),并揭示所产生的ICD的免疫应答特征,为利用6-Thio-d G诱导肿瘤细胞ICD开展免疫治疗提供基础。首先,用不同浓度的6-Thio-d G处理小鼠黑色素瘤B16-F10、结肠癌CT26、宫颈癌相关肿瘤TC-1和乳腺癌4T1细胞,在不同时间点用显微镜观察细胞死亡情况及形态特征;利用乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase, LDH)试剂盒定量分析细胞死亡情况;以检测试剂盒以及酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)分析细胞死亡过程中免疫介质释放情况;免疫荧光染色实验考察钙网蛋白(calreticulin, CALR)向细胞膜的迁移定位。进一步,建立皮下移植TC-1小鼠肿瘤模型,当肿瘤长至4～5 mm时,注射6-Thio-d G对荷瘤小鼠进行治疗性干预,通过酶联免疫斑点技术(enzyme-linked imm...     

大肠杆菌表达的重组猪β2微球蛋白二级结构的圆二色谱分析

摘要：【目的】研究巴马小型猪β2微球蛋白（β2m）的结构和功能。【方法】亚克隆巴马小型猪β2m的成熟肽部分,并构建与pMAL-p2X的重组质粒,转化大肠杆菌TB1并诱导后,融合表达蛋白分别经过 Western-blot、纯化及Factor Xa切割,分离纯化单体蛋白。圆二色谱(circular dichroism spectrum, CD)测定蛋白的二级结构。【结果】重组表达的融合蛋白MBP-β2m大小为52.1 kDa。切割后去除MBP的单体蛋白大小为10.6 kDa。圆二色谱分析单体蛋白β2m二级结构     

北京市区域医疗联合体系建设问题探究

为解决城乡和区域间医疗资源配置不均衡、不合理,基层医疗机构服务能力薄弱等问题,北京市2013年开展了区域医疗联合体系建设工作,虽然取得了一定的成绩,但从实践情况看来,政策实施的效果与预期还存在一定差距。以北京市区域医疗联合体系为研究对象,通过理论、实例相结合的方式,分析其在运行过程中出现的问题及造成这些问题的原因,为北京市区域医疗联合体系更好地发挥作用提供政策建议。     

托佩克猪SLA-2基因克隆及功能区生物信息学分析

为研究托佩克猪SLA-2基因功能,设计引物,克隆了该品系猪SLA-2基因(SLA-2-TPK)cDNA全长序列,并通过分子生物学软件分析其基因特征.结果显示,SLA-2-TPK cDNA全长为1 119 bp,其中3-1 097为编码区,共编码364个氨基酸,分别在第125、188、227和283位置出现半胱氨酸残基,含有两对链内二硫键.氨基酸同源性分析显示,SLA-2-TPK与其他SLA-2、SLA-3和SLA-1序列的同源率分别为86.0％-98.9％、85.0％-89.4％和84.2％-91.7％.系统进化树显示,SLA-2-TPK与韩国品系猪DQ883211遗传距离较近:各功能区分析,SLA-2-TPK与人HLA-A2和小鼠H-2K分子结构相似,且保留了人HLA-A2基因的部分功能位点.结果表明,SLA-2-TPK是典型的SLA-2等住基因,在进化程度上接近于部分韩国品系猪.