应用电泳滴定曲线预测离子交换层析法的最佳pH条件

电泳滴定曲线(Electrophoretic TitrationCurve,ETC)是近年引人注目的一项新技术.它组合等电聚焦-电泳技术进行制备,即在含有两性电解质的聚丙烯酰胺(PAA)胶板上,经预聚焦形成pH梯度后,胶板转90度再经一次电泳,使样品蛋白质按其表面电荷的性质和密度在pH梯度中迁移泳动形成ETC. ETC的分辨力高,可用于蛋白质的纯度检测,包括单一氨基酸或蛋白质突变体;用于蛋白质表面电荷特性和等电点的检测;用于选择各     

电泳用水平聚丙烯酰胺干胶研制成功

聚丙烯酰胺凝胶电泳是快速低廉的生化分析技术。由于凝胶具有三维网状结构,电泳时兼具有分子筛效应和电荷效应,从而比其他电泳的分辨力大为提高,并在此基础上又发展了ＳＤＳ聚丙烯酰胺电泳、梯度胶电泳和等电聚焦聚丙烯酰胺电泳等技术。除大量用于各种蛋白质分析、分型...     

电泳滴定曲线及其应用

电泳滴定曲线法是一种双向电泳法,第一向等电聚焦,以获得固定的pH梯度;然后加样,进行第二向电泳,得到的电泳滴定曲线图,直接反映了在各种pH下,各蛋白质组分之间在迁移率上的差异。该法在选择蛋白质分离纯化的最佳条件;研究蛋白质的突变;研究分子间相互作用等领域,已表现出广阔的应用前景。     

一种简便的薄层等电聚焦分析电泳装置

薄层等电聚焦分析电泳是近年来发展起来的一种高分辨率的蛋白质分析技术。等电聚焦是利用两性载体电解质,在外加电场的作用下,形成稳定的pH梯度,使得蛋白质、酶及多肽按其各自不同的等电点聚焦在相应的pH位置上,以便达到分离的目的。薄层等电聚焦分析电泳可以在一块薄层胶片上分析多个样品,操作方便、分辨率高,所以被人们广泛地采用。本文介绍一种简便的薄层等电聚焦分析电泳装置,它适用于我们现有的一般实验室条件,勿需进口成套贵重设备,同样能得到满意的分析结果。 1.电泳装置的配备我们自制了简易的电极架(图1)。上架用     

目前最高分辨率的电泳──固相pH梯度等电聚焦

固相pH梯度等电聚焦是国际上80年代的新型电泳技术.利用一系列具有弱酸和弱碱性质的丙烯酰胺衍生物滴定时,在滴定终点附近形成的pH梯度并参与丙烯酰胺的共价聚合,从而形成固定的不随环境电场等条件变化的pH梯度,该方法具有比传统载体两性电解质等电聚焦更高的分辨率、更大的上样量.可用于分析和制备相近pI的蛋白质,多肽等.     

油松雌性不育系球果蛋白质双向电泳技术的建立

本文建立了油松雌性不育系雌球果蛋白质组研究中的双向电泳技术.第一向采用固定pH值梯度(IPG)胶条在IPGphorTM等电聚焦仪上进行等电聚焦,第二向在恒功率且恒温条件下于Ettan-DALTTMⅡ高通量电泳仪上进行SDS-PAGE电泳,以银染和考马斯亮蓝两种方法染色.通过对全蛋白的提取、胶条pH值和胶条肿胀等技术环节的优化和比较,得到了重复性很高,分离效果良好的蛋白质双向图谱.     

聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦

等电聚焦也曾称为等电点分离、等电点划分、等电点分析、聚焦电泳等。1966年瑞典学者Vesterberg和Svernsson首先合成了两性载体电解质,并成功地用于肌红蛋白分离,使这方法具有实用价值。等电聚焦的先决条件就是要求有稳定的pH梯度。按照支持pH梯度的介质不同,可     

双向电泳技术应用于消化道粘膜组织并优化

目的：初步建立并优化了组织蛋白质组分析所需的双向电泳技术;提高其分辨率及重复性。方法：以小鼠肠组织为例,并以固相pH梯度为第一向的双向电泳的关键因素与环节;如样品处理,上样量,电泳参数,凝胶浓度和SDS凝胶电泳染色方法等进行一系列的优化。结果与结论：以固相pH梯度-IPC胶条（pH3～10）进行第一向等电聚焦;以SDS均一胶（13%）的垂直电泳为第二向,成功地得到了肠组织的双向电泳图谱。     

用银染色显示的rHuIFN-αD垂直板聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦电泳测定法

本文报道了用聚丙烯酰胺垂直凝胶板进行蛋白质等电聚焦的方法,用改进的银染法使测定灵敏度达到ng水平。通过分析蛋白质等电聚焦的影响因素,建立了稳定的电泳条件,并用该方法发现了重组人αD型干扰素(rHu IFN-αD)基因表达产物的带电荷不匀一性。     

油松雌性不育系球果蛋白质双向电泳技术的建立

本文建立了油松雌性不育系雌球果蛋白质组研究中的双向电泳技术。第一向采用固定pH值梯度（IPG）胶条在IPGphorTM等电聚焦仪上进行等电聚焦,第二向在恒功率且恒温条件下于Ettan-DALTTMⅡ高通量电泳仪上进行SDS-PAGE电泳,以银染和考马斯亮蓝两种方法染色。通过对全蛋白的提取、胶条pH值和胶条肿胀等技术环节的优化和比较,得到了重复性很高,分离效果良好的蛋白质双向图谱。     

等电聚焦

蛋白质分子是带有电荷的两性生物高分子,其正、负电荷的数量是随分子所在环境的酸碱度而变化的。在电场存在下的一定pH缓冲液中,带正电荷的蛋白质分子将向负极移动;带负电荷的蛋白质分子将向正极移动,这就是电泳过程。在某一pH下,蛋白质分子在电场中     

饭豇豆凝集素等电点的快速测定

目前多数人采用凝胶等电点聚焦电泳法测定蛋白质等电点(pI)。此法受多种因素的影响,加之所用试剂Ampholyte价格昂贵,故使用不甚方便。根据溶液pH值大小直接影响蛋白质和离子交换剂束缚力的原理,Yang(1985)报道了一种pI测定方法。我们     

等电聚焦载体两性电解质的合成

等电聚焦是一种分离和鉴定蛋白质的新技术。它能迅速而准确的测定蛋白质的等电点;并根据蛋白质等电点的不同而把蛋白质混合物中各个成份互相分离开来。此技术要求在正、负极之间有一个从酸到碱连续变化的pH梯度。形成这种梯度的物质称为载体两性电解质(瑞典LKB厂专利商品名为“Ampholine”),它实际上是一系列多氨基多羧酸的混合物。对此载体两性电解质要求:     

植物原生质体质膜表面电荷性质的研究——Ⅰ.pH及某些酶制剂对元麦叶肉原生质体电泳率的影响

用细胞电泳方法研究了pH 及胰蛋白酶,脂—蛋白脂酶、碱性磷酸酶等酶制剂对元麦叶肉原生质体电泳率的影响。结果表明,新鲜制备的元麦叶肉原生质体表面具负电性,但在低pH(<2.8)条件下其表面具正电荷;当pH>2.8时,其表面电性才由具正电性转变为具负电性。上述三种酶制剂处理原生质体后,均能改变原生质体的电泳率,随酶浓度增高均使原生质体的电泳速度减慢。文章并对所获得的结果在阐明质膜表面电荷的化学特性上的意义进行了讨论。     

薄层等电聚焦技术

等电聚焦(Isoelectrofocusing,缩写IEF或EF)是1966年由瑞典科学家Harry Rilbe和Olov Vesterbery建立的一种高分辨的蛋白质分离分析新技术.它的基本原理是利用蛋白质分子或其它两性分子的等电点的不同在一个稳定的、连续的、线性的pH梯度中进行蛋白质的分离分析.     

北京鸭乳酸脱氢酶同工酶的研究 Ⅰ.薄层等电聚焦电泳分离北京鸭LDH同工酶

采用薄层等电聚焦电泳方法,把北京鸭乳酸脱氧酶同工酶区分为11条电泳区带,发现它们是一组等电点十分邻近的、范围在pH 6.0至8.0的中性蛋白质。     

康氏木霉C1酶的简捷提纯法及酶性质的研究

康氏木霉(Trichoderma Koningii)白色变异菌株AS 3．4001的粗酶制剂,经Sephadcx G-75凝胶过滤柱脱盐并除去大量杂蛋白,然后通过DEAE—scphadcx A一50离子交换层析,用0—0.5M Nacl梯度冼脱即得c。酶纯品。全程序仅需二天时间。 经聚丙烯酰胺凝胶电泳及SDS电泳鉴定均为单一带。此酶的分子量用SDS电泳及凝胶过滤法测定分别为58,000和5 2,000,用等电聚焦测其等电点为pH4 0。作用最适pH也为q o。此酶有较好的稳定性,在酸性pH(2 2)、碱性pH(8 0)及中性(水)中均能保持较长时间而不丧失活力。     

蛋白质组双向电泳实验中一些常见失误的分析

从以固相pH梯度等电聚焦为第一向,SDS-PAGE电泳为第二向进行的蛋白质组双向电泳实验中挑选了一些常见的硝酸银染色2-DE失误图谱,将它们进行分类,初步分析造成各类失误的可能原因,探讨相应的解决方法和总结实验操作中应该注意的事项．     

大肠癌双向电泳分离条件的建立及其初步分析

采用固相pH梯度等电聚焦为第一向,SDS-PAGE垂直电泳为第二向建立了大肠癌双向电泳分离技术实验条件,对样品的处理、水化、等电聚焦、凝胶平衡等步骤进行了优化,成功地获得了大肠癌分辨率高、重复性好的双向电泳图谱.癌组织样品经3次重复实验共获得蛋白质斑点数1 186±46个,蛋白质斑点位置在IEF方向平均偏差为1.67±0.29 mm,在SDS-PAGE方向为1.41±0.16 mm,蛋白质表达量的相对标准差为6.67 %±2.25 %.经ImageMaster 2D Elite软件初步分析后发现了一些差异表达的蛋白质.     

大腹园蛛(Araneus ventricosus)粗毒双向电泳及质谱分析

以大腹园蛛粗毒为材料,用固相pH梯度等电聚焦IPG(immobilized pH gradient)和SDS-PAGE(sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis)获得蛋白质组双向电泳图谱,经Bio-Rad公司的PDQUEST软件进行图像分析,检测到500个左右的蛋白质点．对其图谱的部分蛋白质点酶解后使用Micromass公司的ESI-Q-TOF进行了鉴定．得到了质量较好的MS／MS数据．然后将其在MS-Fit中的genepeptide数据库和Mascot的Swissprot中进行搜索从而对蛋白质点进行鉴定．目前初步获得5个组分的鉴定结果．