中华眼镜蛇咬伤导致局部组织坏死的猪模型构建

目的 通过广西巴马小香猪建立中华眼镜蛇咬伤导致局部组织坏死的动物模型. 方法 选择健康的广西巴马香猪12头,分为蛇毒组和对照组各6头,每头猪按照本课题组前期获得的半数致死量为剂量依据,蛇毒组以浓度5 mg/kg,剂量0.2 ml/kg于实验猪右后侧大腿肌肉注射,对照组注射等量生理盐水.注射蛇毒后观察实验猪的生物学行为和...     

呈现新型冠状病毒RBD抗原病毒样颗粒的表达与鉴定*

目的:以乙型肝炎病毒核心抗原HBcAg为载体,构建呈现新冠病毒刺突蛋白受体结合域的病毒样颗粒,并鉴定其免疫原性,为新冠病毒疫苗的开发提供新思路。方法:在乙型肝炎病毒核心蛋白氨基酸编码序列第78和81位插入新冠病毒刺突蛋白受体结合域(RBD),并通过柔性linker(G4S)3进行连接,序列优化后将融合基因克隆到原核表达载体pET-28a(+),转化表达菌Rosetta,在自诱导培养基中诱导表达,菌体破碎后经蔗糖密度梯度离心,透析浓缩的方法纯化病毒样颗粒。SDS-PAGE、Western blot、透射电子显微镜检测和鉴定VLPs。将制备的VLPs与佐剂等比例混合经皮下免疫BALB/c小鼠,ELISA检测小鼠血清中特异性抗体,分析该HBc-RBD VLPs的免疫原性。结果:在自诱导培养基中,大肠埃希菌可表达部分可溶的VLPs,经蔗糖密度梯度离心纯化后在透射电子显微镜下可以观察到病毒样颗粒的存在。动物实验表明HBc-RBD VLPs刺激小鼠产生了特异性抗体。结论:在原核表达系统中成功表达了展示RBD抗原的VLPs,并通过小鼠实验初步验证了免疫原性,为新冠病毒疫苗的研发提供了新方向。     

五步蛇毒对小鼠免疫功能的影响

目的探索五步蛇毒对正常小鼠免疫功能的影响。方法将KM小鼠随机分为5组,分别为空白组、五步蛇毒安全范围内低剂量组(30 mg/kg)、五步蛇毒安全范围内中剂量组(60 mg/kg)、五步蛇毒安全范围内高剂量组(120 mg/kg)(以下简称五步蛇毒低、中、高剂量组)以及西洋参组(30 mg/kg),每组10只。各组小鼠每日定时灌胃1次,连续14天。观察小鼠的呼吸、精神状态等生命体征。取小鼠脾脏和胸腺组织称重后,计算小鼠脾脏、胸腺指数;制备脾细胞悬液,采用CCK-8法检测小鼠脾淋巴细胞增殖率,碳粒廓清法检测小鼠吞噬系数α,中性红法检测小鼠腹腔巨噬细胞吞噬率;同时采用二硝基氟苯诱导小鼠迟发型变态反应,检测小鼠耳廓肿胀度。结果小鼠的吞噬系数α在五步蛇毒高剂量组最高(5.56±0.46),高于其余四组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。小鼠腹腔巨噬细胞吞噬率(%)在五步蛇毒中剂量组和西洋参组中较高,分别为(119.07±19.31)%、(124.79±24.93)%,差异有统计学意义(均P<0.05)。小鼠的B淋巴细胞增殖率(%)在五步蛇毒中剂量组和西洋参组中较高,分别为(105.95±14.59)%、(108.14±10.58)%,差异有统计学意义(均P<0.05)。小鼠的T淋巴细胞增殖率(%)在五步蛇毒中、高剂量组中较高,分别为(119.30±20.07)%、(110.85±23.13)%,差异有统计学意义(均P<0.05)。与空白组比较,五步蛇毒中、高剂量组和西洋参组均能显著提高小鼠的耳廓肿胀度,差异有统计学意义(均P<0.05)。与空白组比较,五步蛇毒各剂量组和西洋参组均能显著提高小鼠脾脏指数(均P<0.05)。与空白组比较,各实验组胸腺指数均无明显差异(均P>0.05)。结论口服低于120 mg/kg的五步蛇毒对正常小鼠的免疫功能具有一定的增强作用。     

线叶忍冬开花动态特征与繁育系统研究

为了解线叶忍冬(Lonicera alberti)的开花特性及繁育系统,本研究通过野外调查,记录其花部特征、开花进程及访花昆虫特性,采用TTC、MTT、联苯胺-α萘酚和醋酸洋红四种染色方法测定花粉活力,采用联苯胺—过氧化氢法和MTT两种方法测定其柱头可授性,运用花粉/胚珠比率、杂交指数、人工授粉试验等方法检测线叶忍冬的繁育系统。结果表明:线叶忍冬花朵有花冠裂片逐一展开和花冠裂片同时展开两种开放方式;花粉在散粉后6 h活力达到最高值,柱头可授性在花朵开放后不断增强;膜翅目蜜蜂科意蜂(Apis mellifera L.)在传粉过程中起重要作用;P/O值为583.43±99.9;杂交指数为4;人工授粉套袋试验中人工异株异花授粉结实率为79.17%,自花授粉情况下结实率为9.52%。其繁育系统为混合交配系统,异花传粉需要传粉者。     

天祝白牦牛IGF-2基因的cDNA克隆

旨在克隆天祝白牦牛胰岛素样生长因子2(IGF-2)基因编码区全长cDNA序列,为研究该基因的生理功能奠定基础。运用cDNA末端快速扩增(RACE)技术获得天祝白牦牛IGF-2基因全长cDNA序列。扩增获得天祝白牦牛IGF-2基因全长cDNA序列为1 060 bp(GenBank登录号:KF682139),ORF长540 bp,编码179个氨基酸。其编码的氨基酸与已报道哺乳动物IGF-2氨基酸序列同源性在80%-92%之间。天祝白牦牛IGF-2基因的成功克隆为进一步研究该基因的功能奠定了基础。